G6PDH（EC 1.1.1.49）廣泛(fan)存在於動(dong)物、植(zhi)物、微(wei)生(sheng)物(wu)和培(pei)養(yang)細(xi)胞中，是磷酸(suan)戊(wu)糖(tang)途(tu)徑(jing)的(de)關(guan)鍵(jian)酶，催化(hua) 6-磷酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)氧(yang)化(hua)為(wei) 6 -磷酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)酸(suan)內酯，同(tong)時(shi)將 NADP+還原(yuan)為(wei)NADPH，供(gong)生(sheng)物(wu)合成(cheng)及維持細(xi)胞內的(de)還原(yuan)狀態(tai)用。
6-磷酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)脫(tuo)氫(qing)酶G6PDH試劑(ji)盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ

6-磷酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)脫(tuo)氫(qing)酶（G6PDH）試劑(ji)盒(he)說明(ming)書

分(fen)光光度(du)法(fa) 50 管(guan)/48 樣

6-磷酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)脫(tuo)氫(qing)酶G6PDH試劑(ji)盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ

正(zheng)式測定前(qian)務必取 2-3 個(ge)預期差(cha)異較大的(de)樣本做預測定測定意義：

G6PDH（EC 1.1.1.49）廣(guang)泛(fan)存在於動(dong)物、植(zhi)物、微(wei)生(sheng)物(wu)和培(pei)養(yang)細(xi)胞中，是磷酸(suan)戊(wu)糖(tang)途(tu)徑(jing)的(de)關(guan)鍵(jian)酶，催化(hua) 6-磷酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)氧(yang)化(hua)為(wei) 6 -磷酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)酸(suan)內酯，同(tong)時(shi)將 NADP+還(hai)原(yuan)為(wei)NADPH，供(gong)生(sheng)物(wu)合成(cheng)及維持細(xi)胞內的(de)還原(yuan)狀態(tai)用。因(yin)此(ci) 6-磷酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)脫(tuo)氫(qing)酶活性(xing)的(de)高低可以(yi)從壹定程度(du)上反映(ying)出生(sheng)物(wu)體的(de)生(sheng)物(wu)合成(cheng)和抗氧(yang)化(hua)能(neng)力。

測(ce)定原(yuan)理(li)：

G6PDH 催化(hua)NADP+還(hai)原(yuan)生(sheng)成(cheng)NADPH，在 340 nm 下(xia)測定 NADPH 增(zeng)加(jia)速率(lv)。

組成(cheng)：

自(zi)備(bei)儀器(qi)和用品(pin)：

紫外(wai)分(fen)光光度(du)計、水浴(yu)鍋、臺式(shi)離(li)心(xin)機、可調(tiao)式移液器(qi)、1 ml 石英(ying)比色皿、研(yan)缽、冰(bing)和蒸(zheng)餾(liu)水。

樣(yang)本的(de)前(qian)處(chu)理(li)：

1、細(xi)菌(jun)、細(xi)胞或(huo)組織樣(yang)品(pin)的(de)制備(bei)：

細(xi)菌(jun)或(huo)培養(yang)細(xi)胞：先收(shou)集(ji)細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞到(dao)離心(xin)管內，離心(xin)後(hou)棄(qi)上清(qing)；按照細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞數量(liang)（104 個(ge)）：提取液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 1000~5000：1 的(de)比例(li)（建(jian)議 2000 萬(wan)細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞加(jia)入 1ml 提(ti)取液(ye)），超(chao)聲(sheng)波(bo)破(po)碎(sui)細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞（冰(bing)浴(yu)，功率(lv) 20％或(huo) 200W，超(chao)聲(sheng) 3s，間(jian)隔(ge) 10s，重(zhong)復 30 次(ci)）；8000g 4℃離心(xin) 10min，取上清(qing)，置冰(bing)上待(dai)測(ce)。

