THL（EC 3.2.1.28）廣(guang)泛存在(zai)於(yu)動物、植物、微(wei)生物和(he)培養細胞(bao)中(zhong)。海藻糖酶(mei)主(zhu)要功(gong)能(neng)在(zai)於(yu)生物體分(fen)解海(hai)藻糖生成葡(pu)萄糖(tang)而(er)直接(jie)用(yong)於能(neng)量供應(ying)。
海(hai)藻糖酶(mei)Trehalase THL試劑(ji)盒(he) 糖代謝(xie)

海藻糖酶(mei)（Trehalase，THL）試劑盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

微(wei)量法 100 管(guan)/48 樣(yang)

海藻糖酶(mei)Trehalase THL試劑(ji)盒(he) 糖代謝(xie)

正(zheng)式測(ce)定(ding)前(qian)務必(bi)取 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差(cha)異(yi)較大(da)的樣(yang)本(ben)做預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義(yi)：

THL（EC 3.2.1.28）廣泛存在(zai)於(yu)動物、植物、微(wei)生物和(he)培養細胞(bao)中(zhong)。海藻糖酶(mei)主(zhu)要功(gong)能(neng)在(zai)於(yu)生物體分(fen)解海(hai)藻糖生成葡(pu)萄糖(tang)而(er)直接(jie)用(yong)於能(neng)量供應(ying)。

測(ce)定(ding)原(yuan)理：

THL 催(cui)化海(hai)藻糖產(chan)生葡(pu)萄糖(tang)，葡(pu)萄糖(tang)氧化酶(mei)催(cui)化葡(pu)萄糖(tang)氧化成(cheng)葡(pu)萄糖(tang)酸，並(bing)產生過(guo)氧化氫(qing)；過(guo)氧化物酶(mei)催(cui)化過(guo)氧化氫(qing)氧(yang)化 4-氨(an)基安(an)替(ti)bi林(lin)偶(ou)聯(lian)酚，生成有(you)色(se)化合(he)物，在(zai) 505 nm 有(you)特征吸(xi)收峰，以此反(fan)映(ying)THL活性。

組成(cheng)：

試劑三(san)：液體(ti) 10ml×1 瓶(ping)，4℃保存(cun)；（若出(chu)現結冰(bing)現(xian)象(xiang)，可 37℃水(shui)浴溶(rong)解後使用(yong)）

自備儀器(qi)和(he)用(yong)品：

可見分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)/酶(mei)標儀、水(shui)浴鍋、可調式移液(ye)器(qi)、微(wei)量石英比(bi)色(se)皿(min)/96 孔(kong)板(ban)、研(yan)缽、冰(bing)和(he)蒸餾水。

樣(yang)品測(ce)定(ding)的準備(bei)：

1、細菌(jun)或(huo)細胞(bao)的處理：收集細菌(jun)或(huo)細胞(bao)到(dao)離心管(guan)內，離心後棄(qi)上(shang)清；按照(zhao)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)數量（104 個）：提(ti)取液(ye)體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例（建(jian)議 500 萬(wan)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)加入(ru) 1ml 提取液(ye)），超聲(sheng)波(bo)破碎(sui)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)（冰(bing)浴，功(gong)率(lv) 20％或(huo) 200W，超聲(sheng) 3S，間隔(ge) 10S，重(zhong)復 30 次(ci)）；8000g，4℃離心 10min，取上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

2、組織的處理：按照組織質量（g）：提取液(ye)體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例（建(jian)議稱取約(yue) 0.1g 組織，加(jia)入(ru) 1ml提(ti)取液(ye)），冰(bing)浴中(zhong)勻(yun)漿。8000g ，4℃離心 10min，取上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

3、血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（ml）：提取液(ye)體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例（建(jian)議取 0.1ml 血(xue)清（漿）加入(ru) 1ml 提取液(ye)），冰(bing)浴中(zhong)勻(yun)漿。8000g ，4℃離心 10min，取上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

測(ce)定(ding)步驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)或(huo)酶(mei)標儀預(yu)熱(re) 30min 以上(shang)，調節(jie)波長至 505nm，蒸餾水調零(ling)。

2、調節(jie)水浴鍋至 95 度。

3、工作液的配制：使(shi)用(yong)前將(jiang)試(shi)劑(ji)二(er)和(he)試劑(ji)三(san) 1:1 等體(ti)積混合(he)，用(yong)多少配多(duo)少。

4、加樣(yang)表(biao)：

45℃水浴，準(zhun)確(que)反應(ying) 15min，95℃水浴 5 分(fen)鐘(zhong)終止反應(ying)，得(de)混合(he)液(若出(chu)現沈澱(dian)可 10000g

4℃離心 10min 後取上(shang)清)。

混勻(yun)，置(zhi) 37℃（哺乳動物）或(huo) 25'C（其它(ta)物種）保溫(wen) 15min 後，於 505nm 波(bo)長處(chu)讀取吸(xi)光(guang)度。計(ji)算

ΔA=A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 對照管(guan)。每個測(ce)定(ding)管(guan)需設(she)壹個(ge)對照管(guan)。

