肝(gan)臟(zang)、腎(shen)臟(zang)是(shi)氨基酸代謝(xie)的主要器官(guan)，故(gu)尿(niao)中氨基酸的變(bian)化最(zui)能反應(ying)肝(gan)、腎的(de)生(sheng)理狀(zhuang)態(tai)。另(ling)外，氨基酸還(hai)能反應(ying)灼(zhuo)傷、傷寒等方面(mian)情況。植物體內氨基酸含量(liang)對(dui)研究(jiu)植物在不同(tong)條(tiao)件(jian)下(xia)及不同(tong)生(sheng)長(chang)發(fa)育時(shi)期氮代(dai)謝(xie)變化(hua)、植物對氮素(su)的吸收、運(yun)輸、同(tong)化(hua)及營(ying)養狀況等有重要意(yi)義(yi)。
氨基酸含量(liang)測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒 試(shi)劑(ji)

氨基酸(amino acid, AA)含量(liang)測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書(shu)

分(fen)光光(guang)度(du)法 50 管(guan)/48 樣(yang)

氨基酸含量(liang)測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒 試(shi)劑(ji)

正(zheng)式(shi)測(ce)定(ding)前務(wu)必取 2-3 個(ge)預(yu)期差異(yi)較大的樣(yang)本做預(yu)測(ce)定(ding)測定(ding)意(yi)義(yi)：

肝(gan)臟(zang)、腎(shen)臟(zang)是(shi)氨基酸代謝(xie)的主要器官(guan)，故(gu)尿(niao)中氨基酸的變(bian)化最(zui)能反應(ying)肝(gan)、腎的(de)生(sheng)理狀(zhuang)態(tai)。另(ling)外，氨基酸還(hai)能反應(ying)灼(zhuo)傷、傷寒等方面(mian)情況。植物體內氨基酸含量(liang)對(dui)研究(jiu)植物在不同(tong)條(tiao)件(jian)下(xia)及不同(tong)生(sheng)長(chang)發(fa)育時(shi)期氮代(dai)謝(xie)變化(hua)、植物對氮素(su)的吸收、運(yun)輸、同(tong)化(hua)及營(ying)養狀況等有重要意(yi)義(yi)。

測(ce)定(ding)原理：

氨基酸的α-氨基可與(yu)水(shui)合茚三(san)酮反應(ying)，產(chan)生(sheng)藍紫色化(hua)合物，在(zai) 570 nm 有(you)特(te)征吸收峰(feng)；通(tong)過(guo)測定(ding) 570 nm吸光度(du)，來(lai)計(ji)算氨基酸含量(liang)。

組(zu)成：

試(shi)劑(ji)三(san)臨(lin)用(yong)前加(jia)入 2 ml 無(wu)水(shui)乙醇(chun)，蓋緊(jin)後充(chong)分(fen)混勻，再加(jia)入 28ml 蒸餾水混(hun)勻，避(bi)光(guang)保(bao)存。試(shi)劑(ji)四(si)臨(lin)用(yong)前加(jia) 5 ml 蒸餾水，充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)。

標準(zhun)品臨(lin)用(yong)前加(jia) 10 ml 蒸餾水，充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)。1μmol/ml 標準(zhun)液，4℃避(bi)光(guang)保(bao)存。

自(zi)備儀器和(he)用(yong)品：

臺式離(li)心(xin)機、可見分(fen)光光(guang)度(du)計(ji)、水(shui)浴鍋(guo)、1ml 玻璃(li)比色皿(min)、可(ke)調式移液槍(qiang)、研(yan)缽、無(wu)水(shui)乙醇(chun)、冰和(he)蒸餾水。

樣(yang)品中 AA 提取：

1、按(an)照組(zu)織(zhi)質(zhi)量（g）：試(shi)劑(ji)壹(yi)體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比例（建(jian)議稱取約(yue) 0.1g 組織，加(jia)入 1ml 試(shi)劑(ji)壹(yi)）進行室溫(wen)勻漿，然後轉移到(dao) 1.5 ml EP 管中，蓋緊(jin)後（防(fang)止(zhi)水(shui)分(fen)散失(shi)）置(zhi)於(yu)沸(fei)水(shui)浴提取 15 min；自來(lai)水(shui)冷(leng)卻(que)後，8000g，4℃離(li)心(xin) 10min，上(shang)清液置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。

2、細(xi)菌或(huo)培(pei)養細(xi)胞(bao)：先(xian)收集細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)到(dao)離(li)心(xin)管內，離(li)心(xin)後棄上(shang)清；按照細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)（104 個）：試(shi)劑(ji)壹(yi)體積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例（建(jian)議 500 萬細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)加(jia)入 1ml 試(shi)劑(ji)壹(yi)），超聲波(bo)破(po)碎(sui)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)（冰(bing)浴，功率 20％或(huo) 200W，超(chao)聲 3s，間隔 10s，重復 30 次(ci)）；8000g，4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。

3、血(xue)清等液體：直接(jie)檢測。

測(ce)定(ding)步(bu)驟(zhou)：

分(fen)光光(guang)度(du)計(ji)預(yu)熱(re) 30 min，調節(jie)波(bo)長(chang)到(dao) 570 nm，蒸餾水調零。

空(kong)白(bai)管(guan)：取EP 管，加(jia)入 50μl 蒸餾水，500μl 試(shi)劑(ji)二(er)，500μl 試(shi)劑(ji)三(san)和(he) 50μl 試(shi)劑(ji)四(si)，混勻後蓋緊(jin)瓶(ping)蓋（防(fang)止(zhi)水(shui)分(fen)散失(shi)），置(zhi)於(yu)沸(fei)水(shui)浴中保(bao)溫(wen) 15 min，冷(leng)卻(que)後反復顛(dian)倒EP 管數(shu)次(ci)，於 570nm 測定(ding)吸光值(zhi)，記為(wei)A 空白管。顯(xian)色(se)後務(wu)必在 30min 內測(ce)完(wan)。

