VB6 與(yu) 4-氨基(ji)an替(ti)比林(lin)在(zai)強(qiang)氧化劑作用(yong)下(xia)生(sheng)成穩(wen)定的黃色(se)化合物，在 390nm 有(you)特(te)征吸收峰。
維生(sheng)素(su)B6試劑盒(he)

維生(sheng)素(su) B6（Vitamin B6，VB6）試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

分光光度(du)法 50 管(guan)/48 樣(yang)

維生(sheng)素(su)B6試劑盒(he)

正(zheng)式測(ce)定前(qian)務必(bi)取(qu) 2-3 個預期差異較大的樣(yang)本(ben)做(zuo)預測(ce)定測(ce)定意(yi)義(yi)：

維生(sheng)素(su)B6（Vitamin B6）又(you)稱吡(bi)哆素(su)，其包(bao)括(kuo)吡哆(duo)醇、吡(bi)哆(duo)醛及吡(bi)哆胺，在(zai)體(ti)內以磷(lin)酸酯的形(xing)式存(cun)在，是(shi)壹(yi)種(zhong)水(shui)溶(rong)xing維生(sheng)素(su)，在細胞(bao)中參(can)與(yu)多(duo)種(zhong)蛋(dan)白(bai)質(zhi)和(he)氨基(ji)酸(suan)的代謝，對(dui)生(sheng)物(wu)體具(ju)有極(ji)其重要的作(zuo)用(yong)。

測(ce)定原(yuan)理：

VB6 與(yu) 4-氨基(ji)an替(ti)比林(lin)在(zai)強(qiang)氧化劑作用(yong)下(xia)生(sheng)成穩(wen)定的黃色(se)化合物，在 390nm 有特(te)征吸收峰。

組成：

自(zi)備儀器(qi)和(he)用(yong)品(pin)：

天平(ping)、研(yan)缽、離(li)心機、可(ke)見(jian)分光光度(du)計、恒溫水(shui)浴(yu)鍋、1 ml 玻璃(li)比色(se)皿、蒸(zheng)餾水(shui)。

樣(yang)本(ben)處理：

組織(zhi)：將(jiang)樣(yang)品(pin)磨碎，按(an)照質(zhi)量（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體積(ml)為(wei) 1：5~10 的比例（建(jian)議稱取(qu)約(yue) 0.1g，加入(ru) 0.6ml提(ti)取(qu)液(ye)）加入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)，60℃浸提(ti) 30min，加蒸(zheng)餾水(shui) 0.4ml，混勻(yun)後(hou)於(yu) 25℃，16000rpm 離心 10min，取(qu)上清測(ce)定（動(dong)物組織(zhi)等蛋(dan)白(bai)含(han)量較(jiao)高(gao)的樣(yang)本(ben)建(jian)議離心 20-30 分鐘(zhong)）。

細胞(bao)：按(an)照細胞(bao)數量(liang)（104 個）：提(ti)取(qu)液(ye)體積（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例（建(jian)議 500 萬(wan)細胞(bao)加入(ru) 0.6ml提(ti)取(qu)液(ye)），冰浴(yu)超聲波(bo)破碎細胞(bao)（功率 300w，超聲 3 秒(miao)，間(jian)隔 7 秒(miao)，總(zong)時(shi)間(jian) 3min）；加蒸(zheng)餾水(shui) 0.4ml，混勻(yun)後(hou)於(yu) 25℃，16000rpm 離心 10min，取(qu)上清測(ce)定。

血清：直接測(ce)定。

測(ce)定操(cao)作：

計算(suan)公(gong)式：

標準(zhun)曲線：y = 0.3635x+0.0205，R2 = 0.9986

按(an)照蛋(dan)白(bai)含(han)量計(ji)算

VB6 含(han)量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×Cpr）

= 13.76×（△A - 0.0205）÷ Cpr

按(an)照樣(yang)本(ben)質量(liang)計算

VB6 含(han)量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.36359 ×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×W÷V 樣(yang)總(zong)）

= 13.76×（△A - 0.0205）÷ W

按(an)照細胞(bao)數量(liang)計算(suan)

VB6 含(han)量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×細胞(bao)數量(liang)÷V 樣(yang)總(zong)）

= 13.76×（△A - 0.0205）÷ 細胞(bao)數量(liang)

按(an)照液(ye)體體(ti)積計(ji)算(suan)

VB6 含(han)量（μg/ml）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V 反(fan)總÷V 樣(yang)

=13.76×（△A - 0.0205）

V 反(fan)總：反(fan)應總體(ti)積，1ml；：V 樣(yang)：加入(ru)樣(yang)本(ben)體積，0.2ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體積，1ml； Cpr：蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量(liang)，g

註(zhu)意(yi)事項(xiang)：

若(ruo)測(ce)定結(jie)果中吸光值超過 1，請(qing)將(jiang)樣(yang)本(ben)稀釋(shi)後(hou)進(jin)行(xing)測(ce)定，並(bing)在計算(suan)公(gong)式中(zhong)乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。

蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)較高(gao)的樣(yang)品(pin)，比如動(dong)物(wu)組織(zhi)，若(ruo)顯色(se)完成後(hou)有(you)沈(chen)澱(dian)產生(sheng)，將(jiang)樣(yang)本(ben)稀釋(shi)後(hou)再(zai)測(ce)定，在(zai)計算公(gong)式中(zhong)乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。

顯色(se)完成後(hou)立即(ji)進行(xing)測(ce)定。

維生(sheng)素(su)B6試劑盒(he)