乙醇俗(su)稱酒(jiu)精(jing)，是最(zui)常(chang)見的壹(yi)元醇，在檢測酒(jiu)的質量(liang)、分(fen)析(xi)血液(ye)乙(yi)醇含量(liang)和果蔬品質判斷中(zhong)通(tong)常(chang)需(xu)要頻(pin)繁(fan)、大量(liang)地檢測乙(yi)醇含量(liang)。
乙醇含量(liang)測定試劑盒(he) 輔酶(mei)Ⅰ

乙(yi)醇含量(liang)測定試劑盒(he)說(shuo)明書

微(wei)量(liang)法 100 管/96 樣

乙(yi)醇含量(liang)測定試劑盒(he) 輔酶(mei)Ⅰ

正(zheng)式測(ce)定(ding)前務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期差異較(jiao)大的樣(yang)本(ben)做預(yu)測定(ding)測定(ding)意(yi)義：

乙(yi)醇俗(su)稱酒(jiu)精(jing)，是最(zui)常(chang)見的壹(yi)元醇，在檢測酒(jiu)的質量(liang)、分(fen)析(xi)血液(ye)乙(yi)醇含量(liang)和果蔬品質判斷中(zhong)通(tong)常(chang)需(xu)要頻(pin)繁(fan)、大量(liang)地檢測乙(yi)醇含量(liang)。

乙(yi)醇是酒(jiu)的主(zhu)要成(cheng)分(fen)，是(shi)衡量(liang)酒(jiu)質量(liang)的重(zhong)要指標(biao)之(zhi)壹。我國(guo)是世界shang最(zui)早發(fa)明釀酒(jiu)的國(guo)家，也(ye)是酒(jiu)類(lei)產(chan)品消費(fei)大國，其(qi)消費(fei)量(liang)居世界zhi首。因(yin)此，快(kuai)速、準確測(ce)定(ding)酒(jiu)中(zhong)乙醇含量(liang)，對於確保(bao)酒(jiu)的質量(liang)和保(bao)護消費(fei)者的健(jian)康具有重(zhong)大意義(yi)。

乙(yi)醇是中(zhong)樞神(shen)經系(xi)統(tong)最(zui)基(ji)本(ben)的抑(yi)制物，如(ru)果(guo)乙(yi)醇被大量(liang)攝(she)入(ru)，會不(bu)可逆抑制呼吸(xi)甚至導致死(si)亡，血液(ye)中(zhong)乙醇檢測結果通(tong)常(chang)作(zuo)為(wei)認定是(shi)否(fou)酒(jiu)後(hou)駕(jia)駛或(huo)醉(zui)酒(jiu)駕(jia)駛的依(yi)據(ju)。

乙(yi)醇是判(pan)斷儲(chu)藏(zang)過(guo)程中(zhong)果蔬(shu)品質變化(hua)的重(zhong)要指標(biao)，研究表(biao)明，適當(dang)的乙(yi)醇處(chu)理(li)能夠減少(shao)腐爛和(he)減輕(qing)果蔬(shu)生理病(bing)害(hai)、延緩果蔬成(cheng)熟(shu)和(he)衰(shuai)老(lao)進(jin)程，從而(er)延長貨(huo)架壽(shou)命。因(yin)此，簡(jian)便、準確和(he)快(kuai)速測定(ding)果(guo)蔬中(zhong)乙醇含量(liang)具有非常(chang)重(zhong)要的意(yi)義。

測(ce)定原理(li)：

乙(yi)醇在乙(yi)醇脫氫酶(mei)的催化(hua)下(xia)氧(yang)化(hua)脫(tuo)氫生成(cheng)乙醛(quan)，同時，NAD 被(bei)還(hai)原生成(cheng)NADH，NADH 在(zai) 1-mPMS的作(zuo)用下使WST-8 顯(xian)橙黃色，通(tong)過(guo) 450 nm 下(xia)測定(ding)吸(xi)光值(zhi)變化(hua)可(ke)測(ce)得(de)乙醇含量(liang)。

組成(cheng)：

試劑二：粉(fen)劑×1 瓶(ping), -20℃保(bao)存；臨用前加(jia)入(ru) 6 ml 試劑三充分(fen)溶(rong)解待用，用不完(wan)的試劑分(fen)裝後(hou)-20℃保(bao)存；

