LAP 是(shi)壹(yi)類能(neng)水解肽(tai)鏈(lian)N-末端(duan)為亮(liang)an酸的(de)酶，廣泛存在於(yu)肝、腎(shen)、胰(yi)等組織中(zhong)，尤(you)其(qi)以(yi)肝臟(zang)中(zhong)含(han)量(liang)最(zui)為豐富(fu)。各(ge)類肝病患者(zhe)因(yin)肝細胞損(sun)傷，血(xue)清LAP 的(de)活性(xing)均有不同程(cheng)度的(de)升高，因(yin)此，血(xue)清 LAP 活(huo)性(xing)的(de)檢(jian)測能(neng)從(cong)不同(tong)側(ce)面反映(ying)各(ge)種肝病的(de)發生(sheng)和(he)發展(zhan)。
亮(liang)an酸氨基(ji)肽(tai)酶(mei)試劑(ji)盒 氨(an)基(ji)酸

亮(liang)an酸氨基(ji)肽(tai)酶(mei)（Leucine Aminopeptidase, LAP）試劑(ji)盒說明(ming)書(shu)

分光光度(du)法 50 管(guan)/48 樣

亮(liang)an酸氨基(ji)肽(tai)酶(mei)試劑(ji)盒 氨(an)基(ji)酸

正式(shi)測(ce)定(ding)前務必取(qu) 2-3 個(ge)預期(qi)差(cha)異(yi)較大的(de)樣本做(zuo)預(yu)測定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

LAP 是(shi)壹(yi)類能(neng)水解肽(tai)鏈(lian)N-末端(duan)為亮(liang)an酸的(de)酶，廣泛存在於(yu)肝、腎(shen)、胰(yi)等組織中(zhong)，尤(you)其(qi)以(yi)肝臟(zang)中(zhong)含(han)量(liang)最(zui)為豐富(fu)。各(ge)類肝病患者(zhe)因(yin)肝細胞損(sun)傷，血(xue)清LAP 的(de)活性(xing)均有不同程(cheng)度的(de)升高，因(yin)此，血(xue)清 LAP 活性(xing)的(de)檢(jian)測能(neng)從(cong)不同(tong)側(ce)面反映(ying)各(ge)種肝病的(de)發生(sheng)和(he)發展(zhan)。

測定(ding)原(yuan)理：

LAP 分解L-亮(liang)氨(an)酰(xian)對硝基(ji)苯(ben)胺生成(cheng)對硝(xiao)基(ji)苯(ben)胺，後者(zhe)在(zai) 405nm 有最(zui)大吸收峰(feng)，通過(guo)測定(ding)吸光值升(sheng)高速(su)率(lv)來(lai)計算LAP 活性(xing)。

組成(cheng)：

自備(bei)儀器和(he)用品(pin)：

可見(jian)分光光度(du)計、臺式(shi)離心機、水(shui)浴鍋(guo)、可調(tiao)式(shi)移(yi)液(ye)器、1ml 玻璃比色皿(min)、研(yan)缽(bo)、冰(bing)和(he)蒸(zheng)餾(liu)水。

樣本的(de)前處理(li)：

1、細菌(jun)、細胞或(huo)組織樣品(pin)的(de)制備(bei)：

細菌(jun)或(huo)培(pei)養(yang)細胞：先(xian)收集(ji)細菌(jun)或(huo)細胞到(dao)離心(xin)管(guan)內，離(li)心後棄上(shang)清；按(an)照(zhao)細菌(jun)或(huo)細胞數(shu)量(liang)（104 個(ge)）：提(ti)取(qu)液(ye)體積(ji)（ml）為 1000~5000：1 的(de)比例（建(jian)議 2000 萬(wan)細菌(jun)或(huo)細胞加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），超(chao)聲波破(po)碎(sui)細菌(jun)或(huo)細胞（冰(bing)浴，功(gong)率(lv) 20％或(huo) 200W，超聲 3s，間(jian)隔 10s，重(zhong)復 30 次(ci)）；8000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。

組織：按照(zhao)組織質量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比例（建(jian)議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），進(jin)行(xing)冰(bing)浴勻(yun)漿(jiang)。8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。

