ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛(fan)存(cun)在於動物、植(zhi)物、微(wei)生(sheng)物和(he)培(pei)養細(xi)胞(bao)中(zhong)，催(cui)化(hua)異檸檬酸(suan)脫(tuo)氫(qing)脫(tuo)羧生成 α-酮戊二酸(suan)，同時還(hai)原 NADP+生成NADPH。ICDHc 是細胞(bao)質(zhi)中除了磷酸(suan)戊糖(tang)途徑(jing)外(wai)又壹種(zhong)NADPH 重(zhong)要來(lai)源，在逆(ni)境(jing)中該(gai)酶(mei)活性通常會(hui)發生(sheng)顯著(zhu)變化(hua)。
胞(bao)漿(jiang)異檸檬酸(suan)脫(tuo)氫(qing)酶(mei)ICDHc試劑盒(he) 輔(fu)酶(mei)Ⅱ

胞(bao)漿(jiang)異檸檬酸(suan)脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（ICDHc）試劑盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

分光光度(du)法 50 管/48 樣

胞(bao)漿(jiang)異檸檬酸(suan)脫(tuo)氫(qing)酶(mei)ICDHc試劑盒(he) 輔(fu)酶(mei)Ⅱ

正(zheng)式測定前(qian)務必取 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差異較大的樣(yang)本(ben)做預(yu)測定測定意義(yi)：

ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛(fan)存(cun)在於動物、植(zhi)物、微(wei)生(sheng)物和(he)培(pei)養細(xi)胞(bao)中(zhong)，催(cui)化(hua)異檸檬酸(suan)脫(tuo)氫(qing)脫(tuo)羧生成 α-酮戊二酸(suan)，同時還(hai)原 NADP+生成NADPH。ICDHc 是細胞(bao)質(zhi)中除了磷酸(suan)戊糖(tang)途徑(jing)外(wai)又壹種(zhong)NADPH 重(zhong)要來(lai)源，在逆(ni)境(jing)中該(gai)酶(mei)活性通常會(hui)發生(sheng)顯著(zhu)變化(hua)。

測定原理：

利用(yong)ICDHc 催化(hua)NADP+還(hai)原成NADPH 反(fan)應(ying)，在(zai) 340 nm 下(xia)測定 NADPH 濃度(du)的增加(jia)。

組成：

自備儀器(qi)和(he)用(yong)品：

紫外(wai)分光光度(du)計、恒溫水浴(yu)鍋(guo)、臺(tai)式離心(xin)機、可調式移(yi)液器(qi)、1 ml 石(shi)英(ying)比色皿(min)、研缽(bo)、冰和(he)蒸餾(liu)水。

樣本(ben)的(de)前(qian)處理(li)：

1、細菌、細胞(bao)或(huo)組織(zhi)樣(yang)品的制(zhi)備：

細菌或(huo)培(pei)養細(xi)胞(bao)：先(xian)收(shou)集細菌或(huo)細胞(bao)到(dao)離(li)心(xin)管內，離(li)心(xin)後(hou)棄(qi)上(shang)清(qing)；按照(zhao)細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)數(shu)量(liang)（104 個(ge)）：提(ti)取(qu)液體積（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例（建議(yi) 500 萬細菌或(huo)細胞(bao)加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液），超聲波破碎細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)（冰(bing)浴(yu)，功率 20％或(huo) 200W，超聲 3s，間隔(ge) 10s，重(zhong)復(fu) 30 次）；8000g 4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待測。

組織：按照(zhao)組(zu)織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液體積(ml)為(wei) 1：5~10 的比例（建議(yi)稱取約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液），進行(xing)冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿(jiang)。8000g 4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待測。

2、血清(qing)（漿(jiang)）樣品：直接檢(jian)測。

測定步(bu)驟：

1、分光光度(du)計預(yu)熱(re) 30min 以上，調節(jie)波長至 340nm，蒸(zheng)餾水調(tiao)零(ling)。

2、將試劑二轉(zhuan)移(yi)至試(shi)劑壹中(zhong)充分溶(rong)解(jie)，置(zhi)於 37℃(哺(bu)乳(ru)動物)或(huo) 25℃（其(qi)它物種）水浴(yu)中預(yu)熱(re) 10min 左右(you)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑 4℃保存(cun)。

