GS（EC 6.3.1.2）主(zhu)要(yao)存在於植(zhi)物(wu)中，是生物(wu)體內(nei)氨同化(hua)的(de)關鍵(jian)酶之(zhi)壹，催化(hua)銨(an)離子(zi)和(he)谷an酸合成谷an酰胺，不(bu)僅(jin)可以防止過多(duo)的(de)銨離子(zi)對(dui)生物(wu)有毒(du)性(xing)，而且谷an酰胺也(ye)是氨的(de)主(zhu)要(yao)儲存和(he)運輸形式。
谷an酰胺合(he)成(cheng)酶試(shi)劑(ji)盒 氨(an)基酸

谷an酰胺合(he)成(cheng)酶（Glutamine synthetase，GS）試劑盒說(shuo)明(ming)書

分光光度(du)法(fa) 50 管/24 樣

谷an酰胺合(he)成(cheng)酶試(shi)劑(ji)盒 氨(an)基酸

正式測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必取(qu) 2-3 個預(yu)期差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的(de)樣本(ben)做(zuo)預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

GS（EC 6.3.1.2）主(zhu)要(yao)存在於植(zhi)物(wu)中，是生物(wu)體內(nei)氨同化(hua)的(de)關鍵(jian)酶之(zhi)壹，催化(hua)銨(an)離子(zi)和(he)谷an酸合成谷an酰胺，不(bu)僅(jin)可以防止過多(duo)的(de)銨離子(zi)對(dui)生物(wu)有毒(du)性(xing)，而且谷an酰胺也(ye)是氨的(de)主(zhu)要(yao)儲存和(he)運輸形式。

測(ce)定(ding)原(yuan)理：

GS 在ATP 和(he)Mg²⁺存在下，催(cui)化(hua)銨(an)離子(zi)和(he)谷an酸合成谷an酰胺；谷an酰胺進壹步轉化(hua)為(wei)γ─谷氨酰基異(yi)羥(qiang)肟(wo)酸(suan)，在酸性(xing)條(tiao)件下形(xing)成(cheng)的絡(luo)合(he)物在 540nm 處(chu)有(you)最大(da)吸(xi)收峰(feng)，可(ke)用(yong)分(fen)光光度計測(ce)定(ding)。

組(zu)成(cheng)：

試劑壹臨用(yong)前(qian) 37℃預(yu)熱 20min，充分混勻(yun)，如(ru)有沈(chen)澱(dian)，靜(jing)置 10min，取(qu)上(shang)清(qing)待(dai)用(yong)。試(shi)劑二臨(lin)用(yong)前(qian) 37℃預(yu)熱 20min，充分混勻(yun)，如(ru)有沈(chen)澱(dian)，靜(jing)置 10min，取(qu)上(shang)清(qing)待(dai)用(yong)。試(shi)劑三(san)用(yong)時(shi)每(mei)瓶加入(ru) 5ml 蒸餾水(shui)充分溶(rong)解(jie)待(dai)用(yong)。

自備(bei)儀器(qi)和(he)用(yong)品(pin)：

可見分光(guang)光度(du)計、水(shui)浴(yu)鍋、臺(tai)式離心機(ji)、可(ke)調式移液(ye)器(qi)、1 ml 玻璃比(bi)色(se)皿(min)、研(yan)缽(bo)、冰和(he)蒸餾水(shui)。

樣本(ben)測(ce)定(ding)的(de)準備(bei)：

1、細菌、細胞或(huo)組(zu)織(zhi)樣品(pin)的制備(bei)：

細菌或培(pei)養細胞：先(xian)收集細菌或細胞到離心管內，離心後(hou)棄(qi)上(shang)清(qing)；按(an)照細菌或細胞數(shu)量（104 個）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例（建(jian)議(yi) 500 萬(wan)細菌或細胞加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），超聲(sheng)波破碎細菌或細胞（冰(bing)浴，功(gong)率 20％或 200W，超聲(sheng) 3s，間隔(ge) 10s，重(zhong)復 30 次(ci)）；8000g 4℃離心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。

組(zu)織(zhi)：按照組(zu)織(zhi)質(zhi)量（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為 1：5~10 的比(bi)例（建(jian)議(yi)稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織(zhi)，加入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），進行(xing)冰浴(yu)勻漿。8000g 4℃離心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。

2、血(xue)清(qing)（漿）樣品(pin)：直接檢測(ce)。

測(ce)定(ding)步驟：

1、分光光度(du)計預(yu)熱 30min 以上(shang)，調節(jie)波長(chang)至 540nm，蒸(zheng)餾水(shui)調零(ling)。

2、在EP 管中加入(ru)下列(lie)試(shi)劑：

混勻，37℃（哺乳(ru)動物）或 25℃（其他物種(zhong)）準確水浴 30min

混勻，25℃室溫(wen)靜置(zhi) 10min 後(hou)，5000g，25℃離心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)液(ye)測(ce)定(ding) 540nm 處(chu)的(de)吸(xi)光值(zhi)A。△A=A

測(ce)定(ding)管-A 對照管。每個(ge)測(ce)定(ding)管需(xu)設壹個對(dui)照管。

GS 活力單(dan)位(wei)的計算(suan)：

標準曲(qu)線(xian)：y = 0.8348x + 0.0008，R2 = 0.9999

1、血(xue)清(qing)（漿）GS 活性(xing)

單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei)ml 血(xue)清(qing)（漿）在每ml 反應體(ti)系(xi)中每小(xiao)時(shi)產(chan)生 1μmol γ-谷氨酰基異(yi)羥(qiang)肟(wo)酸(suan)定(ding)義為(wei)壹個酶活力單(dan)位(wei)。

計算(suan)公式：

GS（μmol/h/ml）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反總÷V 樣÷T=10.268×ΔA

2、組(zu)織(zhi)、細菌或細胞 GS 活性(xing)

按樣本(ben)蛋(dan)白濃(nong)度(du)計算(suan)：

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每(mei) mg 組(zu)織(zhi)蛋(dan)白在每ml 反應體(ti)系(xi)中每小(xiao)時(shi)產(chan)生 1μmol γ-谷氨酰基異(yi)羥(qiang)肟(wo)酸(suan)定(ding)義為(wei)壹個酶活力單(dan)位(wei)。

GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T

按樣本(ben)鮮(xian)重(zhong)計算(suan)：

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每(mei)g 組(zu)織(zhi)在每ml 反應體(ti)系(xi)中每小(xiao)時(shi)產(chan)生 1μmol γ-谷氨酰基異(yi)羥(qiang)肟(wo)酸(suan)定(ding)義為(wei)壹個酶活力單(dan)位(wei)。

GS（μmol/h/g 鮮(xian)重(zhong)）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反總(zong)÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=10.268×ΔA÷W

按細菌或細胞密(mi)度計算(suan)

單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei) 1 萬個細菌或細胞在每ml 反應體(ti)系(xi)中每小(xiao)時(shi)產(chan)生 1μmol γ-谷氨酰基異(yi)羥(qiang)肟(wo)酸(suan)定(ding)義為(wei)壹個酶活力單(dan)位(wei)。

GS（μmol/h/104 cell）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣(yang)總)÷T

=0.021×ΔA

V 反總：反應體(ti)系(xi)總體(ti)積(ji)，0.75ml； V 樣(yang)：加入樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.175ml；V 樣總：加入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1 ml； T：反應時(shi)間(jian)，30 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量，g；500：細菌或細胞總(zong)數，500 萬(wan)。

谷an酰胺合(he)成(cheng)酶試(shi)劑(ji)盒 氨(an)基酸