蛋(dan)白(bai)質含(han)有三(san)種含(han)硫(liu)an基(ji)酸：甲硫(liu)an酸、胱an酸和Cys。其(qi)中(zhong)，Cys 是唯yi壹種含(han)有巰(qiu)基(ji)的(de)含(han)硫(liu)an基(ji)酸，從甲硫(liu)a酸轉化(hua)而(er)來(lai)，並且可(ke)與(yu)胱an酸互相(xiang)轉化(hua)。
半(ban)胱an酸含(han)量測(ce)定試(shi)劑(ji)盒 氨(an)基(ji)酸

半(ban)胱an酸（cysteine, Cys）含(han)量測(ce)定試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書

分光(guang)光(guang)度法(fa) 50 管/48 樣

半(ban)胱an酸含(han)量測(ce)定試(shi)劑(ji)盒 氨(an)基(ji)酸

正(zheng)式(shi)測(ce)定前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個預期(qi)差異較(jiao)大的(de)樣本(ben)做(zuo)預(yu)測(ce)定測(ce)定意義(yi)：

蛋(dan)白(bai)質含(han)有三(san)種含(han)硫(liu)an基(ji)酸：甲硫(liu)an酸、胱an酸和Cys。其(qi)中(zhong)，Cys 是唯yi壹種含(han)有巰(qiu)基(ji)的(de)含(han)硫(liu)an基(ji)酸，從甲硫(liu)a酸轉化(hua)而(er)來(lai)，並且可(ke)與(yu)胱an酸互相(xiang)轉化(hua)。Cys 參(can)與(yu)蛋(dan)白(bai)質二(er)硫(liu)鍵的(de)形成，經常是蛋(dan)白(bai)質活性(xing)中(zhong)心(xin)的(de)組成部分(fen)，還(hai)可以為(wei)其(qi)它(ta)生理(li)生化(hua)反(fan)應(ying)提(ti)供(gong)巰基(ji)。此外，Cys 大量積聚(ju)在(zai)皮膚(fu)和粘(zhan)膜(mo)表(biao)面，在(zai)角蛋(dan)白(bai)生成中(zhong)維持(chi)重(zhong)要(yao)的(de)巰基(ji)酶的(de)活性(xing)，並且補(bu)充(chong)巰基(ji)，以維持(chi)皮膚(fu)的(de)正(zheng)常代(dai)謝(xie)，調(tiao)節表(biao)皮最(zui)下層的(de)色素(su)細胞(bao)生成的(de)底層(ceng)黑色(se)素。具有美(mei)白、解(jie)毒(du)、改(gai)善(shan)炎癥和過(guo)敏性(xing)皮膚(fu)等(deng)作(zuo)用。

測(ce)定原(yuan)理(li)：

Cys 還(hai)原磷鎢(wu)酸生成鎢(wu)藍，在(zai) 600nm 處有(you)吸(xi)收(shou)峰；通過(guo) 600nm 吸光(guang)度，計(ji)算(suan)Cys 含(han)量。

組成：

試劑(ji)三(san)用(yong)前 1 天，向(xiang)試(shi)劑(ji)三中(zhong)加(jia) 5 ml 蒸(zheng)餾(liu)水充(chong)分溶解，再加(jia) 85％磷酸 1.25ml，混勻後蓋緊(jin)（防(fang)止(zhi)水分散(san)失(shi)）沸水浴 2h；冷卻後加(jia) 20 ml 蒸(zheng)餾(liu)水，4℃可保(bao)存(cun) 2 周。

標準品(pin)臨用(yong)前加(jia) 10 ml 蒸(zheng)餾(liu)水，充(chong)分溶解。1μmol/ml 標準液，4℃避光(guang)保存(cun)。用(yong)不(bu)完的(de)試劑(ji) 4℃可保(bao)存 3 天。

自備(bei)儀(yi)器和用(yong)品(pin)：

可見(jian)分光(guang)光(guang)度計(ji)、低溫(wen)離心機(ji)、可調(tiao)式移(yi)液槍、1ml 玻璃(li)比(bi)色(se)皿(min)、85％磷(lin)酸和蒸(zheng)餾(liu)水。

半(ban)胱an酸提取：

液體(ti)樣品(pin)中(zhong)半(ban)胱an酸提取：取 0.1ml 液體(ti)樣品(pin)，加試(shi)劑壹(yi) 0.9ml，充(chong)分混(hun)勻(yun)，8000g

4℃離心 10min，取(qu)上(shang)清液，待測(ce)。

組織(zhi)中(zhong)半(ban)胱an酸提取：按(an)照(zhao)組(zu)織(zhi)質(zhi)量（g）：試劑(ji)壹體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例（建議(yi)稱取約0.1g組織(zhi)，加(jia)入 1ml 試(shi)劑(ji)壹）進(jin)行(xing)冰浴勻漿，8000g 4℃離心 10 min，取(qu)上(shang)清液待測(ce)。

