CL（EC 3.2.1.4）存(cun)在(zai)於細(xi)菌、真(zhen)菌和(he)動物(wu)體(ti)內，能(neng)夠(gou)催(cui)化羧甲(jia)基(ji)纖(xian)維(wei)素(su)降解(jie)，是壹類可廣(guang)泛(fan)應(ying)用於醫藥(yao)、食品(pin)、棉紡、環(huan)保(bao)及(ji)可再(zai)生資源利用等領域的酶制劑(ji)。
纖(xian)維(wei)素(su)酶/羧(suo)甲(jia)基(ji)活(huo)性(xing)測(ce)定試劑(ji)盒 糖(tang)代(dai)謝(xie)

纖維(wei)素(su)酶（cellulase，CL）/羧(suo)甲(jia)基(ji)纖(xian)維(wei)素(su)酶活(huo)性測定試劑(ji)盒說明書

微量(liang)法 100 管/48 樣(yang)

纖維(wei)素(su)酶/羧(suo)甲(jia)基(ji)活(huo)性(xing)測(ce)定試劑(ji)盒 糖(tang)代(dai)謝(xie)

正式(shi)測定前務必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預期(qi)差(cha)異較大的樣(yang)本(ben)做(zuo)預測(ce)定測定意義：

CL（EC 3.2.1.4）存(cun)在(zai)於細(xi)菌、真(zhen)菌和(he)動物(wu)體(ti)內，能(neng)夠(gou)催(cui)化羧甲(jia)基(ji)纖(xian)維(wei)素(su)降解(jie)，是壹類可廣(guang)泛(fan)應(ying)用於醫藥(yao)、食品(pin)、棉紡、環(huan)保(bao)及(ji)可再(zai)生資源利用等領域的酶制劑(ji)。

測定原理：

采用蒽(en)酮比色(se)法測(ce)定CL催化羧甲(jia)基(ji)纖(xian)維(wei)素(su)鈉降(jiang)解產生的還(hai)原糖(tang)的含(han)量(liang)。

組成(cheng)：

試劑(ji)三(san)：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃保存(cun)； 臨(lin)用前加入(ru) 5ml 蒸餾(liu)水和(he) 45ml 濃(nong)硫酸充分(fen)溶(rong)解待用。

自備(bei)儀器(qi)和(he)用品(pin)：

可見分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶(mei)標儀、水浴(yu)鍋、移(yi)液(ye)器(qi)、微量(liang)石英(ying)比色(se)皿/96 孔板(ban)、研缽(bo)、冰、濃(nong)硫酸和(he)蒸餾(liu)水。

樣(yang)品(pin)測定的準備(bei)：

1、細(xi)菌或(huo)培養(yang)細(xi)胞：先(xian)收(shou)集(ji)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞到(dao)離心(xin)管內，離(li)心後(hou)棄上清；按照(zhao)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞數(shu)量(liang)（104 個(ge)）：提(ti)取液(ye)體(ti)積（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例（建(jian)議(yi) 500 萬(wan)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取液(ye)），超(chao)聲波(bo)破碎細(xi)菌或(huo)細(xi)胞（冰浴(yu)，功(gong)率(lv) 20％或(huo) 200W，超聲 3s，間隔 10s，重(zhong)復(fu) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照(zhao)組織質量(liang)（g）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的比例（建(jian)議(yi)稱(cheng)取約(yue) 0.1g 組織，加入(ru) 1ml 提(ti)取液(ye)），進(jin)行(xing)冰浴(yu)勻(yun)漿(jiang)。8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清，置冰上待測。

3、血清（漿(jiang)）樣(yang)品(pin)：直接檢測。

加樣(yang)表(biao)和(he)測(ce)定步驟(zhou)：

37℃振(zhen)蕩(dang)反應(ying) 1h 後(hou)，90℃水浴(yu) 15min（蓋(gai)緊，防止水分(fen)散(san)失），冷卻(que)後(hou)

8000g 25℃離心(xin) 10min，取上清，得(de)糖(tang)化液(ye)

混勻， 90℃水浴(yu) 10min（蓋(gai)緊，防止水分(fen)散(san)失），冷卻(que)，取 200μl 至(zhi)微量(liang)石英(ying)比色(se)皿或(huo) 96 孔板(ban)中，測 620nm 下(xia)吸光(guang)值A，計算ΔA=A 測(ce)定管-A 對照管。每(mei)個(ge)測定管設(she)壹個(ge)對照管。