3、在試劑三(san)中加(jia)入 550μl 蒸(zheng)餾水充分溶(rong)解(jie)，置(zhi)於 37℃(哺(bu)乳(ru)動物)或(huo) 25℃（其(qi)它物種）水浴(yu)中預(yu)熱(re) 10min

左右(you)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分裝(zhuang)後(hou)-20℃保(bao)存(cun)，禁止反(fan)復凍(dong)融(rong)。

4、在試劑四中加(jia)入 550μl 蒸(zheng)餾水充分溶(rong)解(jie)，置(zhi)於 37℃(哺(bu)乳(ru)動物)或(huo) 25℃（其(qi)它物種）水浴(yu)中預(yu)熱(re) 10min

左右(you)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分裝(zhuang)後(hou)-20℃保(bao)存(cun)，禁止反(fan)復凍(dong)融(rong)。

5、操作(zuo)表：

將上述試(shi)劑按順序加(jia)入 1 ml 石(shi)英比色皿(min)中，加(jia)樣本(ben)的(de)同時開(kai)始計時；混(hun)勻(yun)，在(zai) 340nm 波長下(xia)記(ji)錄 20s 時的(de)初始吸光度(du)A1 和(he) 2min20s 時的(de)吸光度(du)A2，計算(suan)ΔA=A2-A1。

註意事(shi)項(xiang)：

1、若A2-A1 大於 0.5，需將(jiang)酶(mei)液用(yong)提(ti)取(qu)液稀(xi)釋(shi)，使A2-A1 小(xiao)於 0.5，可提(ti)高檢(jian)測靈敏(min)度(du)。計算(suan)公(gong)式中乘以相應(ying)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數。

2、若A2-A1 小(xiao)於 0.005，可延長反(fan)應(ying)時間到(dao) 5min 或(huo) 10min。

ICDHc 活力(li)單位(wei)的計(ji)算(suan)：

1、血清(qing)（漿(jiang)）ICDHc 活力(li)的計(ji)算(suan):

單位(wei)的定(ding)義(yi)：每(mei)ml 血(xue)清(qing)（漿(jiang)）每(mei)分(fen)鐘(zhong)生(sheng)成 1 nmol NADPH 定義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位(wei)。

ICDHc（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣(yang)÷T=2143×ΔA 2、組(zu)織(zhi)、細(xi)菌或(huo)細胞(bao)中(zhong)ICDHc 活力(li)的計(ji)算(suan):

按樣本(ben)蛋白(bai)濃(nong)度(du)計算(suan)：

單位(wei)的定(ding)義(yi)：每(mei)mg 組(zu)織(zhi)蛋白(bai)每(mei)分(fen)鐘(zhong)生(sheng)成 1 nmol NADPH 定義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位(wei)。

ICDHc（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=2143×ΔA÷Cpr

按樣本(ben)鮮(xian)重計算(suan)：

單位(wei)的定(ding)義(yi)：每(mei)g 組(zu)織(zhi)每(mei)分(fen)鐘(zhong)生(sheng)成 1 nmol NADPH 定義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位(wei)。

ICDHc（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=2143×ΔA÷W

按細菌或(huo)細胞(bao)密度(du)計算(suan)：

單位(wei)的定(ding)義(yi)：每(mei) 1 萬個細菌或(huo)細胞(bao)每(mei)分(fen)鐘(zhong)生(sheng)成 1 nmol 的NADPH 定義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位(wei)。

ICDHc（nmol/min /104）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=4.285×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系總(zong)體積，8×10-4 L；ε：NADPH 摩(mo)爾消光系數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿(min)光徑(jing)， 1cm；V 樣：加(jia)入樣(yang)本(ben)體積，0.03 ml；V 樣總(zong)：加(jia)入提(ti)取(qu)液體積，1 ml；T：反(fan)應(ying)時間，2 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白(bai)質(zhi)濃度(du)，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量(liang)，g；500：細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)總(zong)數(shu)，500 萬。

胞(bao)漿(jiang)異檸檬酸(suan)脫(tuo)氫(qing)酶(mei)ICDHc試劑盒(he) 輔(fu)酶(mei)Ⅱ