THL 活力計算：

用(yong)微(wei)量石英比(bi)色(se)皿(min)測(ce)定(ding)的計算公式如下

1、標準條件下測(ce)定(ding)回(hui)歸方(fang)程為 y = 0.4858x - 0.0042，R2 = 0.9999；x 為標準品濃度(du)（μmol/ml），y 為吸(xi)光(guang)值。

2、按照蛋白濃(nong)度計(ji)算

單(dan)位(wei)的定(ding)義(yi)：每mg 組織蛋白每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化產(chan)生 1nmol 葡(pu)萄糖(tang)定(ding)義(yi)為壹個酶(mei)活力(li)單(dan)位(wei)。

THL 活力(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V 反總(zong)÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T×1000

=366× (ΔA+0.0042) ÷Cpr

3、按樣(yang)本(ben)鮮重(zhong)計算

單(dan)位(wei)的定(ding)義(yi)：每g 組織每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化產(chan)生 1nmol 葡(pu)萄糖(tang)定(ding)義(yi)為壹個酶(mei)活力(li)單(dan)位(wei)。

THL 活力(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V 反(fan)總(zong)÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T×1000

=366×(ΔA+0.0042)÷W

4、按細菌(jun)或(huo)細胞(bao)密度(du)計算

單(dan)位(wei)的定(ding)義(yi)：每 1 萬個(ge)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)每分(fen)鐘(zhong)催(cui)化產(chan)生 1nmol 葡(pu)萄糖(tang)定(ding)義(yi)為壹個酶(mei)活力(li)單(dan)位(wei)。

THL 活力(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V 反總(zong)÷(500 ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T×1000

=0.732×(ΔA+0.0042)

5、按血清（漿）體積計算

單(dan)位(wei)的定(ding)義(yi)：每ml 血清（漿）每分(fen)鐘(zhong)催(cui)化產(chan)生 1nmol 葡(pu)萄糖(tang)定(ding)義(yi)為壹個酶(mei)活力(li)單(dan)位(wei)。

THL 活力(nmol/min/ml)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V 反總(zong)÷(V 液 ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T×1000

=3660×(ΔA+0.0042)

V 樣(yang)：加(jia)入樣(yang)本(ben)體積：0.03ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提(ti)取液(ye)體(ti)積，1 ml；V 反總(zong)：反應(ying)體(ti)系總(zong)體積，0.08ml；V 液：加入(ru)血(xue)清（漿）體積，0.1ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白質濃度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量，g；500：細菌(jun)或(huo)細胞(bao)總(zong)數， 500 萬(wan)；T：反(fan)應時(shi)間，15min；

用(yong) 96 孔(kong)板(ban)測(ce)定(ding)的計算公式如下

1、標準條件下測(ce)定(ding)回(hui)歸方(fang)程為 y = 0.2429x - 0.0042，R2 = 0.9999；x 為標準品濃度(du)（μmol/ml），y 為吸(xi)光(guang)值。

2、按照蛋白濃(nong)度計(ji)算

單(dan)位(wei)的定(ding)義(yi)：每mg 組織蛋白每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化產(chan)生 1nmol 葡(pu)萄糖(tang)定(ding)義(yi)為壹個酶(mei)活力(li)單(dan)位(wei)。

THL 活力(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V 反總(zong)÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T×1000

=732× (ΔA+0.0042) ÷Cpr

3、按樣(yang)本(ben)鮮重(zhong)計算

單(dan)位(wei)的定(ding)義(yi)：每g 組織每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化產(chan)生 1nmol 葡(pu)萄糖(tang)定(ding)義(yi)為壹個酶(mei)活力(li)單(dan)位(wei)。

THL 活力(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V 反總(zong)÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T×1000

=732×(ΔA+0.0042)÷W

4、按細菌(jun)或(huo)細胞(bao)密度(du)計算

單(dan)位(wei)的定(ding)義(yi)：每 1 萬個細菌(jun)或(huo)細胞(bao)每分(fen)鐘(zhong)催(cui)化產(chan)生 1nmol 葡(pu)萄糖(tang)定(ding)義(yi)為壹個酶(mei)活力(li)單(dan)位(wei)。

THL 活力(nmol/min/10⁴ cell)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V 反總(zong)÷(500 ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T×1000

=1.464×(ΔA+0.0042)

5、按血清（漿）體積計算

單(dan)位(wei)的定(ding)義(yi)：每ml 血清（漿）每分(fen)鐘(zhong)催(cui)化產(chan)生 1nmol 葡(pu)萄糖(tang)定(ding)義(yi)為壹個酶(mei)活力(li)單(dan)位(wei)。

THL 活力(nmol/min/ml)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V 反總(zong)÷(V 液 ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T×1000

=7320×(ΔA+0.0042)

V 樣(yang)：加(jia)入樣(yang)本(ben)體積：0.03ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提(ti)取液(ye)體(ti)積，1 ml；V 反總(zong)：反應(ying)體(ti)系總(zong)體積，0.08ml；V 液：加入血清（漿）體積，0.1ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白質濃度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量，g；500：細菌(jun)或(huo)細胞(bao)總(zong)數， 500 萬(wan)；T：反(fan)應時(shi)間，15min；

海藻糖酶(mei)Trehalase THL試劑(ji)盒(he) 糖代謝(xie)