自備(bei)儀器和用品：

酶(mei)標(biao)儀、臺(tai)式離(li)心機(ji)、可調式移(yi)液(ye)器(qi)、96 孔板、研缽(bo)、冰(bing)、蒸(zheng)餾(liu)水。

乙(yi)醇提取(qu)：

組織(zhi)：按照(zhao)組織(zhi)質量(liang)（g）：蒸餾(liu)水體積(ml)為(wei) 1：5~10 的比例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約 0.1g 組織(zhi)，加入(ru) 1ml 蒸餾(liu)水），進行(xing)勻(yun)漿，8000g，25℃離(li)心 10min，取(qu)上清待測(ce)。

細菌或(huo)培(pei)養細胞：先(xian)收(shou)集(ji)細菌或(huo)細胞到(dao)離(li)心管內(nei)，離(li)心後棄上清；按照(zhao)細菌或(huo)細胞數量(liang)（104 個）：蒸餾(liu)水體積（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬(wan)細菌或(huo)細胞加入(ru) 1ml 蒸餾(liu)水），超(chao)聲波(bo)破(po)碎(sui)（冰(bing)浴(yu)，功(gong)率 20％或(huo) 200W，超(chao)聲 3s，間(jian)隔 10s，重(zhong)復 30 次）， 8000g，25℃離(li)心 10min，取(qu)上清待測(ce)。

血清（漿）等(deng)液(ye)體樣品(pin)：直接(jie)測(ce)定(ding)。

測(ce)定步(bu)驟：

酶(mei)標(biao)儀預(yu)熱 30min 以(yi)上，調節(jie)波(bo)長至 450nm。

工(gong)作(zuo)液(ye)的配(pei)制：臨用前按(an)照(zhao)樣本(ben)數量(liang)，按以(yi)下比例(li)配(pei)制工(gong)作(zuo)液(ye)

樣(yang)本(ben)測定

按(an)下表(biao)在(zai) 96 孔板中(zhong)加入(ru)如(ru)下(xia)試劑

混(hun)勻後(hou)記錄 450nm 下(xia)測定(ding)初(chu)始(shi)吸(xi)光值(zhi) A1，和(he) 37℃避(bi)光孵(fu)育(yu) 10min 後(hou)的吸(xi)光值(zhi)A2，計(ji)算

△A=A2-A1。

乙(yi)醇含量(liang)計(ji)算：

標(biao)準條(tiao)件下(xia)測(ce)定(ding)回(hui)歸方程為(wei)y = 0.0256x + 0.0055 R² = 0.9991； x 為乙(yi)醇含量(liang)（μmol/ml），y 為吸(xi)光值(zhi)差值△A。

按(an)照(zhao)血清（漿）體積計(ji)算

乙(yi)醇含量(liang)（μmol/ml）= (△A-0.0055)÷0.0256

=39.1×(△A-0.0055)

按(an)照(zhao)樣品(pin)質量(liang)計(ji)算

乙(yi)醇含量(liang)（μmol/g 鮮重(zhong)）= [ (△A-0.0055)÷0.0256×V1]÷(W ×V1÷V2）

= 39.1×(△A-0.0055)÷W

按(an)照(zhao)細菌或(huo)細胞密度(du)計(ji)算

乙(yi)醇含量(liang)（μmol/10⁴ cell）= [ (△A-0.0055)÷0.0256×V1]÷（500×V1÷V2）

=0.078×(△A-0.0055)

V1：加(jia)入(ru)反應體系(xi)中(zhong)樣本(ben)體積，0.04ml；V2：加(jia)入(ru)提取(qu)液(ye)體積，1 ml； Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白質濃(nong)度(du)，mg/ml； W：樣(yang)本(ben)質量(liang)，g；500：細菌或(huo)細胞總(zong)數(shu)，500 萬(wan)；

註(zhu)意事項：

測(ce)定前取(qu) 1-2 個(ge)樣做預(yu)實驗(yan)，若△A﹥0.3 或(huo)乙(yi)醇含量(liang)﹥10μmol/ml，需將(jiang)樣(yang)本(ben)用蒸餾(liu)水稀釋(shi)後(hou)再測定，以(yi)確保(bao)測定的準確性(xing)。

最(zui)di檢測限(xian)：0.02μmol/ml。

乙(yi)醇含量(liang)測定試劑盒(he) 輔酶(mei)Ⅰ