氧(yang)自(zi)由(you)基作(zuo)用於脂(zhi)質的(de)不飽(bao)和(he)脂(zhi)肪(fang)酸(suan)，生成過氧(yang)化(hua)脂質(zhi)；後(hou)者逐(zhu)漸分解為(wei)壹(yi)系(xi)列(lie)復雜(za)的(de)化(hua)合物(wu)，其(qi)中包(bao)括(kuo)MDA。通(tong)過(guo)檢(jian)測(ce)MDA 的(de)水(shui)平(ping)即可(ke)檢(jian)測(ce)脂(zhi)質氧(yang)化(hua)的(de)水(shui)平(ping)。
丙二(er)醛含量試劑(ji)盒 氧(yang)化(hua)

丙(bing)二(er)醛(malondialdehyde，MDA)含量試劑(ji)盒說明(ming)書

微(wei)量(liang)法(fa) 100 管(guan)/96 樣

丙(bing)二(er)醛含量試劑(ji)盒 氧(yang)化(hua)

正(zheng)式測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個預期差異較(jiao)大(da)的(de)樣本做預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義(yi)：

氧(yang)自(zi)由(you)基作(zuo)用於脂(zhi)質的(de)不飽(bao)和(he)脂(zhi)肪(fang)酸(suan)，生成過氧(yang)化(hua)脂質(zhi)；後(hou)者逐(zhu)漸分解為(wei)壹(yi)系(xi)列(lie)復雜(za)的(de)化(hua)合物(wu)，其(qi)中包(bao)括(kuo)MDA。通(tong)過(guo)檢(jian)測(ce)MDA 的(de)水(shui)平(ping)即可(ke)檢(jian)測(ce)脂(zhi)質氧(yang)化(hua)的(de)水(shui)平(ping)。

測(ce)定(ding)原(yuan)理(li)：

MDA 與(yu)硫代(dai)巴(ba)bi妥(tuo)酸(suan)(thiobarbituric acid，TBA)縮(suo)合，生(sheng)成紅色產物，在 532nm 有(you)最(zui)大(da)吸收(shou)峰，進(jin)行(xing)比色後(hou)可(ke)估測(ce)樣品(pin)中過(guo)氧(yang)化(hua)脂質(zhi)的(de)含量(liang)；同(tong)時測(ce)定(ding) 600nm 下(xia)的(de)吸光度，利(li)用 532nm 與(yu) 600nm 下(xia)的(de)吸光度的(de)差值計算MDA 的(de)含量(liang)。

試(shi)劑的(de)組成和配置(zhi)：

自(zi)備(bei)儀器和用品(pin)：

可(ke)見分(fen)光光度計(ji)/酶標(biao)儀、水(shui)浴鍋、臺(tai)式離(li)心機、可(ke)調(tiao)式移(yi)液器、微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比色皿/96 孔板、研(yan)缽、冰(bing)和蒸餾水(shui)

註(zhu)意事項(xiang)

臨用(yong)前(qian)註(zhu)意試(shi)劑(ji)壹(yi)是否wan全(quan)溶解，如未(wei)溶解，可以(yi) 70℃-90℃加熱，並振(zhen)蕩(dang)以(yi)促進溶解。

MDA 提(ti)取(qu)：

1、細(xi)菌(jun)、細胞(bao)或(huo)組織(zhi)樣品(pin)的(de)制備(bei)：

2、細(xi)菌(jun)或培養細胞(bao)：先收(shou)集細菌(jun)或細(xi)胞(bao)到(dao)離心(xin)管(guan)內(nei)，離心(xin)後(hou)棄(qi)上(shang)清；按(an)照細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)數量（104 個）：提取(qu)液體(ti)積（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)加入(ru) 1ml 提取(qu)液），超(chao)聲波破(po)碎(sui)細菌(jun)或細(xi)胞(bao)（冰(bing)浴，功率(lv) 20％或 200W，超(chao)聲 3s，間隔 10s，重(zhong)復 30 次(ci)）；8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清，置(zhi)冰(bing)上待(dai)測(ce)。

3、組織(zhi)：按(an)照組織(zhi)質量（g）：提(ti)取(qu)液體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建(jian)議(yi)稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組織(zhi)，加入(ru) 1ml提取(qu)液），進(jin)行(xing)冰(bing)浴勻(yun)漿。8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清，置(zhi)冰(bing)上待(dai)測(ce)。 4、血清（漿(jiang)）樣品(pin)：直(zhi)接檢(jian)測(ce)。

