NADK（EC 2.7.1.23）廣泛(fan)存在於(yu)動物、植(zhi)物(wu)、微(wei)生(sheng)物(wu)和(he)培(pei)養細(xi)胞(bao)中，是目前(qian)所(suo)發(fa)現(xian)的(de)生(sheng)物(wu)體內惟(wei)壹(yi)能夠催(cui)化NAD+磷(lin)酸化(hua)生(sheng)成(cheng)NADP+的酶(mei)，可催(cui)化 NAD(H)以(yi)ATP 或無機多(duo)聚(ju)磷(lin)酸[poly(P)]作(zuo)為磷(lin)酰(xian)基(ji)供體進行(xing)磷(lin)酸化(hua)反應，生(sheng)成(cheng) NADP(H)。因此，NAD 激酶(mei)在(zai)合(he)成(cheng)NADP(H)以及(ji)調節NAD(H)與(yu)NADP(H)的(de)平衡上(shang)具(ju)有(you)重(zhong)要(yao)作
NAD 激酶kinase NADK試(shi)劑(ji)盒(he) 輔酶Ⅰ

NAD 激酶（NAD kinase, NADK）試(shi)劑(ji)盒(he)說明書(shu)

分光光(guang)度(du)法 50 管(guan)/24 樣

NAD 激酶kinase NADK試(shi)劑(ji)盒(he) 輔酶Ⅰ

正式測定(ding)前務必(bi)取 2-3 個預(yu)期差(cha)異較大(da)的(de)樣(yang)本(ben)做預(yu)測定(ding)測定(ding)意義：

NADK（EC 2.7.1.23）廣泛(fan)存在於(yu)動物、植(zhi)物(wu)、微(wei)生(sheng)物(wu)和(he)培(pei)養細(xi)胞(bao)中，是目前(qian)所(suo)發(fa)現(xian)的(de)生(sheng)物(wu)體內惟(wei)壹(yi)能夠催(cui)化NAD⁺磷(lin)酸化(hua)生(sheng)成(cheng)NADP+的酶，可催(cui)化 NAD(H)以ATP 或無機多(duo)聚(ju)磷(lin)酸[poly(P)]作(zuo)為磷(lin)酰(xian)基(ji)供體進行(xing)磷(lin)酸化(hua)反應，生(sheng)成(cheng) NADP(H)。因此，NAD 激酶(mei)在(zai)合(he)成(cheng)NADP(H)以及(ji)調節NAD(H)與(yu)NADP(H)的(de)平衡上(shang)具(ju)有(you)重(zhong)要(yao)作用。

測定(ding)原理(li)：

NADK 催(cui)化NAD⁺磷(lin)酸化(hua)，生(sheng)成(cheng) NADP⁺；NADP⁺可被(bei) 6-磷(lin)酸葡(pu)萄(tao)糖脫氫(qing)酶還原為NADPH；在 340 nm下(xia)測定(ding)NADPH 增加速率。可反映出(chu) NADK 活(huo)性(xing)的大(da)小。

組(zu)成(cheng)：

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用品(pin)：

可見(jian)分(fen)光光度(du)計、恒溫水浴鍋(guo)、臺式離心(xin)機(ji)、可調式移液(ye)器、1 ml 玻(bo)璃(li)比色(se)皿(min)和(he)蒸(zheng)餾水(shui)。

樣本(ben)測定(ding)的準備(bei)：

1、細(xi)菌(jun)、細(xi)胞(bao)或組(zu)織樣(yang)品的(de)制備(bei)：

細(xi)菌(jun)或培(pei)養細(xi)胞(bao)：先收(shou)集(ji)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)到離心(xin)管(guan)內，離心(xin)後棄(qi)上(shang)清；按(an)照細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)（104 個）：提(ti)取液體積(ji)（ml）為 500~1000：1 的(de)比例（建議(yi) 500 萬細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)加入(ru) 1ml 提取液），超聲(sheng)波(bo)破碎細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)（冰(bing)浴，功(gong)率 20％或 200W，超聲(sheng) 3s，間(jian)隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待(dai)測。

