β-GC（EC 3.2.1.21）廣泛存(cun)在(zai)於(yu)動物、植(zhi)物(wu)、微生(sheng)物和(he)培養(yang)細(xi)胞(bao)中，催化β-糖(tang)苷(gan)鍵水解，具(ju)有多方面生(sheng)理作(zuo)用(yong)：在(zai)纖(xian)維素的糖(tang)化作(zuo)用(yong)中，β-GC 負責進(jin)壹(yi)步(bu)水解纖(xian)維素二(er)糖(tang)和(he)纖(xian)維素寡(gua)糖(tang)生(sheng)成(cheng)葡(pu)萄(tao)糖(tang)；β-GC 水解萜烯類(lei)香(xiang)氣前驅體，使(shi)糖(tang)苷(gan)鍵合態變成(cheng)遊離(li)態(tai)。從而(er)產生(sheng)香(xiang)味(wei)；β-GC 能夠(gou)水解植物體內(nei)野黑(hei)櫻苷(gan)，釋(shi)放HCN，從而(er)防(fang)止(zhi)昆(kun)蟲(chong)取食。
β-葡(pu)萄(tao)糖(tang)苷(gan)酶試(shi)劑(ji)盒(he) 糖(tang)代(dai)謝

β-葡(pu)萄(tao)糖(tang)苷(gan)酶（β-Glucosidase, β-GC）試劑(ji)盒(he)說明書(shu)

微量法(fa) 100 管/48 樣

β-葡(pu)萄(tao)糖(tang)苷(gan)酶試(shi)劑(ji)盒(he) 糖(tang)代(dai)謝

正式(shi)測定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預期(qi)差異(yi)較大的樣本做預測定(ding)測定(ding)意義(yi)：

β-GC（EC 3.2.1.21）廣泛存(cun)在(zai)於(yu)動物、植(zhi)物(wu)、微生(sheng)物和(he)培養(yang)細(xi)胞(bao)中，催化β-糖(tang)苷(gan)鍵水解，具(ju)有多方面生(sheng)理作(zuo)用(yong)：在(zai)纖(xian)維素的糖(tang)化作(zuo)用(yong)中，β-GC 負責進(jin)壹(yi)步(bu)水解纖(xian)維素二(er)糖(tang)和(he)纖(xian)維素寡(gua)糖(tang)生(sheng)成(cheng)葡(pu)萄(tao)糖(tang)；β-GC 水解萜烯類(lei)香(xiang)氣前驅體，使(shi)糖(tang)苷(gan)鍵合態變成(cheng)遊離(li)態(tai)。從而(er)產生(sheng)香(xiang)味(wei)；β-GC 能夠(gou)水解植物體內(nei)野黑(hei)櫻苷(gan)，釋(shi)放HCN，從而(er)防(fang)止(zhi)昆(kun)蟲(chong)取食。

測定(ding)原(yuan)理：

β-GC 分解(jie)對-硝(xiao)基(ji)苯-β-D-吡喃葡(pu)萄(tao)糖(tang)苷(gan)生(sheng)成(cheng)對-硝基(ji)苯fen，後(hou)者在(zai) 400nm 有最(zui)大(da)吸(xi)收(shou)峰(feng)，通(tong)過測定(ding)吸(xi)光(guang)值(zhi)升(sheng)高(gao)速(su)率來計算β-GC 活(huo)性(xing)。

組成(cheng)：

試劑(ji)壹(yi)：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，-20℃保存(cun)；臨用前(qian)每(mei)瓶(ping)加(jia)入(ru) 12ml 蒸餾(liu)水，充分溶解(jie)備(bei)用(yong)；用不(bu)完的試劑仍(reng)-20℃保存(cun)。

自(zi)備(bei)儀器和(he)用(yong)品(pin)：

可見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度計/酶標(biao)儀、臺式(shi)離(li)心(xin)機(ji)、水浴鍋(guo)、可(ke)調(tiao)式(shi)移液(ye)器、微量石英(ying)比色皿(min)/96 孔板、研(yan)缽、冰和(he)蒸餾(liu)水

粗酶液(ye)提(ti)取：

1、細菌(jun)或(huo)培養(yang)細(xi)胞(bao)：先收(shou)集(ji)細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)到離(li)心(xin)管內(nei)，離(li)心(xin)後(hou)棄上(shang)清；按照細菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)數(shu)量（104 個(ge)）：提(ti)取液(ye)體積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例（建(jian)議(yi) 500 萬細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)加入 1ml 提(ti)取液(ye)），超聲波(bo)破碎細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)（冰浴(yu)，功(gong)率 20％或(huo) 200W，超(chao)聲(sheng) 3s，間隔 10s，重復(fu) 30 次）；15000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清，置(zhi)冰上(shang)待測。

2、組織(zhi)：按照組織(zhi)質量（g）：提(ti)取液(ye)體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比例（建(jian)議(yi)稱取(qu)約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加入 1ml 提(ti)取液(ye)），進行(xing)冰浴(yu)勻(yun)漿。15000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清，置(zhi)冰上(shang)待測。

