NADPase 主(zhu)要存(cun)在(zai)於植物組織中(zhong)，是生(sheng)物(wu)體(ti)內(nei)唯yi催(cui)化 NADP+降解(jie)為(wei)NAD+的酶，與(yu) NADK 壹(yi)起調控NAD 和(he)NADP 之間的(de)平(ping)衡。
NADP 磷(lin)酸酶(mei)試劑盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ

NADP 磷(lin)酸酶(mei)（NADPase）試劑盒(he)說明書

分光光度(du)法(fa) 50 管/48 樣

NADP 磷(lin)酸酶(mei)試劑盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ

正式(shi)測定前(qian)務必取(qu) 2-3 個(ge)預期差異較大(da)的樣(yang)本(ben)做預測定測定意義(yi)：

NADPase 主(zhu)要存(cun)在(zai)於植物組織中(zhong)，是生(sheng)物(wu)體(ti)內(nei)唯yi催(cui)化 NADP+降解(jie)為(wei)NAD+的(de)酶(mei)，與 NADK 壹(yi)起(qi)調控(kong)NAD 和(he)NADP 之(zhi)間的(de)平(ping)衡。

測定原(yuan)理：

NADPase 能(neng)夠(gou)催(cui)化NADP+水解為(wei)NAD+和(he)無機磷(lin)的反(fan)應(ying)，通過測定無機磷(lin)的量來測定NADPase 活(huo)性(xing)。

組成：

試劑二：粉劑×5 支(zhi)，-20℃保存(cun)；用時每支(zhi)加(jia)入(ru) 1 ml 試劑壹(yi)充(chong)分溶(rong)解備(bei)用；用不完的試劑分裝後(hou)-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反(fan)復(fu)凍融(rong)。

試劑三(san)：粉劑×1 瓶, 4℃保存(cun)。用時加入(ru) 25ml 蒸餾水，溶(rong)解後(hou) 4℃可(ke)保存(cun)壹周(zhou)。試劑四(si)：粉劑×1 瓶, 4℃保存(cun)。用時加入(ru) 25ml 蒸餾水，溶(rong)解後(hou) 4℃可(ke)保存(cun)壹周(zhou)。試劑六(liu)：10mmol/L 標(biao)準磷(lin)貯備(bei)液(ye) 10ml×1 瓶，4℃保存(cun)。

0.5μmol/ml 標(biao)準磷(lin)應用液(ye)配(pei)制：將(jiang)試劑六(liu) 20 倍稀(xi)釋，即(ji)取(qu) 0.5ml 試劑六(liu)加 9.5 蒸餾水，充(chong)分混(hun)勻。

定磷(lin)試劑的(de)配(pei)制：按(an) H2O: 試劑三(san):試劑四(si):試劑五=2:1:1:1 的比(bi)例配(pei)制，配(pei)好的定磷(lin)試劑應(ying)為(wei)淺(qian)黃色(se)，若無色(se)則(ze)試劑失效(xiao)，若是(shi)藍色(se)則(ze)為(wei)磷(lin)汙(wu)染(ran)，定磷(lin)劑現(xian)用現配(pei)。

註(zhu)意：配(pei)試劑最(zui)好用新(xin)的燒杯、玻(bo)棒(bang)和(he)玻(bo)璃(li)移液(ye)器，也可(ke)以(yi)用壹次性(xing)塑(su)料(liao)器皿，避(bi)免磷(lin)汙(wu)染(ran)。

自(zi)備(bei)儀器和(he)用品(pin)：

可(ke)見(jian)分光光度(du)計(ji)、恒溫水浴鍋、臺式(shi)離(li)心機(ji)、可(ke)調式(shi)移(yi)液(ye)器、1 ml 玻(bo)璃(li)比(bi)色(se)皿、研缽(bo)、冰和(he)蒸餾水

樣(yang)本(ben)的前(qian)處(chu)理：

按(an)照(zhao)組織質量（g）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比(bi)例（建(jian)議(yi)稱(cheng)取約 0.1g 組織，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取液(ye)），進行(xing)冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取(qu)上清，置(zhi)冰上待測。

測定步(bu)驟：

1、酶(mei)促(cu)反應

37℃（哺(bu)乳(ru)動(dong)物）或(huo) 25℃（其它物(wu)種(zhong)）預(yu)熱(re) 5min

37℃（哺(bu)乳(ru)動(dong)物）或(huo) 25℃（其它物(wu)種(zhong)）準(zhun)確(que)反(fan)應(ying) 30min 後(hou)，95℃水浴 5min（蓋緊(jin)，以(yi)防(fang)止(zhi)水分散(san)失），冷(leng)卻後(hou)，10000g 25℃離心 5min，取(qu)上清

2、定磷(lin)

混(hun)勻，37℃（哺(bu)乳(ru)動(dong)物）或(huo) 25℃（其它物(wu)種(zhong)）水浴 30min，冷卻(que)至室溫，在(zai) 660nm 處(chu)，蒸餾水調零，記錄各(ge)管吸光值(zhi)。

註(zhu)意事(shi)項(xiang)：

1、此法(fa)具(ju)有微量、靈敏、快速的(de)特點(dian)。所以(yi)對測定所用試管要求(qiu)嚴格(ge)，要沒有壹(yi)點(dian)磷(lin)，若試管放(fang)過磷(lin)酸 或(huo)磷(lin)酸鹽(yan)緩沖(chong)液(ye)，壹定要洗得非(fei)常(chang)幹(gan)凈(jing)，要先(xian)用洗潔精加(jia)水煮，再用自來水沖(chong)，最(zui)後(hou)用蒸餾水沖(chong)幹(gan)凈(jing)。最(zui)好用壹次性(xing)塑(su)料(liao)管或(huo)新(xin)玻(bo)璃(li)管，避(bi)免磷(lin)汙(wu)染(ran)是檢測成敗的(de)關(guan)鍵(jian)。

2、標(biao)準管、空白(bai)管和(he)對照(zhao)管只要做壹次即(ji)可(ke)。

NADPase 酶(mei)活(huo)性(xing)計(ji)算：

1、按(an)組織蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算：

定義：每小(xiao)時(shi)每毫克組織蛋(dan)白(bai)NADPase 分解(jie)NADP 產生(sheng) 1μmol 無機磷(lin)的量為(wei)壹個 NADPase 活(huo)力(li)單(dan)位。

NADPase (μmol/h/mg prot)=(C 標(biao)準管×V 總)×(A 測定管-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準管-A 空白(bai)管)÷ (V 樣×Cpr)÷T=5×(A 測定管-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準管-A 空白(bai)管)÷Cpr

2、按(an)樣(yang)本鮮(xian)重計(ji)算：

定義：每小(xiao)時(shi)每g 組織NADPase 分解(jie)NADP 產生(sheng) 1μmol 無機磷(lin)的量為(wei)壹個 NADPase 活(huo)力(li)單(dan)位。

NADPase (μmol/h/g 鮮(xian)重)=(C 標(biao)準管×V 總)×(A 測定管-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準管-A 空白(bai)管）× V 總÷(W× V 樣÷V 樣總(zong))÷T=5×(A 測定管-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準管-A 空白(bai)管)÷W

C 標(biao)準管：標(biao)準管濃(nong)度(du)，0.5μmol/ml；V 總：酶(mei)促反應總體(ti)積(ji)，0.5ml；V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣本體(ti)積(ji)，0.1ml ；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；T：反(fan)應(ying)時(shi)間，0.5 小(xiao)時(shi)；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)質濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣本(ben)鮮(xian)重，g。

NADP 磷(lin)酸酶(mei)試劑盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