β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存(cun)在植(zhi)物中(zhong)，催(cui)化(hua)β-1,3-葡(pu)萄糖(tang)苷鍵水(shui)解(jie)。在(zai)植物(wu)染病或處於其(qi)他(ta)逆境(jing)條件(jian)下，可(ke)誘(you)導(dao)細(xi)胞(bao)大(da)量(liang)合成(cheng)β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性(xing)測(ce)定(ding)廣泛(fan)應用於植(zhi)物(wu)病理(li)和逆境(jing)生理(li)研(yan)究(jiu)。
β-1,3 葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)試劑盒(he) 糖(tang)代謝(xie)

β-1,3 葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)（β-1,3-glucanase，β-1,3-GA）試劑盒(he)說明(ming)書(shu)

微(wei)量(liang)法 100 管/48 樣

β-1,3 葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)試劑盒(he) 糖(tang)代謝(xie)

正式測(ce)定(ding)前務必(bi)取(qu) 2-3 個預(yu)期(qi)差(cha)異(yi)較大(da)的(de)樣本做(zuo)預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存(cun)在植(zhi)物中(zhong)，催(cui)化(hua)β-1,3-葡(pu)萄糖(tang)苷鍵水(shui)解(jie)。在(zai)植物(wu)染病或處於其(qi)他(ta)逆境(jing)條件(jian)下，可(ke)誘(you)導(dao)細(xi)胞(bao)大(da)量(liang)合成(cheng)β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性(xing)測(ce)定(ding)廣泛(fan)應用於植(zhi)物(wu)病理(li)和逆境(jing)生理(li)研(yan)究(jiu)。

測(ce)定(ding)原(yuan)理(li)：

β-1,3-GA 水(shui)解(jie)昆布(bu)多(duo)糖(tang)，內切β-1,3-葡(pu)萄糖(tang)苷鍵，產生(sheng)還(hai)原(yuan)末端(duan)，通(tong)過測(ce)定(ding)還(hai)原(yuan)糖(tang)生成(cheng)速率來(lai)計算其(qi)酶(mei)活(huo)性(xing)。

組成(cheng)：

試劑壹(yi)：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，4℃保存(cun)；臨(lin)用前加入 2ml 蒸餾(liu)水(shui)，充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存(cun)；

自(zi)備儀(yi)器和用品：

可(ke)見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度計/酶(mei)標(biao)儀(yi)、臺(tai)式離(li)心(xin)機、水(shui)浴(yu)鍋、移液(ye)器、微(wei)量(liang)石英比(bi)色(se)皿/96 孔板、研(yan)缽、冰(bing)和蒸餾(liu)水(shui)。

粗酶(mei)液(ye)提(ti)取(qu)：

1、細(xi)菌或培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)：先收集(ji)細(xi)菌或細(xi)胞(bao)到(dao)離(li)心(xin)管內，離(li)心(xin)後棄上清(qing)；按(an)照(zhao)細(xi)菌或細(xi)胞(bao)數量(liang)（104 個）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比(bi)例（建議(yi) 500 萬細(xi)菌或細(xi)胞(bao)加入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），超(chao)聲(sheng)波(bo)破(po)碎(sui)細(xi)菌或細(xi)胞(bao)（冰浴(yu)，功(gong)率 20％或(huo) 200W，超(chao)聲(sheng) 3s，間隔 10s，重復(fu) 30 次(ci)）；12000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰上待測(ce)。

2、按(an)照(zhao)組織(zhi)質量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比(bi)例（建議(yi)稱取(qu)約 0.1g 組織(zhi)，加入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），進(jin)行冰浴(yu)勻(yun)漿(jiang)。12000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰上待測(ce)。

3、血清(qing)（漿(jiang)）樣品：直接(jie)檢(jian)測(ce)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟(zhou)：

1、分光(guang)光(guang)度計或酶(mei)標(biao)儀(yi)預(yu)熱(re) 30min 以上，調(tiao)節波(bo)長至 550nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

2、樣本測(ce)定(ding)（在(zai) 1.5ml EP 管中(zhong)依次(ci)加入下列(lie)試劑）：

充分混(hun)勻(yun)，放入 37℃水(shui)浴(yu) 60 min

充分混(hun)勻(yun)，95℃水(shui)浴(yu) 5min（蓋緊，防止(zhi)水(shui)分(fen)散失），流(liu)水(shui)冷(leng)卻(que)，取(qu) 200μl 至微(wei)量(liang)石英比(bi)色(se)皿或 96 孔板中(zhong)， 550nm 處記錄(lu)各管吸(xi)光(guang)值(zhi)A，如果吸(xi)光(guang)值(zhi)大(da)於(yu) 2，可(ke)以用蒸餾(liu)水(shui)稀釋後(hou)測(ce)定(ding)（計算公(gong)式乘(cheng)以相應稀釋倍數）， ΔA=A 測(ce)定(ding)-A 對(dui)照(zhao)。每個(ge)測(ce)定(ding)管需設(she)壹(yi)個(ge)對(dui)照(zhao)管。

