SH（EC 1.1.1.14）催(cui)化(hua)山li醇脫氫生(sheng)成(cheng)果(guo)糖(tang)，是調控(kong)生(sheng)物(wu)體內(nei)山li醇含(han)量(liang)的(de)關(guan)健(jian)酶(mei)之(zhi)壹(yi)。
山li醇脫氫酶(mei)試(shi)劑盒 糖代謝(xie)

山li醇脫氫酶(mei)（sorbitol dehydrogenase，SH）試(shi)劑盒說明書

微(wei)量(liang)法(fa)100 管/96 樣

山li醇脫氫酶(mei)試(shi)劑盒 糖代謝(xie)

正(zheng)式(shi)測定(ding)前務必(bi)取(qu) 2-3 個預(yu)期(qi)差(cha)異較大(da)的(de)樣本做預(yu)測定(ding)

測定(ding)意(yi)義(yi)：

SH（EC 1.1.1.14）催(cui)化(hua)山li醇脫氫生(sheng)成(cheng)果(guo)糖(tang)，是調控(kong)生(sheng)物(wu)體內(nei)山li醇含(han)量(liang)的(de)關(guan)健(jian)酶(mei)之(zhi)壹(yi)。

測定(ding)原理(li)：

SH 催(cui)化(hua)山li醇脫氫生(sheng)成(cheng)果(guo)糖(tang)，同(tong)時(shi)還原 NAD⁺生(sheng)成(cheng)NADH，測定(ding) 340nm 吸光度增(zeng)加(jia)速率可(ke)以(yi)計(ji)算 SH活(huo)性。

組(zu)成(cheng)：

自(zi)備(bei)儀(yi)器和用(yong)品(pin)：

紫(zi)外(wai)分(fen)光光(guang)度計(ji)/酶(mei)標(biao)儀(yi)、臺(tai)式(shi)離(li)心機(ji)、水浴(yu)鍋(guo)、可(ke)調(tiao)式(shi)移(yi)液(ye)器、微(wei)量(liang)石(shi)英比色皿(min)/96 孔(kong)板、研缽(bo)、冰和蒸(zheng)餾(liu)水。

粗(cu)酶(mei)液(ye)提取(qu)：

1、細(xi)菌(jun)或(huo)培(pei)養(yang)細胞：先收(shou)集細菌或(huo)細(xi)胞到(dao)離(li)心管內，離(li)心後(hou)棄上清(qing)；按照細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞數量（10⁴ 個）：提(ti)取(qu)液體積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比例(li)（建(jian)議 500 萬細(xi)菌(jun)或細(xi)胞加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液），超聲波破碎細菌(jun)或(huo)細胞（冰浴，功(gong)率(lv) 20％或(huo) 200W，超聲 3s，間(jian)隔(ge) 10s，重(zhong)復(fu) 30 次(ci)）；8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清(qing)，置冰上待(dai)測。

2、組(zu)織(zhi)：按(an)照組(zu)織(zhi)質(zhi)量（g）：提取(qu)液體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建(jian)議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入 1ml 提取(qu)液），進行冰浴勻漿(jiang)。8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清(qing)，置冰上待(dai)測。

3、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）樣品：直(zhi)接(jie)檢測。

測定(ding)步驟：

1、分(fen)光光(guang)度計(ji)或酶(mei)標(biao)儀(yi)預(yu)熱(re) 30min 以(yi)上，調(tiao)節波長(chang)至(zhi) 340nm，蒸(zheng)餾(liu)水調零(ling)。

2、樣本測定(ding)

在(zai)試(shi)劑二中加(jia)入 7.6ml 試(shi)劑壹(yi)和 11.4ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)，置於 37℃（哺(bu)乳(ru)動(dong)物(wu)）或(huo) 25℃（其(qi)它(ta)物種(zhong)）水(shui)浴(yu) 5min；用(yong)不完的(de)試(shi)劑 4℃保(bao)存(cun)壹(yi)周(zhou)；