組織：按照組織質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建(jian)議稱(cheng)取約(yue) 0.1g 組織，加(jia)入 1ml 提(ti)取液(ye)），進(jin)行(xing)冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿(jiang)。8000g 4℃離心(xin) 10min，取上清(qing)，置冰(bing)上待(dai)測(ce)。

2、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）樣品(pin)：直接檢測(ce)。

測(ce)定步(bu)驟：

1、分(fen)光光度(du)計預熱(re) 30min 以(yi)上，調(tiao)節波長(chang)至(zhi) 340nm，蒸餾(liu)水調零(ling)。

2、將(jiang)試劑(ji)二(er)和試劑(ji)三轉移至(zhi)試劑(ji)壹中(zhong)充(chong)分(fen)溶解(jie)；在 37℃（哺乳(ru)動(dong)物）或(huo) 25℃（其(qi)它物(wu)種(zhong)）水浴(yu) 10min 以(yi)上；用不(bu)完的(de)試劑(ji)分(fen)裝後-20℃保(bao)存，禁(jin)止反復凍(dong)融。

3、在 1ml 石英(ying)比色皿中加(jia)入 50μl 樣(yang)本和 950μl 試劑(ji)壹，混(hun)勻(yun)後(hou)立(li)即(ji)記(ji)錄(lu) 340nm 處(chu) 1min 後(hou)吸光值(zhi)A1 和

6min 後(hou)的(de)吸光值(zhi)A2，計算(suan)ΔA=A2-A1。

註(zhu)意：若ΔA 大於 0.5，需將(jiang)酶液用提取液(ye)稀(xi)釋(shi)，計算(suan)公式中乘以(yi)相(xiang)應(ying)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數。或(huo)將反應(ying)時(shi)間(jian)縮(suo)短(duan)至(zhi) 2min，使A2-A1 小(xiao)於 0.5，可提(ti)高檢測(ce)靈(ling)敏(min)度(du)。

G6PDH 活(huo)力單(dan)位的(de)計算(suan)：

1、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）G6PDH 活力(li)的(de)計算(suan):

單(dan)位的(de)定義：每 ml 血(xue)清(qing)（漿(jiang)）每分(fen)鐘(zhong)生(sheng)成(cheng) 1 nmol 的(de)NADPH 定義為(wei)壹個(ge)酶活力(li)單(dan)位。

G6PDH（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣(yang)÷T=643×ΔA 2、組織、細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞中 G6PDH 活力(li)的(de)計算(suan):

按樣本蛋白(bai)濃(nong)度(du)計算(suan)：

單(dan)位的(de)定義：每mg 組織蛋(dan)白(bai)每(mei)分(fen)鐘(zhong)生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADPH 定義為(wei)壹個(ge)酶活力(li)單(dan)位。

G6PDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

按樣本鮮重(zhong)計算(suan)：

單(dan)位的(de)定義：每g 組織每(mei)分(fen)鐘(zhong)生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADPH 定義為(wei)壹個(ge)酶活力(li)單(dan)位。

G6PDH（nmol/min /g 鮮(xian)重）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣總(zong)) ÷T=643×ΔA÷W

按細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞密度(du)計算(suan)：

單(dan)位的(de)定義：每 1 萬(wan)個細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞每分(fen)鐘(zhong)生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADPH 定義為(wei)壹個(ge)酶活力(li)單(dan)位。

G6PDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(2000×V 樣(yang)÷V 樣總(zong)) ÷T=0.3215×ΔA

V 反總(zong)：反應(ying)體(ti)系總(zong)體(ti)積(ji)，1×10-3 L；ε：NADPH 摩(mo)爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑(jing)， 1cm；V 樣：加(jia)入樣(yang)本體積(ji)，0.05 ml；V 樣(yang)總：加(jia)入提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)，1 ml；T：反應(ying)時(shi)間(jian)，5 min；Cpr：樣(yang)本蛋白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本質(zhi)量(liang)，g；2000：細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞總數，2000 萬(wan)。

6-磷酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)脫(tuo)氫(qing)酶G6PDH試劑(ji)盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