胃蛋bai酶(mei)可(ke)催化血(xue)紅蛋白(bai)水(shui)解(jie)，水(shui)解(jie)產物(wu)與福林(lin)試(shi)劑反應(ying)後顯藍(lan)色(se)；壹(yi)定(ding)範(fan)圍內，其(qi)顏(yan)色的深淺(qian)與胃蛋bai酶(mei)活性(xing)呈(cheng)正(zheng)比(bi)。
胃蛋bai酶(mei)Pepsin試(shi)劑盒

胃蛋bai酶(mei)（Pepsin）試(shi)劑盒說明書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法 50 管/24 樣(yang)

胃蛋bai酶(mei)Pepsin試(shi)劑盒

正式測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取 2-3 個預期(qi)差(cha)異(yi)較大(da)的樣本做預(yu)測(ce)定測定意(yi)義：

胃蛋bai酶(mei)由(you)胃粘膜主(zhu)細(xi)胞分(fen)泌，分(fen)解(jie)食物(wu)中(zhong)蛋白(bai)質(zhi)成(cheng)小肽(tai)段。壹(yi)般用於(yu)神(shen)經(jing)性(xing)低(di)酸癥(zheng)的鑒(jian)別(bie)，慢性(xing)胃炎、慢性(xing)胃擴張(zhang)、慢性(xing)十二指(zhi)腸(chang)炎(yan)等(deng)癥(zheng)狀(zhuang)時(shi)也(ye)會引起胃蛋bai酶(mei)分(fen)泌的減少(shao)。

測定原(yuan)理(li)：

胃蛋bai酶(mei)可(ke)催化血(xue)紅蛋白(bai)水(shui)解(jie)，水(shui)解(jie)產物(wu)與福林(lin)試(shi)劑反應(ying)後顯藍(lan)色(se)；壹(yi)定(ding)範(fan)圍內，其(qi)顏(yan)色的深淺(qian)與胃蛋bai酶(mei)活性(xing)呈(cheng)正(zheng)比(bi)。

組成(cheng)：

試(shi)劑三(san)：粉劑(ji)×1 瓶，4℃避光保(bao)存(cun)。臨(lin)用前(qian)加入(ru) 25 ml 試(shi)劑二充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)。試(shi)劑四：粉劑(ji)×1 瓶，4℃保(bao)存(cun)。臨(lin)用前(qian)加入(ru) 25 ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)。

試(shi)劑五(wu)：粉(fen)劑×1 瓶，4℃保(bao)存(cun)。臨(lin)用前(qian)加入(ru) 30 ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)。

標準品(pin)：液(ye)體(ti) 1.26ml×1 支，0.5 μ mol/ml 酪an酸標(biao)準溶(rong)液(ye)濃(nong)度 4℃保(bao)存(cun)。

自備儀(yi)器和用品(pin)：

可(ke)見分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計、臺式離(li)心(xin)機(ji)、水(shui)浴(yu)鍋、可(ke)調(tiao)式移(yi)液(ye)器、1ml 玻璃比(bi)色(se)皿、研缽、冰(bing)和蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

粗酶(mei)液(ye)提(ti)取(qu)：

組織(zhi)樣品(pin)：按(an)照組織(zhi)質量(liang)（g）：試(shi)劑壹(yi)體(ti)積(ji)(ml)為 1：5~10 的比例（建(jian)議稱取約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加入 1ml 試(shi)劑壹(yi)）冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿(jiang)，8000g，4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)，即(ji)粗酶(mei)液(ye)。

測定步驟：

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計預熱 30min，調(tiao)節波長(chang)到 580 nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

試(shi)劑三(san)和試(shi)劑四置於(yu) 37℃水(shui)浴(yu)預(yu)熱(re) 30min。

標準管：取玻璃比(bi)色(se)皿，加入(ru) 100μL 標準品(pin)，200μL 試(shi)劑二，600μL 試(shi)劑五(wu)，100μL 試(shi)劑六(liu)，混勻後室溫靜(jing)置 20min，於(yu) 580 nm 測光吸收(shou)，記(ji)為 A 標準管。

空(kong)白(bai)管：取玻璃比(bi)色(se)皿，加入(ru) 100μL 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)，200μL 試(shi)劑二，600μL 試(shi)劑五(wu)，100μL 試(shi)劑六(liu)，混勻後室溫靜(jing)置 20min，於(yu) 580 nm 測光吸收(shou)，記(ji)為 A 空(kong)白(bai)管。