CL 活力計(ji)算：

用微量(liang)石英(ying)比色(se)皿測定的計算公式(shi)如下(xia)

1、標準條件(jian)下(xia)測定的回歸(gui)方程為(wei) y = 5.018x - 0.0462；x 為(wei)標準品(pin)濃(nong)度(du)（mg/ml），y 為(wei)吸光(guang)值。

2、血清（漿(jiang)）CL 活(huo)力的計算

單(dan)位的定義：每(mei)ml 血(xue)清（漿(jiang)）每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μg 葡萄糖(tang)定義為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

CL 活力(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總]÷V 樣(yang)÷T =39.8×(ΔA+0.0462)

3、細(xi)胞、細(xi)菌和(he)組(zu)織中 CL 活力的計算

按照(zhao)蛋(dan)白濃(nong)度(du)計(ji)算

單(dan)位的定義：每(mei)mg 組(zu)織蛋(dan)白每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μg 葡萄糖(tang)定義為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

CL 活力(μg /min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T

=39.8×(ΔA+0.0462) ÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮(xian)重計(ji)算

單(dan)位的定義：每(mei)g 組(zu)織每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μg 葡萄糖(tang)定義為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

CL 活力(μg /min /g 鮮(xian)重(zhong))=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T

=39.8×(ΔA+0.0462) ÷W

按細(xi)菌或(huo)細(xi)胞密(mi)度(du)計(ji)算

單(dan)位的定義：每(mei) 1 萬(wan)個(ge)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μg 葡萄糖(tang)定義為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

CL 活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T

=0.0796×(ΔA+0.0462)

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反總：反應(ying)體(ti)系(xi)總體(ti)積，0.6ml； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.05 ml；V 樣(yang)總：加(jia)入(ru)提(ti)取液(ye)體(ti)積，1 ml；T：反應(ying)時(shi)間，60 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g；500：細(xi)菌或(huo)細(xi)胞總數(shu)，500 萬。

用 96 孔板測定的計算公式(shi)如下(xia)

1、標準條件(jian)測(ce)定回歸方程為(wei) y = 2.5090x - 0.0462；x 為(wei)標準品(pin)濃(nong)度(du)（mg/ml），y 為(wei)吸光(guang)值。

2、血清（漿(jiang)）CL 活(huo)力的計算

單(dan)位的定義：每(mei)ml 血(xue)清（漿(jiang)）每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μg 葡萄糖(tang)定義為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

CL 活力(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷2.509×V 反總]÷V 樣(yang)÷T =79.6×(ΔA+0.0462)

3、細(xi)胞、細(xi)菌和(he)組(zu)織中 CL 活力的計算

按照(zhao)蛋(dan)白濃(nong)度(du)計(ji)算

單(dan)位的定義：每(mei)mg 組(zu)織蛋(dan)白每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μg 葡萄糖(tang)定義為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

CL 活力(μg /min /mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V 反總]÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T

=79.6×(ΔA+0.0462) ÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮(xian)重計(ji)算

單(dan)位的定義：每(mei)g 組(zu)織每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μg 葡萄糖(tang)定義為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

CL 活力(μg /min /g 鮮(xian)重(zhong))=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V 反總]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T

=79.6×(ΔA+0.0462)÷W

按細(xi)菌或(huo)細(xi)胞密(mi)度(du)計(ji)算

單(dan)位的定義：每(mei) 1 萬(wan)個(ge)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μg 葡萄糖(tang)定義為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

CL 活力(μg /min /104cell)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V 反總]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T

=0.1592×(ΔA+0.0462)

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反總：反應(ying)體(ti)系(xi)總體(ti)積，0.6ml； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.05 ml；V 樣(yang)總：加(jia)入(ru)提(ti)取液(ye)體(ti)積，1 ml；T：反應(ying)時(shi)間，60 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g；500：細(xi)菌或(huo)細(xi)胞總數(shu)，500 萬。

纖維(wei)素(su)酶/羧(suo)甲(jia)基(ji)活(huo)性(xing)測(ce)定試劑(ji)盒 糖(tang)代(dai)謝(xie)