維生(sheng)素(su)B1（Vitamin B1）是構(gou)成脫羧輔酶(mei)的(de)主(zhu)要(yao)成分，參(can)與細(xi)胞(bao)代謝(xie)中(zhong)的(de)三(san)羧(suo)酸循環(huan)，是維持機體(ti)正(zheng)常(chang)代謝(xie)必(bi)須(xu)的(de)水(shui)溶xing維生(sheng)素(su)，在生(sheng)物(wu)體(ti)能量(liang)代謝(xie)中(zhong)有(you)重(zhong)要的(de)作(zuo)用(yong)。
維生(sheng)素(su) B1試(shi)劑(ji)盒(he)

維生(sheng)素(su) B1（Vitamin B1，VB1）試劑盒(he)說(shuo)明(ming)書

分光(guang)光(guang)度(du)法 50 管/48 樣(yang)

維生(sheng)素(su) B1試(shi)劑(ji)盒(he)

正(zheng)式(shi)測定(ding)前務(wu)必(bi)取 2-3 個預(yu)期差異(yi)較(jiao)大的(de)樣(yang)本(ben)做預(yu)測定(ding)測定(ding)意(yi)義：

維生(sheng)素(su)B1（Vitamin B1）是構(gou)成脫羧輔酶(mei)的(de)主(zhu)要(yao)成分，參(can)與細(xi)胞(bao)代謝(xie)中(zhong)的(de)三(san)羧(suo)酸循環(huan)，是維持機體(ti)正(zheng)常(chang)代謝(xie)必(bi)須(xu)的(de)水(shui)溶xing維生(sheng)素(su)，在生(sheng)物(wu)體(ti)能量(liang)代謝(xie)中(zhong)有(you)重(zhong)要的(de)作(zuo)用(yong)。

測定(ding)原(yuan)理：

VB1 在堿(jian)性條(tiao)件(jian)下(xia)還(hai)原鐵(tie)氰(qing)hua鉀(jia)生(sheng)成ya鐵氰(qing)hua鉀(jia)，亞鐵(tie)qing化鉀(jia)與 Fe³⁺在弱酸條件(jian)下(xia)生(sheng)成普(pu)魯士(shi)藍，在 704nm 有特(te)征(zheng)吸收峰(feng)。

組成：

自備儀器(qi)和(he)用(yong)品：

天(tian)平、研缽(bo)、離心機、可(ke)見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計、恒(heng)溫水(shui)浴鍋(guo)、1 ml 玻(bo)璃比色皿、蒸餾水(shui)。

樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)：

組織(zhi)：將(jiang)樣(yang)品磨(mo)碎(sui)，按(an)照質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液體(ti)積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比例(li)（建議(yi)稱取約 0.1g，加(jia)入(ru) 0.6ml提(ti)取液）加(jia)入(ru)提(ti)取液，60℃浸提(ti) 30min，加(jia)蒸餾水(shui) 0.4ml，混勻後於(yu) 25℃，13000g 離心 10min，取上清(qing)測定(ding)（動物(wu)組織(zhi)等蛋(dan)白(bai)含(han)量(liang)較(jiao)高的(de)樣(yang)本(ben)建議離心 20-30 分鐘(zhong)）。

細(xi)胞(bao)：按(an)照細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)（104 個）：提(ti)取液體(ti)積(ji)（ml）為 500~1000：1 的(de)比例(li)（建議(yi) 500 萬細(xi)胞(bao)加(jia)入(ru) 0.6ml提(ti)取液），冰(bing)浴(yu)超(chao)聲波(bo)破(po)碎(sui)細(xi)胞(bao)（功率(lv) 300w，超(chao)聲 3 秒(miao)，間(jian)隔(ge) 7 秒(miao)，總(zong)時間(jian) 3min）；加(jia)蒸餾水(shui) 0.4ml，混勻後於(yu) 25℃，13000g 離心 10min，取上清(qing)測定(ding)。

血清(qing)：直接(jie)測定(ding)。

測定(ding)操(cao)作(zuo)：

計算公(gong)式(shi)：

標準曲(qu)線(xian)：y = 0.017x+0.0031，R2 = 0.9991；x 為標準(zhun)品濃(nong)度(du)：μg/ml；y 為△A（A 測定(ding)管-A 空白(bai)管）

按照蛋(dan)白(bai)含(han)量(liang)計算

VB1 含(han)量(liang)（μg/mg prot）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷Cpr

= 58.8×（△A-0.0031）÷ Cpr

按照樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)計算

VB1 含(han)量(liang)（μg/g 鮮重）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（W÷V 樣(yang)總(zong)）

= 58.8×（△A-0.0031）÷ W

按照細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)計算

VB1 含(han)量(liang)（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)÷V 樣(yang)總(zong)）

= 58.8×（△A-0.0031）÷ 細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)

按照液體(ti)體(ti)積計算

VB1 含(han)量(liang)（μg/ml）=（△A-0.0031）÷ 0.017

= 58.8×（△A-0.0031）

V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提(ti)取液體(ti)積(ji)，1ml； Cpr：蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g

註意(yi)事(shi)項(xiang)：

若測定(ding)結(jie)果中(zhong)吸(xi)光(guang)值(zhi)超(chao)過 1，請(qing)將樣(yang)本(ben)稀(xi)釋後進(jin)行(xing)測定(ding)，並在計算公(gong)式(shi)中(zhong)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)。

蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)較高的(de)樣(yang)品，比如動物(wu)組織(zhi)，若顯色完成後有(you)沈(chen)澱(dian)產(chan)生(sheng)，將樣(yang)本(ben)稀(xi)釋後再測定(ding)，在計算公(gong)式(shi)中(zhong)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)。

顯色完成後立即進行(xing)測定(ding)。

標準曲(qu)線(xian)線(xian)性範(fan)圍(wei)為 0.1-10μg/ml。

維生(sheng)素(su) B1試(shi)劑(ji)盒(he)