測(ce)定(ding)步驟：

1、吸(xi)取(qu) 0.3ml 試劑(ji)壹(yi)於 1.5ml 離(li)心管(guan)中，再(zai)加入(ru) 0.1ml 樣本, 混勻(yun)。

2、95℃水(shui)浴中保溫 30min（蓋緊(jin)，防(fang)止(zhi)水(shui)分散失），置於冰(bing)浴中冷卻(que)，10000g，25℃，離(li)心 10min。

3、吸(xi)取(qu) 200μl 上清液(ye)於微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比色皿或 96 孔板中，測(ce)定(ding) 532nm 和 600nm 處(chu)的(de)吸光度，記(ji)為(wei)A532和A600，ΔA= A532-A600。

MDA 含(han)量計(ji)算(suan)：

用(yong)微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比色皿測(ce)定(ding)的(de)計算(suan)公(gong)式如下(xia)

1、血清（漿(jiang)）中MDA 含(han)量(liang)的(de)計算(suan)：

MDA 含(han)量(nmol/ ml)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=25.8×ΔA 2、細(xi)菌(jun)、細胞(bao)或(huo)動(dong)物(wu)組織(zhi)中 MDA 含(han)量(liang)計算(suan)

按(an)照蛋(dan)白濃(nong)度計(ji)算

MDA 含(han)量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣)=25.8× ΔA ÷Cpr

需要另(ling)外(wai)測(ce)定(ding)，建(jian)議(yi)使用(yong)本公司BCA 蛋(dan)白質(zhi)含(han)量測(ce)定(ding)試劑(ji)盒。

按(an)照樣品(pin)質(zhi)量計算(suan)

MDA 含(han)量(nmol/g 鮮重(zhong))=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總(zong))=25.8×ΔA ÷W (3 ) 按(an)照細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)密度計(ji)算：

MDA 含(han)量(nmol/104)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總(zong))=0.0516×ΔA

V 反總：反應體系(xi)總體(ti)積， 4×10-4 L；ε：丙(bing)二(er)醛摩爾消(xiao)光系(xi)數，155×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑(jing)， 1cm；V 樣：加入(ru)樣本體積，0.1 ml；V 樣總(zong)：加入(ru)提取(qu)液體(ti)積，1 ml；Cpr：樣本蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細胞或(huo)細(xi)菌(jun)總數(shu)，500 萬。

用(yong) 96 孔板測(ce)定(ding)的(de)計算(suan)公(gong)式如下(xia)

1、血清（漿(jiang)）中MDA 含(han)量(liang)的(de)計算(suan)：

MDA 含(han)量(nmol/ ml)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=51.6×ΔA 2、細(xi)菌(jun)、細胞(bao)或(huo)動(dong)物(wu)組織(zhi)中 MDA 含(han)量(liang)計算(suan)

按(an)照蛋(dan)白濃(nong)度計(ji)算

MDA 含(han)量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣)=51.6×ΔA÷Cpr需要另(ling)外(wai)測(ce)定(ding)，建(jian)議(yi)使用(yong)本公司BCA 蛋(dan)白質(zhi)含(han)量測(ce)定(ding)試劑(ji)盒。

按(an)照樣品(pin)質(zhi)量計算(suan)

MDA 含(han)量(nmol/g 鮮重(zhong))=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總(zong))=51.6×ΔA÷W (3 ) 按(an)照細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)密度計(ji)算：

MDA 含(han)量(nmol/104)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總(zong))=0.1032×ΔA

V 反總：反應體系(xi)總體(ti)積，4×10-4 L；ε：丙(bing)二(er)醛摩爾消(xiao)光系(xi)數，155×103 L / mol /cm；d：96 孔(kong)板光徑(jing)， 0.5cm；V 樣：加入(ru)樣本體積，0.1 ml；V 樣總(zong)：加入(ru)提取(qu)液體(ti)積，1 ml；Cpr：樣本蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度，mg/ml； W：樣本質量，g；500：細胞或(huo)細(xi)菌(jun)總數(shu)，500 萬。

丙(bing)二(er)醛含量試劑(ji)盒 氧(yang)化(hua)