對照(zhao)管：取(qu)EP 管，加(jia)入(ru) 500 μL 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)，置於(yu) 37℃水(shui)浴(yu)保(bao)溫(wen) 10min；加入 500μL 試(shi)劑四，蓋緊後搖勻(yun)1min；加入 100μL 粗酶(mei)液(ye)，混勻後 8000g 4℃離(li)心(xin) 10 分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清(qing)；在(zai)玻璃比(bi)色(se)皿中(zhong)加(jia)入上(shang)清(qing)液(ye) 100μL，再(zai)加入 200μL 試(shi)劑二，600μL 試(shi)劑五(wu)，100μL 試(shi)劑六(liu)，混勻後室溫(wen)靜(jing)置 20min，於(yu) 580 nm 測光吸收(shou)，記(ji)為A對照(zhao)管。

測定管：取(qu)EP 管，加(jia)入(ru) 100μL 粗酶(mei)液(ye)，500 μL 試(shi)劑三(san)，置於(yu) 37℃水(shui)浴(yu)保(bao)溫(wen) 10min；加入 500μL 試(shi)劑四，蓋緊後搖勻(yun) 1min；8000g 4℃離(li)心(xin) 10 分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清(qing)；在(zai)玻璃比(bi)色(se)皿中(zhong)加(jia)入上(shang)清(qing)液(ye) 100μL，再加入(ru) 200μL試(shi)劑二，600μL 試(shi)劑五(wu)，100μL 試(shi)劑六(liu)，混勻後室溫(wen)靜(jing)置 20min，於(yu) 580 nm 測光吸收(shou)，記(ji)為 A 測定管。

註意(yi)：空(kong)白(bai)管和(he)標(biao)準管只需(xu)要(yao)測(ce)定(ding)壹(yi)次(ci)。

計算公(gong)式(shi)：

(1) 按(an)照蛋白(bai)濃(nong)度計(ji)算(suan)

活性(xing)單位定義：37℃每(mei)毫(hao)克蛋白(bai)每(mei)分(fen)鐘(zhong)催化(hua)血(xue)紅蛋白(bai)水(shui)解(jie)生(sheng)成(cheng) 1nmol 酪an酸為 1 個酶(mei)活單位。

胃蛋bai酶(mei)活性(xing)（nmol/min/mg prot）=C 標準品(pin)×（A 測定管－A 對照(zhao)管）÷（A 標準管－A 空(kong)白(bai)管）×稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)÷（Cpr×V1）÷T=5500×（A 測(ce)定管－A 對照(zhao)管）÷（A 標(biao)準管－A 空(kong)白(bai)管）÷Cpr

C 標準品(pin)：標(biao)準品(pin)濃(nong)度，0.5 μ mol/ml 酪(lao)an酸；稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)：（100+500+500）÷100=11；Cpr：粗酶(mei)液(ye)蛋白(bai)質(zhi)濃(nong)度（mg/ml），需(xu)要(yao)另(ling)外(wai)測(ce)定(ding)；V1：加入(ru)反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)粗酶(mei)液(ye)體(ti)積(ji)（ml），100μl=0.1 ml；T：催(cui)化(hua)反應(ying)時(shi)間(jian)（min），10min。

（2）按(an)照樣本質量(liang)計(ji)算(suan)

活性(xing)單位定義：37℃每(mei)克(ke)組織(zhi)每(mei)分(fen)鐘(zhong)催化(hua)血(xue)紅蛋白(bai)水(shui)解(jie)生(sheng)成(cheng) 1nmol 酪an酸為 1 個酶(mei)活單位。

胃蛋bai酶(mei)活性(xing)（nmol/min/g 鮮重(zhong)）=C 標準品(pin)×（A 測(ce)定管－A 對照(zhao)管）÷（A 標(biao)準管－A 空(kong)白(bai)管）×稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)÷（W×V1÷V2）÷T=5500×（A 測(ce)定管－A 對照(zhao)管）÷（A 標(biao)準管－A 空(kong)白(bai)管）÷W

C 標準品(pin)：標(biao)準品(pin)濃(nong)度，0.5 μ mol/ml 酪an酸；稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)：（100+500+500）÷100=11；W：組織(zhi)質量(liang)（g）； V1：加入反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)粗酶(mei)液(ye)體(ti)積(ji)（ml），100μl= 0.1 ml；V2：粗酶(mei)液(ye)總體積(ji)（ml），1ml；T：催(cui)化(hua)反應(ying) 時(shi)間(jian)（min），10min。

註意(yi)事項(xiang):

試(shi)劑三(san)、試(shi)劑四、試(shi)劑五(wu)臨(lin)用前(qian)配制(zhi)，配(pei)制(zhi)好(hao)用不完(wan)的試(shi)劑 4℃可(ke)保(bao)存(cun)壹(yi)周。