細菌(jun)或(huo)培養細胞(bao)：先收(shou)集細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)到離心管內，離心後(hou)棄上(shang)清；按(an)照(zhao)細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)數(shu)量（104 個）：試(shi)劑壹(yi)體(ti)積（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比(bi)例（建議(yi) 500 萬(wan)細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)加入 1ml 試劑壹），超(chao)聲波(bo)破(po)碎細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)（冰浴，功(gong)率 20％或(huo) 200W，超(chao)聲 3s，間(jian)隔 10s，重(zhong)復(fu) 30 次(ci)）；8000g 4℃離心 10min，取(qu)上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

測(ce)定操(cao)作(zuo)：

分光(guang)光(guang)度計(ji)預熱 30 min，調(tiao)節波(bo)長到 600 nm，蒸(zheng)餾(liu)水調(tiao)零(ling)。

空白(bai)管：取 1ml 玻璃(li)比(bi)色(se)皿(min)，加(jia)入 100 μl 蒸(zheng)餾(liu)水，500μl 試劑(ji)二(er)，500μl 試(shi)劑三(san)，混(hun)勻(yun)後(hou)室(shi)溫(wen)靜置

15 min，於 600nm 處(chu)測(ce)定吸(xi)光(guang)值，記為(wei)A 空白管。

標準管：取 1ml 玻璃(li)比(bi)色(se)皿(min)，加(jia)入 100 μl 標準液，500μl 試劑二(er)，500μl 試(shi)劑三(san)，混(hun)勻(yun)後(hou)室(shi)溫(wen)靜置

15 min，於 600nm 處(chu)測(ce)定吸(xi)光(guang)值，記為(wei)A 標準管。

測(ce)定管：取 1ml 玻璃(li)比(bi)色(se)皿(min)，加(jia)入 100 μl 上(shang)清液，500μl 試劑二(er)，500μl 試(shi)劑三(san)，混(hun)勻(yun)後(hou)室(shi)溫(wen)靜置

15 min，於 600nm 處(chu)測(ce)定吸(xi)光(guang)值，記為(wei)A 測(ce)定管。

註(zhu)意：空(kong)白(bai)管和標準管只需(xu)要(yao)做(zuo)壹(yi)次(ci)。

計(ji)算(suan)公式(shi)：

按(an)液體(ti)樣品(pin)的(de)體(ti)積計(ji)算(suan)：

半(ban)胱an酸含(han)量（μmol/ml）=[C 標準品(pin)×V 標準品(pin)×(A 測(ce)定管－A 空白(bai)管)÷(A 標準管－A 空白(bai)管)]×（V樣總(zong)÷V 樣）=1×(A 測(ce)定管－A 空白(bai)管)÷(A 標準管－A 空白(bai)管)

按(an)樣本(ben)質量計(ji)算(suan)：

半(ban)胱an酸含(han)量（μmol/g 鮮重）=[C 標準品(pin)×V 標準品(pin)×(A 測(ce)定管－A 空白(bai)管)÷(A 標準管－A 空白(bai)管)]×

（V 樣總(zong)÷V 樣(yang)）÷W=1×(A 測(ce)定管－A 空白(bai)管)÷(A 標準管－A 空白(bai)管) ÷W

按(an)照(zhao)蛋(dan)白(bai)濃度計(ji)算(suan)：

半(ban)胱an酸含(han)量（μmol /mg prot）= [C 標準品(pin)×V 標準品(pin)×(A 測(ce)定管－A 空白(bai)管)÷(A 標準管－A 空白(bai)管)]÷

（V 樣×Cpr）=1×(A 測(ce)定管－A 空白(bai)管)÷(A 標準管－A 空白(bai)管) ÷Cpr

按(an)細胞(bao)數(shu)量計(ji)算(suan)：

氨(an)基(ji)酸含(han)量（μmol /104 cell）=[C 標準品(pin)×V 標準品(pin)×(A 測(ce)定管－A 空白(bai)管)÷(A 標準管－A 空白(bai)管)] ×

（V 樣總(zong)÷V 樣(yang)×細(xi)胞數(shu)量）=1×(A 測(ce)定管－A 空白(bai)管)÷(A 標準管－A 空白(bai)管) ÷細胞(bao)數(shu)量

C 標準品(pin)：標準品(pin)濃度(du)，1μmol/ml；V 標準品(pin)：反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)加(jia)入(ru)標準品(pin)體(ti)積，0.1 ml；V 樣(yang)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)加(jia)入(ru)樣(yang)品(pin)提取(qu)液體(ti)積，0.1 ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入提取(qu)液體(ti)積，1ml。W：樣(yang)品(pin)質量，g；Cpr：樣本(ben)蛋(dan)白(bai)濃度， mg/ml。

註(zhu)意事項：

最(zui)di檢出限(xian)為(wei) 100μmol/L。

半(ban)胱an酸含(han)量測(ce)定試(shi)劑(ji)盒 氨(an)基(ji)酸