ADH 是生(sheng)物體(ti)內(nei)短鏈(lian)醇(chun)代謝(xie)的關(guan)鍵酶(mei)，催化乙(yi)醇(chun)與乙(yi)醛可(ke)逆轉(zhuan)換，在(zai)很多(duo)生(sheng)理過程(cheng)中(zhong)起著(zhe)重(zhong)要(yao)作(zuo)用。
乙醇(chun)脫氫酶(mei)活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒(he) 輔(fu)酶(mei)Ⅰ

乙(yi)醇(chun)脫氫酶(mei)（alcohol dehydrogenase，ADH）活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒(he)說明(ming)書

分(fen)光(guang)光(guang)度法 50 管(guan)/48 樣

乙(yi)醇(chun)脫氫酶(mei)活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒(he) 輔(fu)酶(mei)Ⅰ

註(zhu)意：正式測(ce)定(ding)之前選擇 2-3 個預(yu)期差(cha)異大的樣(yang)本做(zuo)定(ding)。測(ce)定(ding)意義：

ADH 是生(sheng)物體(ti)內(nei)短鏈(lian)醇(chun)代謝(xie)的關(guan)鍵酶(mei)，催化乙(yi)醇(chun)與乙(yi)醛可(ke)逆轉(zhuan)換，在(zai)很多(duo)生(sheng)理過程(cheng)中(zhong)起著(zhe)重(zhong)要(yao)作(zuo)用。哺(bu)乳(ru)動(dong)物(wu)ADH 主要(yao)在(zai)肝(gan)臟生(sheng)成(cheng)，肝(gan)臟損傷導(dao)致ADH 釋(shi)放到血清(qing)中(zhong)。血清(qing)ADH 活(huo)性(xing)高低(di)反映(ying)了(le)肝(gan)功(gong)能是否異常(chang)。

測(ce)定(ding)原理：

ADH 催(cui)化NADH 還原乙醛(quan)生(sheng)成(cheng)乙醇(chun)和NAD⁺，NADH 在(zai) 340nm 處(chu)有(you)吸收(shou)峰，而 NAD⁺沒有；測定 340nm吸(xi)光(guang)度下降(jiang)速(su)率(lv)，來計(ji)算(suan)ADH 活(huo)性(xing)。

組(zu)成(cheng)：

試(shi)劑三(san)：粉(fen)劑×2 瓶，－20℃保存(cun)。臨(lin)用前加入(ru) 22ml 試(shi)劑二，現配現用。

自(zi)備(bei)儀器和用品(pin)：

研(yan)缽(bo)、冰(bing)、低(di)溫(wen)離(li)心(xin)機、紫(zi)外分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)、1ml 石英比(bi)色皿(min)、可調式(shi)移(yi)液器和蒸餾(liu)水(shui)。

粗酶(mei)液提取：

1、組(zu)織(zhi)：按照組(zu)織質量(liang)（g）：試(shi)劑壹體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi)稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組織，加(jia)入(ru) 1ml 試(shi)劑壹）進(jin)行冰(bing)浴(yu)勻漿。16000g，4℃離(li)心(xin) 20min，取上清(qing)置冰(bing)上待(dai)測。

2、細(xi)菌(jun)、真菌(jun)：按照細(xi)胞數量(liang)（104 個(ge)）：試(shi)劑壹體(ti)積（ml）為(wei) 500~1000：1 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬細(xi)胞加入(ru) 1ml 試(shi)劑壹），冰(bing)浴(yu)超聲波破(po)碎(sui)細(xi)胞（功(gong)率(lv) 300w，超(chao)聲 3 秒(miao)，間隔 7 秒(miao)，總時間(jian) 3min）；16000g， 4℃離(li)心(xin) 20min，取上清(qing)液置冰(bing)上待(dai)測。

3、血清(qing)等液體：直接(jie)測定(ding)。

ADH 測(ce)定(ding)操作(zuo)：

分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)預(yu)熱 30 min，調節(jie)波長到 340 nm，蒸餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

試(shi)劑三(san)在(zai) 25℃水(shui)浴(yu)中(zhong)保溫(wen) 30 min。

在(zai) 1ml 石英比(bi)色皿(min)中(zhong)依(yi)次加(jia)入(ru) 100μl 樣本上清(qing)液、800μl 試(shi)劑三(san)和 100μl 試(shi)劑四，迅(xun)速混(hun)勻後於 340nm

測(ce)定(ding)吸光(guang)值(zhi)變化，分(fen)別記(ji)錄 15s 和(he) 75s 時吸(xi)光(guang)值(zhi)，分別記(ji)為(wei)A1 和A2。△A 測定管(guan)=A1-A2。

計(ji)算(suan)公(gong)式：

按(an)照蛋白濃度計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)定(ding)義：25℃中(zhong)每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADH 為(wei) 1 個酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反(fan)總(zong)×109) ÷(Cpr×V 樣)÷T

=1608×△÷Cpr

按(an)照樣(yang)本質量(liang)計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)定(ding)義：25℃中(zhong)每克組織(zhi)每分(fen)鐘氧化 1nmol NADH 為(wei) 1 個酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

ADH (nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)) =(△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=1608×△A÷W

按(an)細(xi)胞數量(liang)計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)定(ding)義：25℃中(zhong)每 104 個(ge)細(xi)胞每分鐘氧化 1nmol NADH 為(wei) 1 個酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V 反(fan)總(zong)×109)÷(細胞數量(liang)×V 樣(yang)÷V 樣總)÷T

=1608×△A ÷細(xi)胞數量(liang)

按(an)液體體積計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)定(ding)義：25℃中(zhong)每毫升(sheng)血清(qing)每分(fen)鐘氧化 1nmol NADH 為(wei) 1 個酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

ADH (nmol/min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反(fan)總(zong)×109) ÷V 樣÷T

=1608×△A

ε：NADH 摩爾(er)消(xiao)光(guang)系數，6.22×103L/mol/cm；d：比(bi)色皿(min)光(guang)徑，1 cm；V 反總：反應(ying)體系總體(ti)積，1000μl=0.001 L；Cpr：上清(qing)液蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量(liang)，g；V 樣(yang)：加入(ru)反應(ying)體系中(zhong)上清(qing)液體積，100μl=0.1 ml； T：反應(ying)時間，1min。

乙(yi)醇(chun)脫氫酶(mei)活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒(he) 輔(fu)酶(mei)Ⅰ