CK(EC 2.7.3.2)主(zhu)要(yao)存(cun)在於(yu)心臟(zang)、肌(ji)肉(rou)以及腦(nao)等(deng)組(zu)織(zhi)中(zhong)，能可(ke)逆(ni)地(di)催化(hua)肌(ji)酸與 ATP 之間(jian)的(de)轉磷(lin)酰(xian)基(ji)反應(ying)，在能(neng)量運(yun)轉、肌(ji)肉(rou)收縮和ATP 再生(sheng)中(zhong)有(you)重要(yao)作用(yong)，是臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)心(xin)腦(nao)疾(ji)病(bing)的(de)壹個(ge)重要(yao)指標(biao)。
肌(ji)酸ji酶測定(ding)試劑(ji)盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ

肌(ji)酸ji酶（Creatine Kinase, CK）測定(ding)試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

分光光度法(fa) 50 管/48 樣

肌(ji)酸ji酶測定(ding)試劑(ji)盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ

正(zheng)式測定前(qian)務(wu)必(bi)取 2-3 個(ge)預期(qi)差(cha)異(yi)較大的(de)樣本做(zuo)預測(ce)定(ding)測(ce)定意(yi)義：

CK(EC 2.7.3.2)主(zhu)要(yao)存(cun)在於(yu)心臟(zang)、肌(ji)肉(rou)以及腦(nao)等(deng)組(zu)織(zhi)中(zhong)，能可(ke)逆(ni)地(di)催化(hua)肌(ji)酸與 ATP 之間(jian)的(de)轉磷(lin)酰(xian)基(ji)反應，在能(neng)量運(yun)轉、肌(ji)肉(rou)收縮和ATP 再生(sheng)中(zhong)有(you)重要(yao)作用(yong)，是臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)心(xin)腦(nao)疾(ji)病(bing)的(de)壹個(ge)重要(yao)指標(biao)。

測定(ding)原理：

CK 催化(hua)磷(lin)酸肌(ji)酸和 ADP 生(sheng)成(cheng)肌(ji)酸和ATP，己糖(tang)激酶催化(hua) ATP 與葡(pu)萄糖形成 6-磷(lin)酸葡萄糖，6-磷(lin)酸葡萄糖脫氫(qing)酶催化(hua) 6-磷(lin)酸葡萄糖與NADP+生(sheng)成(cheng)NADPH，導致 340nm 光吸收值增加。

組成(cheng)：

試劑(ji)壹(yi)：粉劑(ji) 1 瓶(ping)，4℃避光保存(cun)，使用(yong)前(qian)加 15ml 蒸(zheng)餾水(shui)溶解(jie)。

工作液(ye)：臨用(yong)前(qian)根(gen)據(ju)用(yong)量(liang)將(jiang)試(shi)劑(ji)壹(yi)和試劑(ji)二以 1:1 混合。使用(yong)前(qian) 37℃溫(wen)育(yu) 2min。

自備(bei)儀器和用(yong)品(pin)：

天平、低(di)溫(wen)離心(xin)機、恒(heng)溫(wen)水(shui)浴鍋(guo)、紫外(wai)分(fen)光光度計(ji)、1 ml 石英(ying)比色(se)皿(min)和蒸(zheng)餾水(shui)。

粗(cu)酶液提(ti)取：

組織(zhi)樣本：按(an)照(zhao)組織質量（g）：提(ti)取液(ye)體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例（建(jian)議(yi)稱取(qu)約 0.1g 組織(zhi)，加入(ru) 1ml

提(ti)取液(ye)）進行(xing)冰浴勻(yun)漿，然(ran)後(hou) 10000g，4℃離心(xin) 15min，取上(shang)清，置(zhi)冰上(shang)待測。

血清樣本：直(zhi)接測定。

測定(ding)步驟(zhou)：

紫外(wai)分光光度計(ji)預熱(re) 30min，調(tiao)節波(bo)長(chang)至(zhi) 340nm，蒸(zheng)餾水(shui)調(tiao)零(ling)。

在 1 ml 石(shi)英(ying)比色(se)皿(min)中(zhong)加入(ru) 200μl 樣本和 300μl 蒸(zheng)餾水(shui)，最後(hou)加入(ru) 500μl 工作液(ye)，立即(ji)混勻(yun)，37℃下測定初(chu)始(shi)吸光值A1 與(yu) 1min 後(hou)的吸(xi)光值A2，ΔA＝A2-A1。

CK 活性(xing)計算公(gong)式

1、按(an)組(zu)織蛋白含量(liang)計(ji)算

酶活定(ding)義：37℃，pH7.0 時，每毫克蛋白質 1min 內(nei)催(cui)化產生(sheng) 1nmol NADPH 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活單位。

CK 活性(xing)（nmol/min / mg prot）=

2、按(an)組(zu)織樣本質量計算：

A d

×V 反總(zong)÷(V 樣×Cpr)= 804×△A÷Cpr

酶活定(ding)義：37℃，pH7.0 時，每克樣品 1min 內(nei)催(cui)化產生(sheng) 1nmol NADPH 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活單位。

CK 活性(xing)（nmol/min /g 鮮(xian)重）=

按(an)血清計(ji)算：

A

 d

×V 反總(zong)÷(V 樣÷V 樣總(zong)×W)= 804×△A÷W

酶活定(ding)義：37℃，pH7.0 時，每升血清 1min 內(nei)催(cui)化產生(sheng) 1nmol NADPH 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活單位。

CK 活性(xing)（nmol/min /L）=

A

 d

×V 反總(zong)÷V 樣= 804×△A

：NADPH 摩(mo)爾(er)消光系數(shu)，6220 L /mol/cm；d：比色(se)皿(min)光徑，1cm；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系總(zong)體(ti)積(ji)，1ml；V樣：反應體(ti)系(xi)中(zhong)樣本體積(ji)，0.2ml；T，反應(ying)時間(jian)，1min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，g

註意(yi)事項(xiang)

配制(zhi)好(hao)的(de)工作液(ye) 4℃穩定 7 天，請(qing)配制(zhi)後(hou)盡快使用(yong)。

血清的(de)CK 不穩定，采(cai)集樣本後(hou)盡快測定(ding)，4℃避光保存(cun)可穩定 24h。

樣品蛋白質含量(liang)需要(yao)另(ling)外(wai)測(ce)定(ding)，可(ke)選(xuan)用(yong)BCA 蛋白含量(liang)測(ce)定試(shi)劑(ji)盒(he)進(jin)行(xing)測(ce)定(ding)。

OD 值大於(yu) 0.5 可用(yong)提(ti)取液(ye)適(shi)當稀釋樣品，並(bing)在計(ji)算公(gong)式中(zhong)相應(ying)的(de)改變稀釋倍(bei)數(shu)。

肌(ji)酸ji酶測定(ding)試劑(ji)盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