甲(jia)醛是(shi)壹(yi)種能(neng)與蛋(dan)白質(zhi)、核(he)酸和(he)脂(zhi)類(lei)產生非(fei)特異(yi)性反應的活(huo)潑(po)化合(he)物(wu)，對(dui)所有(you)生(sheng)物(wu)都(dou)具(ju)有(you)很高毒性。甲(jia)醛脫(tuo)氫(qing)酶(mei)作為(wei)含鋅(xin)中等(deng)鏈(lian)醇(chun)脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（ADH）的家(jia)庭(ting)成(cheng)員之壹(yi)，廣(guang)泛存在(zai)於(yu)原(yuan)核(he)和(he)真(zhen)核(he)生物中，該酶(mei)能利(li)用(yong)NAD+作為(wei)輔酶(mei)，將有(you)毒的甲(jia)醛氧(yang)化，是(shi)甲(jia)醛氧(yang)化途徑中的關(guan)鍵酶(mei)。
甲(jia)醛脫(tuo)氫(qing)酶(mei)試劑(ji)盒 輔酶(mei)Ⅰ

甲(jia)醛脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（Formaldehyde Dehydrogenase，FDH）試劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法 50 管/48 樣(yang)

甲(jia)醛脫(tuo)氫(qing)酶(mei)試劑(ji)盒 輔酶(mei)Ⅰ

正(zheng)式(shi)測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必取 2-3 個預期(qi)差異較(jiao)大(da)的樣(yang)本做預測(ce)定(ding)測定(ding)意義(yi)：

甲(jia)醛是(shi)壹(yi)種能(neng)與蛋(dan)白質(zhi)、核(he)酸和(he)脂(zhi)類(lei)產生非(fei)特異(yi)性反應的活(huo)潑(po)化合(he)物(wu)，對(dui)所有(you)生(sheng)物(wu)都(dou)具(ju)有(you)很高毒性。甲(jia)醛脫(tuo)氫(qing)酶(mei)作為(wei)含鋅(xin)中等(deng)鏈(lian)醇(chun)脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（ADH）的家(jia)庭(ting)成(cheng)員之壹(yi)，廣(guang)泛存在(zai)於(yu)原(yuan)核(he)和(he)真(zhen)核(he)生物中，該酶(mei)能利(li)用(yong)NAD⁺作為(wei)輔酶(mei)，將有(you)毒的甲(jia)醛氧(yang)化，是(shi)甲(jia)醛氧(yang)化途徑中的關(guan)鍵酶(mei)。

測定(ding)原理(li)：

甲(jia)醛脫(tuo)氫(qing)酶(mei)催化甲(jia)醛和(he) NAD⁺產生NADH，在(zai) 340nm 處的吸(xi)光(guang)值會增(zeng)加(jia)，測(ce)定(ding) 340nm 處的吸(xi)光(guang)值變(bian)化，可(ke)計算得到(dao)甲(jia)醛脫(tuo)氫(qing)酶(mei)的活(huo)性。

組(zu)成(cheng)：

試劑二(er)：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，-20℃保存；臨(lin)用前(qian)加入 15ml 水(shui)溶(rong)解(jie)待(dai)用(yong)，用不完的試(shi)劑(ji)分(fen)裝後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反復(fu)凍(dong)融。

試劑三：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，4℃保存；臨(lin)用前(qian)加入 3ml 水(shui)溶(rong)解(jie)待(dai)用(yong)。

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用(yong)品：

天平(ping)、離心(xin)機(ji)、分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計、1ml 玻璃比色(se)皿(min)、蒸餾(liu)水(shui)。

FDH 提取:

組(zu)織：按照組(zu)織質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比(bi)例(li)（建議稱取約(yue) 0.1g 組(zu)織，加入 1ml 提取液(ye)）進(jin)行冰(bing)浴勻漿(jiang)，然(ran)後(hou) 10000g，4℃，離心(xin) 20min。

