糜(mi)蛋bai酶催(cui)化ATEE水解，產(chan)物(wu)在 237 nm 有特(te)征(zheng)光吸(xi)收；通過(guo)測(ce)定(ding) 237 nm 光吸(xi)收增加速(su)率，來(lai)計算(suan)糜(mi)蛋bai酶活性(xing)。
糜(mi)蛋bai酶Chymotrypsin試劑(ji)盒

糜(mi)蛋bai酶（Chymotrypsin）試劑(ji)盒說明(ming)書

分光光度(du)法(fa) 50 管(guan)/48 樣(yang)

糜(mi)蛋bai酶Chymotrypsin試劑(ji)盒

正式測定(ding)前(qian)務必(bi)取(qu) 2-3 個預(yu)期差(cha)異(yi)較大(da)的(de)樣(yang)本(ben)做(zuo)預(yu)測定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)：

糜(mi)蛋bai酶，又稱胰(yi)凝(ning)乳(ru)dan白酶，是胰(yi)腺(xian)分(fen)泌的(de)壹種蛋白水解酶，能迅速(su)分解變(bian)性蛋白質(zhi)。糜(mi)蛋bai酶的(de)功(gong)能與胰(yi)蛋bai酶相似，但是具有分解能力強、毒(du)性低(di)和不良(liang)反應小等優(you)點。臨床上(shang)糜(mi)蛋bai酶用(yong)於痰液(ye)稀化，對(dui)膿性(xing)和非膿性痰(tan)液(ye)均有效(xiao)；也(ye)用(yong)於創傷(shang)或手術後傷(shang)口(kou)愈合，如白(bai)內(nei)障(zhang)摘(zhai)除(chu)。

測定(ding)原(yuan)理：

糜(mi)蛋bai酶催(cui)化ATEE水解，產(chan)物(wu)在 237 nm 有特(te)征(zheng)光吸(xi)收；通過(guo)測(ce)定(ding) 237 nm 光吸(xi)收增加速(su)率，來(lai)計算(suan)糜(mi)蛋bai酶活性(xing)。

組成(cheng)：

試劑(ji)二(er)：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃避光保存(cun)。臨用(yong)前(qian)加(jia)入(ru) 50 ml 蒸餾(liu)水充分(fen)溶解。

自備(bei)儀器(qi)和用(yong)品：

紫(zi)外分(fen)光光度(du)計(ji)、臺(tai)式離心(xin)機、水浴(yu)鍋、可(ke)調式移液(ye)器(qi)、1ml 石英(ying)比色皿(min)、研缽(bo)、冰(bing)和蒸餾(liu)水。

粗酶液(ye)提(ti)取(qu)：

組織(zhi)樣(yang)品(pin)：按(an)照組(zu)織(zhi)質量(liang)（g）：試(shi)劑(ji)壹體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例（建(jian)議稱取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加入(ru) 1ml試(shi)劑(ji)壹）冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿(jiang)，8000g，4℃離心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)，即(ji)粗(cu)酶液(ye)。

測定(ding)步(bu)驟：

分光光度(du)計(ji)預(yu)熱 30min，調(tiao)節(jie)波(bo)長到(dao) 237 nm，蒸餾(liu)水調(tiao)零。

試劑(ji)二(er)置於(yu) 37℃水浴(yu)中保溫 30min。

空白管(guan)：取(qu) 1mL 石英(ying)比色皿(min)，加入 100μL 試(shi)劑壹，1000μL 試劑(ji)二(er)，混(hun)勻(yun)於(yu) 237nm 測定(ding) 4min 內(nei)吸(xi)光值變(bian)化，記(ji)為△A 空白管(guan)。（從(cong)吸(xi)光值穩定(ding)增加開始(shi)計(ji)時）

測定(ding)管(guan)：取(qu) 1mL 石英(ying)比色皿(min)，加入 100μL 粗(cu)酶液(ye)，1000μL 試(shi)劑二(er)，混(hun)勻(yun)於(yu) 237nm 測定(ding) 4min 內(nei)吸(xi)光值變(bian)化，記(ji)為△A 測(ce)定(ding)管(guan)。（從(cong)吸(xi)光值穩定(ding)增加開始(shi)計(ji)時）

註意：空白管(guan)只(zhi)需(xu)要測(ce)定(ding)壹次(ci)。

糜(mi)蛋bai酶活性(xing)計(ji)算(suan)公式：

按(an)照蛋白濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)

活性(xing)單位(wei)定(ding)義(yi)：25℃每(mei)毫(hao)克蛋白每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化吸(xi)光值增加 1 為壹個酶活單(dan)位(wei)。糜(mi)蛋bai酶（U/mg prot）= (△A 測定(ding)管(guan)－△A 空白管(guan)) ×V 反(fan)總÷(Cpr×V1)÷T=2.75×(△A 測(ce)定(ding)管(guan)－△A 空白管(guan))÷Cpr

Cpr：粗酶液(ye)蛋白質(zhi)濃(nong)度(du)（mg/ml），需(xu)要另(ling)外(wai)測定(ding)；V1：加(jia)入(ru)反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)粗酶液(ye)體(ti)積(ji)（ml），100μl=0.1 ml； V 反(fan)總：反(fan)應總體(ti)積(ji)，1100μl=1.1ml；T：反(fan)應時間（min），4min。

按(an)照樣(yang)本(ben)質量計(ji)算(suan)

活性(xing)單位(wei)定(ding)義(yi)：25℃每(mei)克樣(yang)品(pin)每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化吸(xi)光值增加 1 為壹個酶活單(dan)位(wei)。糜(mi)蛋bai酶（U/g 鮮(xian)重）=(△A 測(ce)定(ding)管(guan)－△A 空白管(guan)) ×V 反(fan)總÷(W×V1÷V2)÷T=2.75×(△A 測(ce)定(ding)管(guan)－△A 空白管(guan))÷W

W：樣(yang)品(pin)質量（g）；V1：加(jia)入(ru)反應體(ti)系(xi)中粗(cu)酶液(ye)體(ti)積(ji)（ml），100μl=0.1 ml；V2：粗(cu)酶液(ye)總體(ti)積(ji)（ml）， 1 ml；V 反(fan)總：反(fan)應總體(ti)積(ji)，1100μl=1.1ml；T：反(fan)應時間（min），4min。

註意事項：

臨用(yong)前(qian)配(pei)制的(de)試(shi)劑(ji)配(pei)置好(hao)後 3 天(tian)內(nei)使用(yong)完畢。

糜(mi)蛋bai酶Chymotrypsin試劑(ji)盒