2、血(xue)清（漿(jiang)）樣品(pin)：直(zhi)接檢(jian)測。

LAP 測定(ding)步(bu)驟(zhou)：

1、分光光度(du)計預熱 30min 以(yi)上(shang)，調(tiao)節(jie)波(bo)長(chang)至 405nm，蒸(zheng)餾(liu)水調(tiao)零。

2、將(jiang)試劑(ji)二轉(zhuan)移至試劑(ji)壹中(zhong)充分溶解（如較(jiao)難(nan)溶(rong)解，可 50℃水(shui)浴加(jia)熱約 30min 促進(jin)溶(rong)解）；在(zai) 37℃

（哺乳(ru)動物）或(huo) 25℃（其(qi)它(ta)物種）水(shui)浴 10min 以(yi)上(shang)；用不(bu)完的(de)試劑(ji)分裝(zhuang)後-20℃保存，禁止反復凍融(rong)。

3、在微量(liang)石(shi)英比色皿(min)或(huo) 96 孔板中(zhong)加(jia)入(ru) 250μl 樣本和(he) 750μl 試劑(ji)壹，混(hun)勻(yun)後立即(ji)記錄 405nm 處初始吸光值A1 和(he) 2min 後的(de)吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

註(zhu)意(yi)事(shi)項：若(ruo)ΔA 大於(yu) 0.5，需(xu)將(jiang)酶液(ye)用(yong)提(ti)取(qu)液(ye)稀釋，計算公(gong)式中(zhong)乘以(yi)相(xiang)應稀釋倍(bei)數(shu)。使 A2-A1 小(xiao)於(yu)

0.5，可提(ti)高檢(jian)測靈敏(min)度。

LAP 活力(li)單位的(de)計算：

1、血(xue)清（漿(jiang)）LAP 活力(li)的(de)計算:

單位的(de)定(ding)義(yi)：每ml 血(xue)清（漿(jiang)）每分(fen)鐘生成 1 nmol 的(de)對硝(xiao)基(ji)苯(ben)胺定(ding)義(yi)為壹個(ge)酶活(huo)力(li)單位。

LAP（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=205.8×ΔA 2、組(zu)織、細菌(jun)或(huo)細胞中(zhong)LAP 活力的(de)計算:

按樣本蛋(dan)白(bai)濃度計算：

單位的(de)定(ding)義(yi)：每mg 組織蛋白(bai)每(mei)分(fen)鐘生成 1 nmol 對(dui)硝基(ji)苯(ben)胺定(ding)義(yi)為壹個(ge)酶活(huo)力(li)單位。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

按樣本鮮(xian)重(zhong)計算：

單位的(de)定(ding)義(yi)：每g 組織每分(fen)鐘生成 1 nmol 對(dui)硝基(ji)苯(ben)胺定(ding)義(yi)為壹個(ge)酶活(huo)力(li)單位。

LAP（nmol/min /g 鮮(xian)重(zhong)）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總(zong)) ÷T=205.8×ΔA÷W

按細菌(jun)或(huo)細胞密度計算：

單位的(de)定(ding)義(yi)：每 1 萬(wan)個(ge)細菌(jun)或(huo)細胞每分(fen)鐘生成 1 nmol 對(dui)硝基(ji)苯(ben)胺定(ding)義(yi)為壹個(ge)酶活(huo)力(li)單位。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(2000×V 樣÷V 樣總(zong)) ÷T=0.103×ΔA

V 反總(zong)：反應體系總體積(ji)，1×10-3 L；ε：對(dui)硝(xiao)基(ji)苯(ben)胺摩(mo)爾(er)消光系(xi)數(shu)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿(min)光徑(jing)，1cm；V 樣：加(jia)入(ru)樣本體積(ji)，0.25 ml；V 樣總(zong)：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體積(ji)，1 ml；T：反(fan)應時(shi)間(jian)，2 min；Cpr：樣本蛋(dan)白(bai)質濃度，mg/ml；W：樣本質(zhi)量(liang)，g；2000：細菌(jun)或(huo)細胞總數(shu)，2000 萬(wan)。

亮(liang)an酸氨基(ji)肽(tai)酶(mei)試劑(ji)盒 氨(an)基(ji)酸