β-1,3-GA 活性(xing)計算：

用微(wei)量(liang)石英比(bi)色(se)皿測(ce)定(ding)的(de)計算公(gong)式如下

1、標準條件(jian)下測(ce)定(ding)回歸方(fang)程為(wei) y = 0.0958x -0.0192；x 為(wei)標準品濃度（mg/ml），y 為(wei)吸(xi)光(guang)值(zhi)。

2、血清(qing)（漿(jiang)）β-1,3-GA 活(huo)力的(de)計算

單位的定義(yi)：每(mei)ml 血(xue)清(qing)（漿(jiang)）每(mei)小時產生(sheng) 1mg 還(hai)原(yuan)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)性(xing)單位。

β-1,3-GA(mg/h/ml)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷V1=10.438×(ΔA +0.0192)

3、細(xi)胞(bao)、細(xi)菌和組織(zhi)中(zhong)β-1,3-GA 活力的計算

按(an)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計算

單位的定義(yi)：每(mei)mg 組織(zhi)蛋白(bai)每(mei)小(xiao)時產生(sheng) 1mg 還(hai)原(yuan)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)性(xing)單位。

β-1,3-GA(mg/h/mg prot)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷Cpr

按(an)樣本鮮(xian)重(zhong)計算

單位的定義(yi)：每(mei)g 組織(zhi)每小(xiao)時產生(sheng) 1mg 還(hai)原(yuan)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)性(xing)單位。

β-1,3-GA(mg/h/g 鮮(xian)重(zhong))=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(W×V1÷V2)= 10.438×(ΔA +0.0192) ÷W

按(an)細(xi)菌或細(xi)胞(bao)密度計算

單位的定義(yi)：每(mei) 1 萬個細(xi)菌或細(xi)胞(bao)每小(xiao)時產生(sheng) 1mg 還(hai)原(yuan)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)性(xing)單位。

β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0208×(ΔA+0.0192)

V1：加入反應體系(xi)中(zhong)樣本體(ti)積(ji)，0.035ml；V2：加入提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；Cpr：樣本蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣本鮮(xian)重(zhong)，g；500：細(xi)菌或細(xi)胞(bao)總數(shu)，500 萬。

用 96 孔板測(ce)定(ding)的(de)計算公(gong)式如下

1、標準條件(jian)下測(ce)定(ding)回歸方(fang)程為(wei) y = 0.0479x -0.0192；x 為(wei)標準品濃度（mg/ml），y 為(wei)吸(xi)光(guang)值(zhi)。

2、血清(qing)（漿(jiang)）β-1,3-GA 活(huo)力的(de)計算

單位的定義(yi)：每(mei)ml 血(xue)清(qing)（漿(jiang)）每(mei)小時產生(sheng) 1mg 還(hai)原(yuan)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)性(xing)單位。

β-1,3-GA(mg/h/ml)=[( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷V1=20.876×(ΔA +0.0192)

3、細(xi)胞(bao)、細(xi)菌和組織(zhi)中(zhong)β-1,3-GA 活力的計算

按(an)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計算

單位的定義(yi)：每(mei)mg 組織(zhi)蛋白(bai)每(mei)小(xiao)時產生(sheng) 1mg 還(hai)原(yuan)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)性(xing)單位。

β-1,3-GA(mg/h/mg prot)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(V1×Cpr)=20.876×(ΔA +0.0192) ÷Cpr

按(an)樣本鮮(xian)重(zhong)計算

單位的定義(yi)：每(mei)g 組織(zhi)每小(xiao)時產生(sheng) 1mg 還(hai)原(yuan)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)性(xing)單位。

β-1,3-GA(mg/h/g 鮮(xian)重(zhong))= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(W×V1÷V2)= 20.876×(ΔA +0.0192) ÷W

按(an)細(xi)菌或細(xi)胞(bao)密度計算

單位的定義(yi)：每(mei) 1 萬個細(xi)菌或細(xi)胞(bao)每小(xiao)時產生(sheng) 1mg 還(hai)原(yuan)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)性(xing)單位。

β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0416×(ΔA+0.0192)

V1：加入反應體系(xi)中(zhong)樣本體(ti)積(ji)，0.035ml；V2：加入提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；Cpr：樣本蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣本鮮(xian)重(zhong)，g；500：細(xi)菌或細(xi)胞(bao)總數(shu)，500 萬。

β-1,3 葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)試劑盒(he) 糖(tang)代謝(xie)