胰(yi)蛋bai酶(mei)選(xuan)擇性水解變(bian)性蛋白(bai)質(zhi)中由賴氨酸或精an酸的羧基(ji)所構(gou)成(cheng)的肽鏈，是壹(yi)種重要的消化(hua)酶(mei)。此(ci)外，胰(yi)蛋bai酶(mei)還(hai)廣(guang)泛應用於(yu)膿胸、血胸、外科(ke)炎(yan)癥(zheng)、潰瘍、創(chuang)傷性(xing)損傷等(deng)所產(chan)生的局(ju)部水(shui)腫、血腫及膿腫等的輔助(zhu)治療(liao)。
胰(yi)蛋bai酶(mei)試(shi)劑(ji)盒

胰(yi)蛋bai酶(mei)（Trypsin）試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

分光(guang)光(guang)度(du)法(fa) 50 管(guan) 48 樣(yang)

胰(yi)蛋bai酶(mei)試(shi)劑(ji)盒

正(zheng)式測定前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差異較大的樣(yang)本(ben)做(zuo)預(yu)測(ce)定測定意(yi)義：

胰(yi)蛋bai酶(mei)選(xuan)擇性水解變(bian)性蛋白(bai)質(zhi)中由賴氨酸或精an酸的羧基(ji)所構(gou)成(cheng)的肽鏈，是壹(yi)種重要的消化(hua)酶(mei)。此(ci)外，胰(yi)蛋bai酶(mei)還(hai)廣(guang)泛應用於(yu)膿胸、血胸、外科(ke)炎(yan)癥(zheng)、潰瘍、創(chuang)傷性(xing)損傷等(deng)所產(chan)生的局(ju)部水(shui)腫、血腫及膿腫等的輔助(zhu)治療(liao)。

測(ce)定(ding)原理(li)：

胰(yi)蛋bai酶(mei)催(cui)化(hua)水(shui)解TAME 的酯鍵，釋(shi)放(fang)出(chu)的遊(you)離羧基(ji)與(yu)反(fan)應體系(xi)中的氫(qing)氧化(hua)鈉(na)發生中和反(fan)應，導(dao)致溶液(ye)的pH 值(zhi)降低，以(yi)苯(ben)fen紅為指(zhi)示劑(ji)，測定(ding)溶液在(zai) 555nm 處(chu)吸收(shou)值(zhi)的變(bian)化(hua)，可(ke)以(yi)快速(su)測得(de)胰(yi)蛋bai酶(mei)活性數據。胰(yi)蛋bai酶(mei)在(zai)壹(yi)定(ding)範(fan)圍內(nei)與 555nm 處(chu)吸收(shou)值(zhi)的降低呈良(liang)好(hao)的線性關(guan)系(xi)。

組(zu)成(cheng)：

自備儀(yi)器(qi)和用品(pin)：

紫(zi)外可見分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)、1ml 玻(bo)璃比色(se)皿、臺式離心機、水浴(yu)鍋(guo)、可(ke)調式移液器(qi)、研(yan)缽、冰和蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

粗(cu)酶(mei)液(ye)提(ti)取(qu)：

1、組(zu)織(zhi)樣(yang)品(pin)：

按(an)照(zhao)組(zu)織(zhi)質(zhi)量（g）：提(ti)取(qu)液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液）冰浴(yu)勻漿(jiang)，10000g，4℃離心 10min，取(qu)上清(qing)，即(ji)粗(cu)酶(mei)液(ye)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟(zhou)：

1、分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)預(yu)熱(re) 30min 以上，調節波長(chang)至(zhi) 555nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調零。

工(gong)作液(ye)的配制(zhi)：臨用前(qian)根(gen)據用量按(an)照(zhao)試(shi)劑(ji)壹（V）：試(shi)劑(ji)二（V）：蒸(zheng)餾(liu)水(shui)（V）：試(shi)劑(ji)三（V）=1 ml：1 ml：5.4 ml：0.4 ml 的比例充(chong)分混(hun)合。（註(zhu)意：現(xian)用現(xian)配，用多少(shao)配多少(shao)，在(zai)空(kong)瓶中配制(zhi)，試劑(ji)盒中(zhong)帶(dai)有 4 個(ge)空(kong)瓶）

3. 吸取(qu)25μl樣(yang)本(ben)，加(jia)入(ru)975 μl工(gong)作液(ye)，混(hun)勻後立(li)即(ji)測定，記(ji)錄555nm下1min時的吸光值(zhi)A1和2min時的吸光值(zhi)A2。計(ji)算(suan)△A=A1-A2

註(zhu)意：如果△A小(xiao)於(yu)0.005，可將反(fan)應時間延長到(dao)5min。如果△A大於(yu)0.5，體系(xi)迅(xun)速(su)變(bian)色(se)，可將(jiang)樣(yang)本(ben)用提(ti)取(qu)液稀(xi)釋(shi)後測(ce)定（建議稀(xi)釋(shi)10倍），計(ji)算(suan)公(gong)式中乘(cheng)以(yi)相(xiang)應稀(xi)釋(shi)倍數。

胰(yi)蛋bai酶(mei)活性計(ji)算(suan)公(gong)式：

使用石英比色(se)皿測(ce)定(ding)的計(ji)算(suan)公(gong)式如下(xia)

按(an)蛋白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)

活性單(dan)位定(ding)義：室溫下每毫克蛋白(bai)質(zhi)每分鐘(zhong)催化(hua) 555nm 處(chu)吸光值(zhi)減(jian)少(shao) 1 為 1 個(ge)酶(mei)活單(dan)位。胰(yi)蛋bai酶(mei)（U/mg prot）= △A ×V 反(fan)總 ÷（Cpr×V1）÷T

=40×△A ÷Cpr

按(an)樣(yang)本(ben)質(zhi)量計(ji)算(suan)

活性單(dan)位定(ding)義：室溫每克組(zu)織(zhi)每分鐘(zhong)催化(hua) 555nm 處(chu)吸光值(zhi)減(jian)少(shao) 1 為 1 個(ge)酶(mei)活單(dan)位。胰(yi)蛋bai酶(mei)（U/g 鮮(xian)重）= △A×V 反(fan)總÷（W×V1÷V2）÷T

=40×△A ÷W

Cpr：粗(cu)酶(mei)液(ye)蛋白(bai)質(zhi)濃度(du)（mg/ml），需要另(ling)外測定；W：組(zu)織(zhi)質(zhi)量（g）；V1：加(jia)入(ru)反(fan)應體系(xi)中粗(cu)酶(mei)液(ye)體積（ml），25 μl=0.025 ml；V2：粗(cu)酶(mei)液(ye)總體積（ml），1 ml；V 反(fan)總：反(fan)應總(zong)體積，1 ml；T：反(fan)應時間（min），1 min。

胰(yi)蛋bai酶(mei)試(shi)劑(ji)盒