3、培養(yang)液(ye)、血清（漿）等液(ye)體樣(yang)本：直接(jie)檢測。

測定(ding)步(bu)驟(zhou)：

1、分光(guang)光(guang)度計或(huo)酶標(biao)儀預(yu)熱(re) 30min 以上(shang)，調(tiao)節(jie)波(bo)長(chang)至(zhi) 400nm，蒸餾(liu)水調(tiao)零(ling)。

2、加樣(yang)表(biao)

充分(fen)混(hun)勻(yun)，放入 37℃準(zhun)確水浴 30min 後(hou)，立即(ji)放(fang)入 95℃水浴 5min（蓋緊(jin)，以防(fang)止(zhi)水分散失(shi)），流(liu)水冷卻後(hou)充分(fen)混(hun)勻(yun)（以保證(zheng)濃(nong)度不變(bian)），8000g，4℃，離(li)心(xin) 5min，取(qu)上(shang)清液(ye)（在(zai) EP 管或(huo) 96 孔(kong)板中加入下(xia)列試(shi)劑(ji)）

充分(fen)混(hun)勻(yun)，室(shi)溫靜(jing)置(zhi) 2min 後(hou)， 400nm 處測定(ding)吸(xi)光(guang)值(zhi)A，計算ΔA=A 測定(ding)管-A 對照(zhao)管。每個(ge)測定(ding)管需設(she)壹(yi)個(ge)對照(zhao)管。

β-GC 活(huo)力(li)計算：

用微(wei)量石英(ying)比色皿(min)測定(ding)的計算公式(shi)如下(xia)

標準(zhun)條(tiao)件下(xia)測定(ding)的回(hui)歸方程為(wei)y = 0.00585x -0.0027；x 為(wei)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度（nmol/ml），y 為(wei)吸(xi)光(guang)值(zhi)。

按液(ye)體體積(ji)計算：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每ml 樣(yang)本(ben)每分鐘產生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)。

β-GC 活(huo)性(xing)(nmol/min/ml)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V 反總]÷V 樣(yang)÷T

=56.98×(ΔA+0.0027)

按樣本蛋白(bai)濃(nong)度計算：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每mg 組(zu)織(zhi)蛋白每(mei)分鐘產生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)。

β-GC 活(huo)性(xing)(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V 反總]÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T

=56.98×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

β-葡(pu)萄(tao)糖(tang)苷(gan)酶試(shi)劑(ji)盒(he) 糖(tang)代(dai)謝

按樣本鮮重計算：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每g 組(zu)織(zhi)每分鐘產生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)。

β-GC 活(huo)性(xing)(nmol/min/g 鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V 反總]÷(W×V 樣(yang)÷V 樣總)÷T

=56.98×(ΔA+0.0027) ÷W

按細菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)密度計算：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每 1 萬個(ge)細菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)每分鐘產生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)。

β-GC 活(huo)性(xing)(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V 反總]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣總)÷T

=0.114×(ΔA +0.0027)

V 反總：反應體系總體積(ji)，0.3ml；V 樣：加(jia)入(ru)反應體系中樣本體積(ji)，0.03ml；V 樣總(zong)：加(jia)入提(ti)取液(ye)體積(ji)， 1ml；Cpr：樣本(ben)蛋(dan)白質濃(nong)度，mg/ml；W：樣本(ben)質量，g； 500：細胞(bao)或(huo)細(xi)菌(jun)總數(shu)，500 萬；T：反應時間， 30min。

用 96 孔(kong)板測定(ding)的計算公式(shi)如下(xia)

標準(zhun)條(tiao)件下(xia)測定(ding)的回(hui)歸方程為(wei)y = 0.0039x -0.0027；x 為(wei)標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度（nmol/ml），y 為(wei)吸(xi)光(guang)值(zhi)。

按液(ye)體體積(ji)計算：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每ml 樣(yang)本(ben)每分鐘產生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)。

β-GC 活(huo)性(xing)(nmol/min/ml)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反總]÷V 樣(yang)÷T

=85.47×(ΔA+0.0027)

按樣本蛋白(bai)濃(nong)度計算：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每mg 組(zu)織(zhi)蛋白每(mei)分鐘產生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)。

β-GC 活(huo)性(xing)(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反總]÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T

=85.47×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

按樣本鮮重計算：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每g 組(zu)織(zhi)每分鐘產生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)。

β-GC 活(huo)性(xing)(nmol/min/g 鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V 反總]÷(W×V 樣(yang)÷V 樣總)÷T

=85.47×(ΔA+0.0027) ÷W

按細菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)密度計算：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每 1 萬個(ge)細菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)每分鐘產生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)。

β-GC 活(huo)性(xing)(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反總]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣總)÷T

=0.171×(ΔA +0.0027)

V 反總：反應體系總體積(ji)，0.3ml；V 樣：加(jia)入(ru)反應體系中樣本體積(ji)，0.03ml；V 樣總(zong)：加(jia)入提(ti)取液(ye)體積(ji)， 1ml；Cpr：樣本(ben)蛋(dan)白質濃(nong)度，mg/ml；W：樣本(ben)質量，g； 500：細胞(bao)或(huo)細(xi)菌(jun)總數(shu)，500 萬；T：反應時間， 30min。