在(zai)微量石(shi)英比色皿(min)或(huo) 96 孔(kong)板(ban)中(zhong)加(jia)入 10μl 樣本和 190μl 試(shi)劑二，混(hun)勻，立(li)即記(ji)錄(lu) 340nm 處 20s 時(shi)的(de)吸(xi)光(guang)值(zhi)A1 和 2min20s 後(hou)的(de)吸(xi)光(guang)值(zhi)A2，計(ji)算ΔA=A2-A1。

SH 活(huo)性計(ji)算：

用(yong)微(wei)量(liang)石(shi)英比色皿(min)測定(ding)的(de)計(ji)算公(gong)式(shi)如(ru)下(xia)

1、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）SH 活(huo)力的(de)計(ji)算

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei)毫(hao)升血(xue)清(qing)（漿）每(mei)分(fen)鐘生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活(huo)力單位。

SH（nmol/min/ml）= [ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=1608×ΔA 2、組織、細(xi)菌或細胞中 SDH 活(huo)力的(de)計(ji)算:

按(an)樣本蛋白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算：

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei)mg 組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)每(mei)分(fen)鐘生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活(huo)力單位。

SH（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

按(an)樣本鮮重(zhong)計(ji)算：

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei)g 組(zu)織(zhi)每(mei)分(fen)鐘消(xiao)耗(hao) 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活(huo)力單位。

SH（nmol/min /g 鮮重(zhong)）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=1608×ΔA÷W

按(an)細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞密度計(ji)算：

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei) 1 萬個細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞每(mei)分(fen)鐘生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活(huo)力單位。

SH（nmol/min /10⁴ cell）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=3.216×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系(xi)總體積(ji)，2×10^-4 L；ε：NADH 摩(mo)爾消(xiao)光(guang)系(xi)數，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿(min)光(guang)徑，1cm； V 樣：加(jia)入樣本體積(ji)，0.01 ml；V 樣總：加(jia)入提取(qu)液體積(ji)，1 ml；T：反(fan)應時(shi)間(jian)，2 min；Cpr：樣本蛋白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣本質(zhi)量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

用(yong) 96 孔(kong)板(ban)測定(ding)的(de)計(ji)算公(gong)式(shi)如(ru)下(xia)

1、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）SH 活(huo)力的(de)計(ji)算

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei)毫(hao)升血(xue)清(qing)（漿）每(mei)分(fen)鐘生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活(huo)力單位。

SH（nmol/min /ml）= [ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=3216×ΔA 2、組織、細(xi)菌或細胞中 SH 活(huo)力的(de)計(ji)算:

按(an)樣本蛋白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算：

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei)mg 組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)每(mei)分(fen)鐘生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活(huo)力單位。

SH（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

按(an)樣本鮮重(zhong)計(ji)算：

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei)g 組(zu)織(zhi)每(mei)分(fen)鐘消(xiao)耗(hao) 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活(huo)力單位。

SH（nmol/min /g 鮮重(zhong)）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=3216×ΔA÷W

按(an)細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞密度計(ji)算：

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei) 1 萬個細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞每(mei)分(fen)鐘生(sheng)成(cheng) 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活(huo)力單位。

SH（nmol/min /10⁴ cell）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=6.426×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系(xi)總體積(ji)，2×10^-4 L；ε：NADH 摩(mo)爾消(xiao)光(guang)系(xi)數，6.22×10³ L / mol /cm；d：96 孔(kong)板(ban)光(guang)徑，0.5cm； V 樣：加(jia)入樣本體積(ji)，0.01 ml；V 樣總：加(jia)入提取(qu)液體積(ji)，1 ml；T：反(fan)應時(shi)間(jian)，2 min；Cpr：樣本蛋白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣本質(zhi)量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

山li醇脫氫酶(mei)試(shi)劑盒 糖代謝(xie)