鳥(niao)an酸(suan)和α-酮戊(wu)二(er)酸(suan)在(zai)鳥(niao)an酸(suan)轉(zhuan)氨(an)酶(mei)和 NADH 作用(yong)下(xia)發生(sheng)氨基(ji)轉(zhuan)移(yi)反(fan)應生(sheng)成(cheng)吡咯啉(lin)-5-羧(suo)酸(suan)（P5C），同時(shi)產(chan)生(sheng)NAD，通(tong)過檢測 340nm 處的吸(xi)光(guang)度的變化(hua)可反(fan)映出鳥(niao)an酸(suan)轉(zhuan)氨(an)酶(mei)活(huo)性的高低。
鳥(niao)an酸(suan)轉(zhuan)氨(an)酶(mei)試劑(ji)盒(he) 氨(an)基(ji)酸(suan)

鳥(niao)an酸(suan)轉(zhuan)氨(an)酶(mei)(nithine-δ-aminotransferase ,δ-OAT)試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書

分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa) 50 管(guan)/48 樣

鳥(niao)an酸(suan)轉(zhuan)氨(an)酶(mei)試劑(ji)盒(he) 氨(an)基(ji)酸(suan)

正(zheng)式(shi)測定(ding)前務必(bi)取(qu) 2-3 個預期差異較(jiao)大(da)的樣本做(zuo)預測定(ding)測定(ding)意義(yi)：

脯(pu)an酸(suan)是植(zhi)物(wu)體(ti)內(nei)適(shi)應(ying)逆境(jing)脅迫(po)的壹(yi)種重要的滲透(tou)調節(jie)物(wu)質(zhi)。高等(deng)植(zhi)物(wu)中脯(pu)an酸(suan)代(dai)謝(xie)因(yin)其(qi)初(chu)始底(di)物不(bu)同酸(suan)途(tu)徑的關，分為(wei)谷an酸(suan)( Glu) 和鳥(niao)an酸(suan)( Orn) 兩(liang)條(tiao)合(he)成(cheng)途(tu)徑。鳥(niao)an酸(suan)轉(zhuan)氨(an)酶(mei)( δ-OAT) 是以鳥(niao)an酸(suan)為(wei)前體(ti)合成(cheng)脯(pu)氨鍵(jian)酶(mei)，對植(zhi)物(wu)適(shi)應逆境(jing)脅迫(po)起關鍵(jian)作(zuo)用(yong)。

測定(ding)原理：

鳥(niao)an酸(suan)和α-酮戊(wu)二(er)酸(suan)在(zai)鳥(niao)an酸(suan)轉(zhuan)氨(an)酶(mei)和 NADH 作用(yong)下(xia)發生(sheng)氨基(ji)轉(zhuan)移(yi)反(fan)應生(sheng)成(cheng)吡咯啉(lin)-5-羧(suo)酸(suan)（P5C），同時(shi)產(chan)生(sheng)NAD，通(tong)過檢測 340nm 處的吸(xi)光(guang)度的變化(hua)可反(fan)映出鳥(niao)an酸(suan)轉(zhuan)氨(an)酶(mei)活(huo)性的高低。

組成(cheng)：

試劑(ji)二(er)臨(lin)用(yong)前加 20ml 試劑(ji)壹(yi)充分溶解(jie)；用(yong)不(bu)完(wan)的試劑(ji) 4℃保存(cun)。試劑(ji)三臨(lin)用(yong)前加 20ml 試劑(ji)壹(yi)充分溶解(jie)；用(yong)不(bu)完(wan)的試劑(ji) 4℃保存(cun)。試劑(ji)四(si)臨用(yong)前每瓶加(jia) 10ml 試劑(ji)壹(yi)充分溶解(jie)；現(xian)配(pei)現(xian)用(yong)。

自備儀(yi)器和用(yong)品：

天平、低溫離心(xin)機(ji)、研缽、紫(zi)外(wai)可(ke)見分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)、1ml 石(shi)英比(bi)色(se)皿。

