還(hai)原(yuan)糖廣泛(fan)存在(zai)於(yu)動物、植(zhi)物、微生物和(he)培(pei)養(yang)細胞(bao)中。植(zhi)物體內(nei)的還原(yuan)糖主(zhu)要包(bao)括(kuo)葡(pu)萄糖(tang)、果(guo)糖(tang)和(he)麥(mai)芽(ya)糖(tang)等，是最chang見的單糖(tang)和(he)雙(shuang)糖(tang)，其(qi)中葡(pu)萄糖和(he)果(guo)糖(tang)不(bu)僅(jin)是(shi)呼吸(xi)作用的主(zhu)要底(di)物，也(ye)是進(jin)壹步(bu)合成蔗糖、澱粉(fen)和(he)纖維素的底(di)物。
還原(yuan)糖含(han)量(liang)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖(tang)代(dai)謝(xie)

還(hai)原(yuan)糖含(han)量(liang)試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書

分光光(guang)度法 50 管(guan)/24 樣(yang)

還(hai)原(yuan)糖含(han)量(liang)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖(tang)代(dai)謝(xie)

正(zheng)式(shi)測定(ding)前務必(bi)取 2-3 個(ge)預期(qi)差異(yi)較大的樣(yang)本(ben)做(zuo)預測定(ding)測定(ding)意義(yi)：

還(hai)原(yuan)糖廣泛(fan)存在(zai)於(yu)動物、植(zhi)物、微生物和(he)培(pei)養(yang)細胞(bao)中。植(zhi)物體內(nei)的還原(yuan)糖主(zhu)要包(bao)括(kuo)葡(pu)萄糖(tang)、果(guo)糖(tang)和(he)麥(mai)芽(ya)糖(tang)等，是最chang見的單糖(tang)和(he)雙(shuang)糖(tang)，其(qi)中葡(pu)萄糖和(he)果(guo)糖(tang)不(bu)僅(jin)是(shi)呼吸(xi)作用的主(zhu)要底(di)物，也(ye)是進(jin)壹步(bu)合成蔗糖、澱粉(fen)和(he)纖維素的底(di)物。

測定(ding)原(yuan)理：

加(jia)熱(re)促進(jin)堿性溶(rong)液(ye)中3,5-二硝(xiao)基(ji)水(shui)楊(yang)酸溶(rong)液(ye)與還(hai)原(yuan)糖生成(cheng)棕(zong)紅(hong)色(se)氨基(ji)化合(he)物，在540nm 有(you)特征吸(xi)收(shou)峰；在(zai)壹定(ding)的濃(nong)度(du)範圍(wei)內，還原(yuan)糖含(han)量(liang)與(yu) 540nm 吸(xi)光度成線性(xing)關系(xi)，根(gen)據標準曲線，即(ji)可求(qiu)出樣(yang)品(pin)中還(hai)原(yuan)糖的量。

組成：

自(zi)備(bei)儀器(qi)和(he)用(yong)品(pin)：

可(ke)見分光光(guang)度計(ji)、水(shui)浴(yu)鍋、可調式(shi)移(yi)液(ye)器(qi)、1ml 玻璃比色(se)皿、研缽(bo)、蒸(zheng)餾水(shui)。

樣(yang)品(pin)中還(hai)原(yuan)糖的提取：

1、細菌或(huo)細胞(bao)的處(chu)理：收(shou)集細菌或(huo)細胞(bao)到(dao)離(li)心(xin)管(guan)內(nei)，離(li)心(xin)後棄(qi)上(shang)清；按(an)照(zhao)細菌或(huo)細胞(bao)數(shu)量（104 個(ge)）：試劑(ji)壹體積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例(li)（建(jian)議(yi) 1000 萬(wan)細菌或(huo)細胞(bao)加(jia)入(ru) 2ml 試劑壹），超(chao)聲波(bo)破(po)碎細菌或(huo)細胞(bao)（冰(bing)浴，功率 20％或(huo) 200W，超(chao)聲 3S，間(jian)隔 10S，重復(fu) 30 次(ci)），轉(zhuan)移(yi)到(dao)有(you)蓋離心(xin)管(guan)中（防(fang)止(zhi)加(jia)熱(re)時水(shui)分散失(shi)），80℃水(shui)浴(yu)中 40min 並(bing)且振(zhen)蕩 8~10 次(ci)，8000g，25℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清供(gong)測定(ding)用。

