強堿性(xing)溶液中，雙縮(suo)脲(niao)與CuSO4 形(xing)成紫(zi)色絡合物；紫(zi)色絡合物顏色的深淺與蛋白(bai)質(zhi)濃度成(cheng)正(zheng)比(bi)，而(er)與蛋白(bai)質(zhi)分子(zi)量及(ji)氨(an)ji酸成(cheng)分無關(guan)，故(gu)可用來(lai)測定(ding)蛋白質(zhi)含量。該方(fang)法(fa)測定(ding)範圍(wei)為(wei) 1~10mg 蛋(dan)白質(zhi)，適(shi)用(yong)於蛋白(bai)質(zhi)濃度高(gao)的(de)樣品(pin)，尤其是動(dong)物材(cai)料
雙(shuang)縮(suo)脲(niao)法(fa)蛋(dan)白(bai)質(zhi)含量測定(ding)試劑盒

雙縮(suo)脲(niao)法(fa)蛋(dan)白(bai)質(zhi)含量測定(ding)試劑盒說明(ming)書

分光(guang)光(guang)度法(fa) 50T/48S

註意(yi)：正式測定(ding)之前選擇 2-3 個預期(qi)差(cha)異(yi)大的樣本(ben)做(zuo)預(yu)測定(ding)，確保蛋白(bai)濃度在 1～10mg/ml 範圍(wei)內(nei)。

測定(ding)意(yi)義：

樣品(pin)可溶性(xing)蛋白質(zhi)含量常(chang)常(chang)用(yong)於酶活(huo)性(xing)計(ji)算。此外(wai)，可溶性(xing)蛋白質(zhi)含量也(ye)用於食(shi)品(pin)等(deng)質(zhi)量分析。

測定(ding)原(yuan)理：

強堿性(xing)溶液中，雙縮(suo)脲(niao)與CuSO4 形(xing)成紫(zi)色絡合物；紫(zi)色絡合物顏色的深淺與蛋白(bai)質(zhi)濃度成(cheng)正(zheng)比(bi)，而(er)與蛋白(bai)質(zhi)分子(zi)量及(ji)氨(an)ji酸成(cheng)分無關(guan)，故(gu)可用來(lai)測定(ding)蛋白質(zhi)含量。該方(fang)法(fa)測定(ding)範圍(wei)為(wei) 1~10mg 蛋(dan)白質(zhi)，適(shi)用(yong)於蛋白(bai)質(zhi)濃度高(gao)的(de)樣品(pin)，尤其是動(dong)物材(cai)料

自備(bei)儀器(qi)和用(yong)品(pin)：

可見分光(guang)光(guang)度計(ji)、臺式離心機(ji)、可調(tiao)式移液器(qi)、1 ml 玻(bo)璃(li)比(bi)色皿(min)、研缽(bo)、冰(bing)和蒸餾水。

組成(cheng)：

標(biao)準品(pin)：液體(ti) 1ml×1 瓶(ping)，5 mg/ml，4℃保存。

樣品(pin)中可溶性(xing)蛋白質(zhi)提(ti)取：

液體(ti)樣品(pin)：澄(cheng)清無色液體(ti)樣品(pin)可以直(zhi)接(jie)測定(ding)。

組織樣品(pin)：按(an)照(zhao)組織質(zhi)量（g）：提(ti)取液體(ti)積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議(yi)稱取約(yue) 0.1g 組織，加入 1ml 提(ti)取液（自備(bei)，根據需(xu)要(yao)選(xuan)用酶(mei)提(ti)取緩沖液或者(zhe)蒸(zheng)餾水或者(zhe)生(sheng)理(li)鹽水）冰(bing)浴勻漿，8000g，4℃離(li)心 10min，取(qu)上清，即(ji)待測液。（動(dong)物樣品(pin)常(chang)常(chang)需(xu)要(yao)稀(xi)釋）

細菌(jun)、真(zhen)菌(jun)：按(an)照細胞(bao)數量（104 個）：提(ti)取液體(ti)積(ji)（ml）為 500~1000：1 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬細胞(bao)加入1ml 提(ti)取液），冰(bing)浴(yu)超聲(sheng)波(bo)破(po)碎(sui)細胞(bao)（功(gong)率(lv) 300w，超聲(sheng) 3 秒，間(jian)隔(ge) 7 秒(miao)，總(zong)時間(jian) 3min）；然後 8000g，4℃，離心 10min，取(qu)上清置於冰上待測。

測定(ding)步驟：

分光(guang)光(guang)度計(ji)預熱(re) 30 min，調(tiao)節波(bo)長(chang)到(dao) 540 nm，蒸(zheng)餾水調(tiao)零(ling)。

空白管(guan)：取 1 mL 玻(bo)璃(li)比(bi)色皿(min)，加入 200μl 蒸(zheng)餾水，1000μl 試(shi)劑壹，混(hun)勻(yun)後室溫靜置 15 min，於 540nm 比(bi)色，記為 A 空白管(guan)。

標(biao)準管(guan)：取 1 mL 玻(bo)璃(li)比(bi)色皿(min)，加入 200μl 標(biao)準液，1000μl 試(shi)劑壹，混(hun)勻(yun)後室溫靜置 15 min，於 540 nm 比(bi)色，記為 A 標(biao)準管(guan)。

測定(ding)管(guan)：取 1 mL 玻(bo)璃(li)比(bi)色皿(min)，加入 200μl 待測液，1000μl 試(shi)劑壹，混(hun)勻(yun)後室溫靜置 15 min，於 540nm 比(bi)色，記為 A 測定(ding)管(guan)。

註意(yi)：空白管(guan)和標(biao)準管(guan)只需測定(ding)壹次(ci)。

樣品(pin)中蛋白(bai)質(zhi)濃度計(ji)算公式

C 待測（mg/mL）= C 標(biao)準管(guan)×(A 測定(ding)管(guan)－A 空白管(guan))÷(A 標(biao)準管(guan)－A 空白管(guan))

=5×(A 測定(ding)管(guan)－A 空白管(guan))÷(A 標(biao)準管(guan)－A 空白管(guan))

註意(yi)事(shi)項：

樣品(pin)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度須(xu)在 1~10mg/ml 範(fan)圍(wei)內(nei)，低(di)於 1mg/ml 不(bu)能用此(ci)法(fa)，高(gao)於 10mg/ml 須(xu)做(zuo)相(xiang)應稀(xi)釋(shi)。因(yin)此測定(ding)前用 1~2 個樣做預實(shi)驗(yan)，確保蛋白(bai)濃度在 1~10mg/ml 範(fan)圍(wei)內(nei)。

待測樣品(pin)蛋(dan)白(bai)提(ti)取可用生(sheng)理(li)鹽水、雙(shuang)蒸水或不(bu)含蛋白(bai)的 PBS 提(ti)取。該法(fa)受硫酸銨、Tris 緩沖液幹(gan)擾(rao)，提(ti)取液中應不(bu)含這(zhe)些物質(zhi)；否則(ze)改(gai)用BCA 蛋(dan)白質(zhi)含量測定(ding)試劑盒。

雙縮(suo)脲(niao)法(fa)蛋(dan)白(bai)質(zhi)含量測定(ding)試劑盒