細胞：按(an)照細胞數(shu)量(liang)（104 個）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比(bi)例(li)（建議 500 萬(wan)細胞加(jia)入 1ml提(ti)取液(ye)），冰(bing)浴超(chao)聲(sheng)波破(po)碎細胞（功(gong)率(lv) 300w，超聲(sheng) 3 秒(miao)，間(jian)隔(ge) 7 秒(miao)，總(zong)時間(jian) 3min）；然(ran)後(hou) 10000g，4℃，離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置於冰(bing)上(shang)待測(ce)。

液(ye)體(ti)：直(zhi)接檢(jian)測(ce)。

測定(ding)操作表:

1、分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計預熱(re) 30min，調(tiao)節波(bo)長至 340nm，蒸餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

2、操作表

在(zai)比(bi)色(se)皿(min)中加(jia)入如(ru)下(xia)試劑(ji)

混勻，於(yu) 340nm 下(xia)測定(ding)初始(shi)吸(xi)光(guang)值A1 與 5min 後(hou)的吸(xi)光(guang)值A2，△A=A2-A1。若樣(yang)本數量(liang)較(jiao)多，可(ke)將(jiang)試(shi)劑按(an)比(bi)例配(pei)成(cheng)工作液(ye)使用(yong)。

FDH 酶(mei)活(huo)計算:

按蛋白濃度計算

酶(mei)活(huo)定(ding)義：每毫(hao)克(ke)蛋(dan)白每分(fen)鐘催(cui)化還原 1nmol NAD+的酶(mei)量(liang)為(wei) 1 個酶(mei)活(huo)單位(wei)。

FDH 酶(mei)活(huo)（nmol/min/mg prot）=

按樣(yang)本質(zhi)量(liang)計算

A ×V 反總(zong)÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T = 322×△A÷Cpr

 d 

酶(mei)活(huo)定(ding)義：每克樣(yang)品每分(fen)鐘催(cui)化還原 1nmol NAD+的酶(mei)量(liang)為(wei) 1 個酶(mei)活(huo)單位(wei)。 

FDH 酶(mei)活(huo)（nmol/min/g 鮮重）=

按照細胞數(shu)量(liang)計算

A ×V 反總(zong)÷（V 樣(yang)×W÷V 樣(yang)總(zong)）÷T =322×△A÷W

 d

酶(mei)活(huo)定(ding)義：每 104 個細胞每分(fen)鐘催(cui)化還原 1nmol NAD+的酶(mei)量(liang)為(wei) 1 個酶(mei)活(huo)單位(wei)。

FDH 酶(mei)活(huo)（nmol/min/104cell）=數量(liang)

按液(ye)體(ti)體(ti)積(ji)計算

A ×V 反總(zong)÷（V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)×細胞數(shu)量(liang)（萬(wan)個））÷T= 322×△A÷細胞

 d

酶(mei)活(huo)定(ding)義：每ml 樣(yang)本每分(fen)鐘催(cui)化還原 1nmol NAD+的酶(mei)量(liang)為(wei) 1 個酶(mei)活(huo)單位(wei)。

FDH 酶(mei)活(huo)（nmol/min/ml）=

A ×V 反總(zong)÷V 樣(yang)÷T=322×△A

 d

：NADH 微(wei)摩(mo)爾(er)消(xiao)光(guang)系(xi)數，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：比色(se)皿(min)光(guang)徑，1cm；V 反(fan)總(zong)：反應體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積(ji)，1ml； V 樣(yang)：反應體(ti)系(xi)中樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.1ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提取液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；T，反(fan)應時間(jian)，5min；Cpr：樣(yang)本蛋白濃度，mg/ml；W：樣(yang)本質(zhi)量(liang)，g

甲(jia)醛脫(tuo)氫(qing)酶(mei)試劑(ji)盒 輔酶(mei)Ⅰ