2、組織的處(chu)理：按(an)照(zhao)組織質(zhi)量(liang)（g）：試(shi)劑(ji)壹體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比例(li)（建(jian)議(yi)稱取約(yue) 0.2g 組織，加(jia)入(ru) 2ml試劑壹），冰(bing)浴勻漿(jiang)，轉(zhuan)移(yi)到(dao)有(you)蓋離心(xin)管(guan)中（防(fang)止(zhi)加(jia)熱(re)時水(shui)分散失(shi)），80℃水(shui)浴(yu)中 40min 並(bing)且振(zhen)蕩 8~10次(ci)，8000g，25℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清供(gong)測定(ding)用。

3、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）的處(chu)理：按(an)照(zhao)血(xue)清(qing)（漿(jiang)）體積(ji)（ml）：試(shi)劑壹體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比例(li)（建(jian)議(yi)取 0.2ml 血(xue)清(qing)（漿(jiang)）加(jia)入(ru) 2ml 試劑壹），冰(bing)浴勻漿(jiang)，轉(zhuan)移(yi)到(dao)有(you)蓋離心(xin)管(guan)中（防(fang)止(zhi)加(jia)熱(re)時水(shui)分散失(shi)），80℃水(shui)浴(yu)中 40min並(bing)且振(zhen)蕩 8~10 次(ci)，8000g，25℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清供(gong)測定(ding)用。

測定(ding)步(bu)驟：

1、分光光(guang)度計(ji)預熱(re) 30min 以(yi)上(shang)，調節(jie)波(bo)長至(zhi) 540nm，蒸餾(liu)水(shui)調(tiao)零(ling)。

2、調(tiao)節(jie)水(shui)浴(yu)鍋至 95℃。

3、在(zai)EP 管(guan)中加(jia)入(ru)下列試(shi)劑：

將各管(guan)搖(yao)勻，在(zai) 95℃水(shui)浴(yu)中加(jia)熱(re) 5min（蓋緊，防止(zhi)水(shui)分散失(shi)），取出(chu)後立(li)即(ji)冷(leng)卻至(zhi)室(shi)溫(wen)，混(hun)勻(yun)。在(zai) 540nm

波(bo)長下(xia)讀取對(dui)照管(guan)和(he)測定(ding)管(guan)吸(xi)光(guang)值(zhi)。計(ji)算ΔA=A 測定(ding)-A 對(dui)照。每個(ge)測定(ding)管(guan)需(xu)設(she)壹個(ge)對(dui)照管(guan)。

註意(yi)：如(ru)果(guo)ΔA 大於(yu) 2，需要將樣(yang)本(ben)用(yong)試(shi)劑(ji)壹稀(xi)釋(shi)，計(ji)算公(gong)式(shi)中乘(cheng)以相(xiang)應稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)（若顯(xian)色(se)後出(chu)現(xian)分層現(xian)象，可改用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)稀(xi)釋(shi)）。

還(hai)原(yuan)糖含(han)量(liang)計(ji)算：

1、標準條件(jian)下(xia)測定(ding)回歸方(fang)程(cheng)為(wei) y = 8.3796x- 0.3034；x 為標準品(pin)濃(nong)度(du)（mg/ml），y 為吸(xi)光(guang)值(zhi)。

2、按(an)樣(yang)本(ben)鮮(xian)重計(ji)算：

還(hai)原(yuan)糖(μg/g 鮮重)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA＋0.3034)÷W

3、按(an)樣(yang)本(ben)蛋(dan)白濃(nong)度(du)計(ji)算：

還(hai)原(yuan)糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA＋0.3034)÷Cpr

4、按(an)細菌或(huo)細胞(bao)密度計(ji)算：

還(hai)原(yuan)糖(μg /104 cell)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（1000×V1÷V2）=0.239×(ΔA＋0.3034)

5、按(an)血(xue)清(qing)（漿(jiang)）體積(ji)計(ji)算：

還(hai)原(yuan)糖(μg/ml)=[1000×(ΔA＋0.3034)÷ 8.3796×V1]÷（V3×V1÷V2）=1193.4×(ΔA＋0.3034)

1000：1mg/ml=1000µg/ml；V1：加(jia)入(ru)樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.7ml；V2：加(jia)入(ru)提取液(ye)體積(ji)，2 ml；V3：加(jia)入(ru)血清（漿(jiang)體積(ji)），0.2ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g；1000：細菌或(huo)細胞(bao)總(zong)數(shu)，1000 萬(wan)。

註意(yi)：最di檢測限為 1mg/g 鮮重或(huo) 10μg/mg prot

還(hai)原(yuan)糖含(han)量(liang)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖(tang)代(dai)謝(xie)