ProDH 是存在於(yu)線粒體(ti)內的催化(hua)脯(pu)an酸降(jiang)解(jie)的關鍵(jian)酶(mei)。脯(pu)an酸是分布zui廣(guang)泛的壹種(zhong)滲(shen)透(tou)物(wu)質，在脅迫(po)條(tiao)件下(xia)很(hen)多(duo)植(zhi)物(wu)可以(yi)通過(guo)增(zeng)加(jia)合(he)成(cheng)、減(jian)少(shao)降(jiang)解(jie)而在體(ti)內累積大(da)量脯(pu)an酸，降(jiang)低(di) ProDH 活性對(dui)於(yu)調節(jie)滲(shen)透(tou)平(ping)衡、防(fang)止滲(shen)透(tou)脅迫(po)對植(zhi)物(wu)造(zao)成(cheng)傷害、清(qing)除(chu)自(zi)由基(ji)、保護細胞結(jie)構具有重要意義(yi)。
脯(pu)an酸脫(tuo)氫酶(mei)試劑(ji)盒(he) 氨(an)基(ji)酸(suan)

脯(pu)an酸脫(tuo)氫酶(mei)（ Proline dehydrogenase，ProDH)試劑(ji)盒(he)說明(ming)書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa) 50 管/48 樣

脯(pu)an酸脫(tuo)氫酶(mei)試劑(ji)盒(he) 氨(an)基(ji)酸(suan)

正(zheng)式(shi)測定(ding)前務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個預期(qi)差異(yi)較(jiao)大(da)的樣(yang)本做(zuo)預(yu)測定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)：

ProDH 是存在於(yu)線粒體(ti)內的催化(hua)脯(pu)an酸降(jiang)解(jie)的關鍵(jian)酶(mei)。脯(pu)an酸是分布zui廣(guang)泛的壹種(zhong)滲(shen)透(tou)物(wu)質，在脅迫(po)條(tiao)件下(xia)很(hen)多(duo)植(zhi)物(wu)可以(yi)通過(guo)增(zeng)加(jia)合(he)成(cheng)、減(jian)少(shao)降(jiang)解(jie)而在體(ti)內累積大(da)量脯(pu)an酸，降(jiang)低(di) ProDH 活性對(dui)於(yu)調節(jie)滲(shen)透(tou)平(ping)衡、防(fang)止滲(shen)透(tou)脅迫(po)對植(zhi)物(wu)造(zao)成(cheng)傷害、清(qing)除(chu)自(zi)由基(ji)、保護細胞結(jie)構具有重要意義(yi)。

測(ce)定(ding)原(yuan)理(li)：

利(li)用(yong)異(yi)liu氰酸(suan)甲(jia)酯(zhi)檢測(ce) ProDH 催(cui)化(hua)的脫(tuo)氫反應，600nm 處吸(xi)光(guang)值(zhi)的(de)吸(xi)光(guang)值(zhi)的(de)變(bian)化(hua)反映酶(mei)活性的(de)高低(di)。

組成(cheng)：

試劑(ji)三(san)臨用前加(jia)入 8ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)充分(fen)溶解(jie)待用(yong)，用不完(wan)的(de)試劑(ji) 4℃保存(cun)；試劑(ji)四臨用前加(jia)入 8ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)充分(fen)溶解(jie)待用(yong)，用不完(wan)的(de)試劑(ji) 4℃保存(cun)；

自(zi)備儀器(qi)和(he)用品(pin)：

可見(jian)分光(guang)光(guang)度計、臺(tai)式(shi)離(li)心機、可調式(shi)移液器(qi)、1ml 玻璃(li)比(bi)色皿(min)、研(yan)缽、冰(bing)和(he)蒸餾(liu)水(shui)。

粗(cu)酶(mei)液提取：

按(an)照(zhao)組織質量(liang)（g）：提取液體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議稱取(qu)約 0.1g 樣(yang)本，加(jia)入 1ml 提取液），進行冰浴(yu)勻漿(jiang)，1500g 4℃離心(xin) 15min，取上(shang)清液於(yu)壹支新(xin)的(de) EP 管中(zhong)，加(jia)入壹滴(di)試劑(ji)壹（用 10μl 的(de)槍頭加(jia)入），渦旋混勻，冰(bing)浴(yu)放置(zhi) 30min 後，16000g 4℃離(li)心(xin) 20min，取(qu)上(shang)清置(zhi)冰上(shang)待測(ce)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計或酶標(biao)儀預(yu)熱 30min 以(yi)上(shang)，調節(jie)波長(chang)至 600nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調零(ling)。

2、樣(yang)本測(ce)定(ding)

混(hun)合(he)液的(de)配制：首先(xian)將(jiang)試劑(ji)三(san)和(he)試劑(ji)四配成(cheng)溶液（見(jian)試劑(ji)的(de)組成(cheng)和(he)配制），臨用前根據(ju)用量按(an)照(zhao)試劑(ji)二(er)（V）：試劑(ji)三(san)（V）：試劑(ji)四（V）=7.2（ml）：0.9（ml）：0.9（ml）的比(bi)例(li)充分(fen)混(hun)勻。（註(zhu)意：現(xian)配現(xian)用，用多(duo)少(shao)配(pei)多少(shao)），置(zhi)於(yu) 30℃水浴(yu) 5min；

試劑(ji)五(wu)的(de)配(pei)制：取試劑(ji)五(wu)壹支，臨用前加(jia)入 1ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)充分(fen)溶解(jie)待用(yong)，現配(pei)現用。

（3）1ml 玻璃(li)比(bi)色皿(min)中(zhong)加(jia)入 175μl 樣(yang)本、75μl 試劑(ji)五(wu)和(he) 750μl 混合(he)液，混(hun)勻，立(li)即記錄(lu) 600nm 處初(chu)始(shi)吸(xi)光(guang)值(zhi)A1 和(he) 10min 後的(de)吸(xi)光(guang)值(zhi)A2，計算ΔA=A2-A1。

ProDH 活性計算：

按(an)樣(yang)本蛋(dan)白濃(nong)度計算：

單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：每(mei)分(fen)鐘每(mei) mg 組織蛋(dan)白在每(mei)ml 反應體(ti)系(xi)中(zhong)使 600nm 處吸(xi)光(guang)值(zhi)變(bian)化(hua) 0.01 為(wei)壹個酶活力單(dan)位(wei)。

ProDH（U/mg prot）=ΔA×V 反總÷（V 樣(yang)×Cpr）÷0.01÷T =57.14×ΔA÷Cpr

按(an)樣(yang)本鮮(xian)重(zhong)計算：

單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：每(mei)分(fen)鐘每(mei) g 組織在每(mei)ml 反應體(ti)系(xi)中(zhong)使 600nm 處吸(xi)光(guang)值(zhi)變(bian)化(hua) 0.01 為(wei)壹個酶活力單(dan)位(wei)。

ProDH（U/g 鮮(xian)重(zhong)）=ΔA×V 反總÷(W× V 樣(yang)÷V 樣總)÷0.01÷T =57.14×ΔA÷W

V 反總：反應體(ti)系(xi)總體(ti)積，1ml； V 樣：加(jia)入樣(yang)本體(ti)積，0.175ml；V 樣總：加(jia)入提取液體(ti)積，1 ml； T：反應時間(jian)，10 min；Cpr：樣本蛋(dan)白質濃(nong)度，mg/ml；W：樣(yang)本質量(liang)，g。

脯(pu)an酸脫(tuo)氫酶(mei)試劑(ji)盒(he) 氨(an)基(ji)酸(suan)