乙醛tuo氫(qing)酶(mei) (EC 1.2.1.10)是(shi)醛(quan)脫氫(qing)酶(mei)的(de)壹(yi)種(zhong)，廣(guang)泛存在於(yu)各種(zhong)動物(wu)、植物(wu)和微生(sheng)物(wu)體內(nei)。主要作(zuo)用(yong)是(shi)將(jiang)乙醛氧(yang)化成(cheng)乙酸(suan)，在酒(jiu)精(jing)代(dai)謝中(zhong)起主要作(zuo)用(yong)。
乙醛tuo氫(qing)酶(mei)試劑(ji)盒 輔酶(mei)Ⅰ

乙醛tuo氫(qing)酶(mei)（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）試劑(ji)盒說明書

分(fen)光光度法(fa) 50 管(guan)/48 樣(yang)

乙醛tuo氫(qing)酶(mei)試劑(ji)盒 輔酶(mei)Ⅰ

正(zheng)式(shi)測(ce)定前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個預期(qi)差異(yi)較大的(de)樣(yang)本(ben)做預(yu)測(ce)定測(ce)定意(yi)義(yi)：

乙醛tuo氫(qing)酶(mei) (EC 1.2.1.10)是(shi)醛(quan)脫氫(qing)酶(mei)的(de)壹(yi)種(zhong)，廣(guang)泛存在於(yu)各種(zhong)動物(wu)、植物(wu)和微生(sheng)物(wu)體內(nei)。主要作(zuo)用(yong)是(shi)將(jiang)乙醛氧(yang)化成(cheng)乙酸(suan)，在酒(jiu)精(jing)代(dai)謝中(zhong)起主要作(zuo)用(yong)。在人(ren)類(lei)和許多(duo)動物(wu)體內(nei)，線(xian)粒體(ti)乙醛tuo氫(qing)酶(mei)能(neng)把(ba)對生(sheng)物(wu)體有(you)害(hai)的(de)醇(chun)類(lei)轉(zhuan)化，所以在細(xi)胞解(jie)毒(du)研究中乙醛tuo氫(qing)酶(mei)受(shou)到高度關(guan)註(zhu)；同時(shi)，乙醛tuo氫(qing)酶(mei)在分(fen)子生(sheng)物(wu)學以及相關(guan)疾病(bing)的(de)檢測(ce)方面(mian)有(you)較廣泛的(de)研(yan)究應用(yong)。

測(ce)定原(yuan)理(li)：

在輔(fu)酶(mei)Ⅰ存在的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)，乙醛tuo氫(qing)酶(mei)催化乙醛和 NAD+轉(zhuan)化為(wei)乙酸(suan)和NADH，在 340nm 處(chu)的(de)吸(xi)光值(zhi)會(hui)增(zeng)加，測(ce)定 340nm 處(chu)的(de)吸(xi)光值(zhi)變化，可計(ji)算得(de)到乙醛tuo氫(qing)酶(mei)的(de)活性。

組(zu)成(cheng)：

自備儀(yi)器(qi)和用(yong)品：

天(tian)平(ping)、離(li)心(xin)機(ji)、恒(heng)溫水(shui)浴鍋、紫(zi)外分(fen)光光度計(ji)、1ml 石(shi)英(ying)比色皿(min)、蒸餾(liu)水(shui)。

ALDH 提(ti)取(qu)：

組(zu)織(zhi)：按照組織質(zhi)量(liang)（g）：提取(qu)液(ye)體積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約 0.1g 組織，加入(ru) 1ml 提取(qu)液(ye)）進(jin)行冰浴勻漿，然(ran)後，10000g，4℃，離(li)心(xin) 20min。

細(xi)胞：按照(zhao)細(xi)胞數量(liang)（104 個）：提取液體(ti)積(ji)（ml）為 500~1000：1 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬(wan)細胞加入(ru) 1ml提取(qu)液(ye)），冰浴超聲波破(po)碎細(xi)胞（功率(lv) 300w，超(chao)聲 3 秒，間(jian)隔(ge) 7 秒，總時(shi)間(jian) 3min）；然(ran)後 10000g，4℃，離(li)心(xin) 10min，取(qu)上清置於(yu)冰上待測(ce)。

液(ye)體(ti)：直接(jie)檢測(ce)。

測(ce)定操(cao)作表(biao)：

ALDH 酶(mei)活計算：

按(an)蛋(dan)白濃度計算(suan)

酶(mei)活定義(yi)：每毫(hao)克蛋白每分(fen)鐘(zhong)催化還(hai)原(yuan) 1nmol NAD+的(de)酶(mei)量(liang)為 1 個酶(mei)活單位。

ALDH 酶(mei)活（nmol/min/mg prot）=

按(an)樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)計算(suan)

A ×V 反總÷（V 樣×Crp）÷T= 804×△A÷Cpr

 d

酶(mei)活定義(yi)：每克樣品每分(fen)鐘(zhong)催化還(hai)原(yuan) 1nmol NAD+的(de)酶(mei)量(liang)為 1 個酶(mei)活單位。

ALDH 酶(mei)活（nmol/min/g 鮮重）=

按(an)照(zhao)細胞數量(liang)計算(suan)

A ×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣(yang)總）÷T = 804×△A÷W

 d

酶(mei)活定義(yi)：每 104 個細胞每分(fen)鐘(zhong)催化還(hai)原(yuan) 1nmol NAD+的(de)酶(mei)量(liang)為 1 個酶(mei)活單位。

ALDH 酶(mei)活（nmol/min/104cell）=數量(liang)（萬(wan)個）

按(an)液(ye)體體積(ji)計算

A ×V 反總÷（V 樣÷V 樣(yang)總×細胞數量(liang)（萬(wan)個））÷T= 804×△A÷細胞

 d

酶(mei)活定義(yi)：每ml 樣(yang)本(ben)每分(fen)鐘(zhong)催化還(hai)原(yuan) 1nmol NAD+的(de)酶(mei)量(liang)為 1 個酶(mei)活單位。

ALDH 酶(mei)活（nmol/min/ml）=

A ×V 反總÷V 樣÷T= 804×△A

 d

：NADH 微摩爾(er)消光系數，6.22×10-3 L/µmol /cm；d：比(bi)色皿(min)光徑，1cm；V 反總：反應體系總體積(ji)，1ml；

V 樣(yang)：反應體系中(zhong)樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.2ml；Cpr：樣本(ben)蛋白(bai)濃度(du)，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量(liang)，g，T：反應時(shi)間(jian)：1min

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