標準(zhun)管：取EP 管，加(jia)入 50μl 標準(zhun)品，500μl 試(shi)劑(ji)二(er)，500μl 試(shi)劑(ji)三(san)和(he) 50μl 試(shi)劑(ji)四(si)，混勻後蓋緊(jin)瓶(ping)蓋（防(fang)止(zhi)水(shui)分(fen)散失(shi)），置(zhi)於(yu)沸(fei)水(shui)浴中保(bao)溫(wen) 15 min，冷(leng)卻(que)後反復顛(dian)倒EP 管數(shu)次(ci)，於 570nm 測定(ding)吸光值(zhi)，記為(wei)A 標準(zhun)管。顯(xian)色(se)後務(wu)必在 30min 內測(ce)完(wan)。

測(ce)定(ding)管：取EP 管，加(jia)入 50μl 上(shang)清液，500μl 試(shi)劑(ji)二(er)，500μl 試(shi)劑(ji)三(san)和(he) 50μl 試(shi)劑(ji)四(si)，混勻後蓋緊(jin)瓶(ping)蓋（防(fang)止(zhi)水(shui)分(fen)散失(shi)），置(zhi)於(yu)沸(fei)水(shui)浴中保(bao)溫(wen) 15 min，冷(leng)卻(que)後反復顛(dian)倒EP 管數(shu)次(ci)，於 570nm 測定(ding)吸光值(zhi)，記為(wei)A 測定(ding)管。顯(xian)色(se)後務(wu)必在 30min 內測(ce)完(wan)。

註(zhu)意(yi)：空(kong)白管和(he)標準(zhun)管只(zhi)需要測定(ding)壹次(ci)。

氨基酸含量(liang)計(ji)算公(gong)式(shi)：

按(an)照樣(yang)本(ben)質(zhi)量計(ji)算

氨基酸含量(liang)（μmol /g 鮮(xian)重）=[C 標準(zhun)品×V 標準(zhun)品×(A 測定(ding)管－A 空(kong)白管)÷(A 標準(zhun)管－A 空白(bai)管)]×（V樣總÷V 樣）÷W

=1×(A 測(ce)定(ding)管－A 空(kong)白管)÷(A 標準(zhun)管－A 空白(bai)管) ÷W

按(an)照樣(yang)本(ben)蛋白濃(nong)度(du)計(ji)算

氨基酸含量(liang)（μmol /mg prot）=[C 標準(zhun)品×V 標準(zhun)品×(A 測定(ding)管－A 空(kong)白管)÷(A 標準(zhun)管－A 空白(bai)管)]÷

（V 樣(yang)×Cpr）

=1×(A 測(ce)定(ding)管－A 空(kong)白管)÷(A 標準(zhun)管－A 空白(bai)管) ÷Cpr

按(an)照細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)計(ji)算

氨基酸含量(liang)（μmol /104 cell）=[C 標準(zhun)品×V 標準(zhun)品×(A 測定(ding)管－A 空(kong)白管)÷(A 標準(zhun)管－A 空白(bai)管)] ×

（V 樣(yang)總(zong)÷V 樣(yang)×細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)）

=1×(A 測(ce)定(ding)管－A 空(kong)白管)÷(A 標準(zhun)管－A 空白(bai)管) ÷細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)

按(an)照液體體積(ji)計(ji)算

氨基酸含量(liang)（μmol /ml）=[C 標準(zhun)品×V 標準(zhun)品×(A 測定(ding)管－A 空(kong)白管)÷(A 標準(zhun)管－A 空白(bai)管)]÷V 樣

=1×(A 測(ce)定(ding)管－A 空(kong)白管)÷(A 標準(zhun)管－A 空白(bai)管)

C 標準(zhun)品：標準(zhun)品濃(nong)度(du)，1μmol/ml；V 標準(zhun)品：反應(ying)體(ti)系(xi)中加(jia)入標準(zhun)品體積(ji)，0.05 ml；W：樣(yang)品質(zhi)量， g；V 樣(yang)：反應(ying)體(ti)系(xi)中加(jia)入樣(yang)品提取液體積(ji)，0.05 ml；V 樣(yang)總(zong)：樣(yang)品提取液總體積(ji)，1ml，Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白 濃(nong)度(du)，mg/ml。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：

試(shi)劑(ji)盒中試(shi)劑(ji)三(san)、試(shi)劑(ji)四(si)和(he)標準(zhun)品均需臨(lin)用(yong)前配(pei)制(zhi)，且避(bi)光(guang)保(bao)存，配制(zhi)好未(wei)使(shi)用(yong)完(wan)的 4℃保存(cun)且(qie) 3

天(tian)內使(shi)用(yong)完(wan)畢。

為(wei)保證(zheng)實驗(yan)結果(guo)的準(zhun)確性，需先取 1-2 個樣(yang)做預(yu)實(shi)驗(yan)，如果(guo)測定(ding)的吸光值(zhi)過(guo)高(gao)（高(gao)於(yu) 2.5），用(yong)蒸餾水稀(xi)釋(shi)後再測(ce)定(ding)。

脯(pu)an酸(suan)和(he)羥(qiang)脯(pu)an酸(suan)與(yu)茚三(san)酮反應(ying)在(zai) 570nm 處無(wu)吸收峰(feng)，因(yin)此，570nm 處測定(ding)結果(guo)不含這(zhe)兩(liang)種(zhong)氨基酸的量(liang)。

最(zui)di檢出限為(wei) 100μmol/L。

氨基酸含量(liang)測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒 試(shi)劑(ji)