酶(mei)液(ye)提(ti)取(qu)：

1、組織(zhi)：按(an)照(zhao)質量（g）：提(ti)取(qu)液體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比例（建(jian)議(yi)稱取(qu)約(yue) 0.1g，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液）加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液，冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿(jiang)後(hou)於(yu) 4℃，10000g 離(li)心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)置(zhi)冰上(shang)待(dai)測。

2、細胞：按(an)照(zhao)細胞數(shu)量（104 個）：提(ti)取(qu)液體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的比例（建(jian)議(yi) 500 萬細胞加(jia)入(ru)1ml 提(ti)取(qu)液），冰(bing)浴(yu)超聲波破(po)碎細胞（功(gong)率 300w，超聲 3 秒，間(jian)隔(ge) 7 秒，總(zong)時(shi)間(jian) 3min）；然後(hou) 4℃，10000g離心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)置(zhi)冰上(shang)待(dai)測。

3、液(ye)體(ti)：直接(jie)檢(jian)測。

測定(ding)操作：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)預(yu)熱 30min，調節(jie)波(bo)長(chang)至(zhi) 340nm。

2、將(jiang)配(pei)好的試劑(ji)二(er)、三(san)、四(si) 37℃預熱 5min。（註(zhu)意(yi)：粉(fen)劑(ji)試劑(ji)需要(yao)自行(xing)配(pei)制(zhi)）

3、取(qu) 1ml 石英(ying)比(bi)色皿，依次加(jia)入(ru) 300μl 試劑(ji)二(er)，300μl 試劑(ji)三，300μl 試劑(ji)四(si)，100μl 粗酶(mei)液，充分混勻(yun)，記錄 340nm 處初(chu)始吸(xi)光(guang)值(zhi)和 37℃反(fan)應 10min 的吸(xi)光(guang)值(zhi)A2，△A=A1-A2。

計(ji)算(suan)公式(shi)：

按(an)照(zhao)樣本蛋白(bai)濃(nong)度計(ji)算(suan)

酶(mei)活(huo)單位定(ding)義(yi)：每毫(hao)克組織(zhi)蛋白(bai)每分鐘(zhong)消耗 1 nmol 的NADH 定(ding)義(yi)為壹(yi)個酶活力單位。 δ-OAT（nmol/min /mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總(zong)÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T

=160.77×ΔA÷Cpr

按(an)照(zhao)樣本質量計算

酶(mei)活(huo)單位定(ding)義(yi)：每克組織(zhi)每分鐘(zhong)消耗 1 nmol 的NADH 定(ding)義(yi)為壹(yi)個酶活力單位。 δ-OAT（nmol/min /g 鮮(xian)重）=ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總(zong)÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T

=160.77×ΔA÷W

按(an)照(zhao)細胞數(shu)量計算(suan)

酶(mei)活(huo)單位定(ding)義(yi)：每 104 個細胞每分鐘(zhong)消耗 1 nmol 的NADH 定(ding)義(yi)為壹(yi)個酶活力單位。 δ-OAT（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總(zong)÷(V 樣(yang)×細胞數(shu)量÷V 樣總(zong)) ÷T

=160.77×ΔA÷細胞數(shu)量

按(an)照(zhao)液體(ti)體(ti)積計算(suan)

酶(mei)活(huo)單位定(ding)義(yi)：每毫(hao)升(sheng)液體(ti)每分鐘(zhong)消耗 1 nmol 的NADH 定(ding)義(yi)為壹(yi)個酶活力單位。 δ-OAT（nmol/min /ml）＝ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總(zong)÷V 樣(yang)÷T

=160.77×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應體(ti)系總(zong)體(ti)積，1ml；ε：NADH 摩爾消光(guang)系(xi)數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光(guang)徑，1cm； V 樣(yang)：加(jia)入樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.1ml；V 樣總(zong)：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液體(ti)積，1ml；T：反(fan)應時(shi)間(jian)，10 min；Cpr：樣本(ben)蛋白(bai)質濃(nong)度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量(liang)，g

鳥(niao)an酸(suan)轉(zhuan)氨(an)酶(mei)試劑(ji)盒(he) 氨(an)基(ji)酸(suan)