組(zu)織：按(an)照組(zu)織質量（g）：提取液體積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比例（建議(yi)稱取約 0.1g 組(zu)織，加(jia)入 1ml 提(ti)取液），進行(xing)冰(bing)浴勻(yun)漿(jiang)。8000g 4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待(dai)測。

2、血清（漿(jiang)）樣品：直(zhi)接(jie)檢測。

測定(ding)步驟

1、分光光(guang)度(du)計預(yu)熱(re) 30min 以(yi)上(shang)，調節波(bo)長(chang)至(zhi) 340nm，蒸(zheng)餾水(shui)調零(ling)。

2、將試(shi)劑(ji)壹(yi)和試(shi)劑(ji)二(er) 37℃（哺(bu)乳(ru)動物）或 25℃（其(qi)它(ta)物種）水(shui)浴 15min 以(yi)上(shang)。

3、工(gong)作(zuo)液(ye)Ⅰ的配制(zhi)：在試(shi)劑(ji)三(san)中(zhong)加(jia)入 12ml 試(shi)劑(ji)壹(yi)，充(chong)分(fen)混(hun)勻待(dai)用；用不完(wan)的(de)試(shi)劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保(bao)存(cun)，禁止(zhi)反復凍融；

工(gong)作(zuo)液(ye)Ⅱ的配制(zhi)：在試(shi)劑(ji)四(si)中(zhong)加(jia)入 45ml 試(shi)劑(ji)二(er)，充(chong)分(fen)混(hun)勻待(dai)用；用不完(wan)的(de)試(shi)劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保(bao)存(cun)，禁止(zhi)反復凍融；

4、加樣表(biao)

充(chong)分(fen)混(hun)勻，37℃（哺(bu)乳(ru)動物）或 25℃（其(qi)它(ta)物種）水(shui)浴 15min，立即煮(zhu)沸 2min（蓋緊，防止水分(fen)散失(shi)）冰(bing)浴冷(leng)卻(que)，10000g，25℃離心(xin) 10min，取上(shang)清

加完試(shi)劑(ji)混(hun)勻，室(shi)溫靜(jing)置 15min，340nm 下(xia)測定(ding)吸光值，ΔA=A 測定(ding)-A 對(dui)照(zhao)。

NADK 活性計(ji)算(suan)：

1、血清（漿(jiang)）NADK 活力的(de)計算:

單位(wei)的(de)定(ding)義：每 ml 血清（漿(jiang)）每分鐘生(sheng)成(cheng) 1 nmol 的NADP 定(ding)義為壹(yi)個酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。

NADK（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=53.59×ΔA 2、組(zu)織、細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)中 NADK 活(huo)力的計算:

按(an)樣本(ben)蛋白濃度計算(suan)：

單位(wei)的(de)定(ding)義：每mg 組(zu)織蛋(dan)白每分鐘生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADP 定(ding)義為壹(yi)個酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。

NADK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr

按(an)樣本(ben)鮮重(zhong)計算(suan)：

單位(wei)的(de)定(ding)義：每g 組(zu)織每分鐘生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADP 定(ding)義為壹(yi)個酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。

NADK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=53.59×ΔA÷W

按(an)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)密度(du)計算：

單位(wei)的(de)定(ding)義：每 1 萬個細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)每分鐘生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADP 定(ding)義為壹(yi)個酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。

NADK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=0.107×ΔA

V 反總(zong)：反應體系總(zong)體積(ji)，5×10-4 L；ε：NADPH 摩爾(er)消(xiao)光(guang)系(xi)數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比(bi)色(se)皿(min)光(guang)徑(jing)， 1cm；V 樣(yang)：加入樣本(ben)體積(ji)，0.1 ml；V 樣總(zong)：加入(ru)提(ti)取液體積(ji)，1 ml；T：反應時(shi)間(jian)，15 min；Cpr：樣本(ben)蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本(ben)質量，g；500：細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)總(zong)數(shu)，500 萬。

NAD 激酶kinase NADK試(shi)劑(ji)盒(he) 輔酶Ⅰ