木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)(EC 3.2.1.8)主(zhu)要(yao)由(you)微(wei)生(sheng)物產生(sheng)，能(neng)催化水(shui)解木(mu)聚(ju)糖(tang)，也(ye)被(bei)稱為(wei)戊(wu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)或(huo)半纖維素酶，可(ke)分解釀造(zao)或(huo)飼料(liao)工業中(zhong)的原(yuan)料(liao)細胞(bao)壁(bi)以(yi)及β-葡聚(ju)糖(tang)，降(jiang)低(di)釀造(zao)中(zhong)物料(liao)的粘度，促(cu)進(jin)有(you)效(xiao)物質的(de)釋放，以及降低(di)飼料(liao)中(zhong)的非(fei)澱(dian)粉多糖(tang)，促(cu)進(jin)營養物質的(de)吸(xi)收(shou)利用，因而廣泛的(de)應用於(yu)釀造(zao)和飼料(liao)工業中(zhong)，NEX 壹(yi)般(ban)分(fen)離(li)自(zi)最(zui)適(shi)生(sheng)長pH 為(wei) 6-8 的(de)微生物。
中(zhong)性木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖(tang)代謝(xie)

中(zhong)性木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)（Neutral Xylanase，NEX）測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

微(wei)量(liang)法(fa) 100 管(guan)/48 樣

中(zhong)性木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖(tang)代謝(xie)

正式測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必取(qu) 2-3 個預期差(cha)異(yi)較大的(de)樣本(ben)做預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)：

木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)(EC 3.2.1.8)主(zhu)要(yao)由(you)微(wei)生(sheng)物產生(sheng)，能(neng)催化水(shui)解木(mu)聚(ju)糖(tang)，也(ye)被(bei)稱為(wei)戊(wu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)或(huo)半纖維素酶，可(ke)分解釀造(zao)或(huo)飼料(liao)工業中(zhong)的原(yuan)料(liao)細胞(bao)壁(bi)以(yi)及β-葡聚(ju)糖(tang)，降(jiang)低(di)釀造(zao)中(zhong)物料(liao)的粘度，促(cu)進(jin)有(you)效(xiao)物質的(de)釋放，以及降低(di)飼料(liao)中(zhong)的非(fei)澱(dian)粉多糖(tang)，促(cu)進(jin)營養物質的(de)吸(xi)收(shou)利用，因而廣泛的(de)應用於(yu)釀造(zao)和飼料(liao)工業中(zhong)，NEX 壹(yi)般(ban)分(fen)離(li)自最適(shi)生(sheng)長pH 為(wei) 6-8 的(de)微生物。

測(ce)定(ding)原(yuan)理：

NEX 在(zai)中(zhong)性環(huan)境(jing)中(zhong)催化(hua)木(mu)聚(ju)糖(tang)降(jiang)解(jie)成還(hai)原(yuan)性寡(gua)糖(tang)和單糖(tang)，在(zai)沸(fei)水(shui)浴條(tiao)件(jian)下(xia)進(jin)壹(yi)步(bu)與(yu) 3,5-二(er)硝基(ji)水(shui)楊(yang)中(zhong)發生(sheng)顯色反應，在(zai) 540nm 處有(you)特(te)征吸(xi)收(shou)峰，反應液顏色的深淺(qian)與(yu)酶解(jie)產(chan)生(sheng)的還原(yuan)糖(tang)量(liang)成(cheng)正比(bi)，通過(guo)測(ce)定(ding)反(fan)應(ying)液在 540nm 吸(xi)光(guang)值增(zeng)加速率(lv)，可(ke)計算(suan)NEX 活力。

組(zu)成(cheng)：

試劑(ji)壹(yi)：液體 10ml×1 瓶(ping)，4℃避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)。（若(ruo)出(chu)現白(bai)色絮狀或(huo)顆粒狀(zhuang)沈(chen)澱，可 60℃加熱(re)溶(rong)解(jie)後使(shi)用）。

自備(bei)儀器(qi)和用品(pin)：

天平、低溫離(li)心(xin)機(ji)、恒(heng)溫水(shui)浴鍋，可(ke)見分光光(guang)度計/酶標(biao)儀(yi)、微量石英比色皿/96 孔板(ban)和蒸(zheng)餾水(shui)。

粗(cu)酶提(ti)取(qu)：

發酵液：發酵液於(yu) 8000g，4℃，離(li)心(xin) 15min，取(qu)上(shang)清(qing)，作為(wei)待(dai)測(ce)樣品(pin)。

酶幹粉：稱約 0.1mg，加 1ml 緩(huan)沖(chong)液溶解待(dai)測(ce)。

組(zu)織(zhi)樣本(ben)：按(an)照(zhao)組(zu)織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液體積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建議(yi)稱取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加入(ru) 1ml緩(huan)沖(chong)液）進(jin)行(xing)冰(bing)浴勻(yun)漿(jiang)，然後(hou) 8000g，4℃，離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清(qing)待(dai)測(ce)。

測(ce)定(ding)操(cao)作表：

1、分光光(guang)度(du)計(ji)/酶標(biao)儀(yi)預熱 30min，調(tiao)節(jie)波(bo)長至 540nm。

2、操作表

NEX 計(ji)算公(gong)式：

用微量(liang)石英比色皿測(ce)定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公式如(ru)下(xia)

標(biao)準(zhun)曲(qu)線：y = 1.6904x + 0.0058，R2 = 0.9989

按(an)液體體積活(huo)力計算(suan)：

酶(mei)活定(ding)義(yi)：50℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)毫升(sheng)液體樣本(ben)每(mei)分(fen)鐘分(fen)解木(mu)聚(ju)糖(tang)產(chan)生(sheng) 1nmol 還原(yuan)糖(tang)所(suo)需的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個中(zhong)性木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)的(de)活力(li)單位。

NEX 活力(li)（nmol/min/ml）= （ΔA-0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數×106

= 657× (ΔA-0.0058)

按(an)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算：

酶活定(ding)義(yi)：50℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)毫克(ke)蛋(dan)白(bai)每(mei)分(fen)鐘分(fen)解木(mu)聚(ju)糖(tang)產(chan)生(sheng) 1nmol 還原(yuan)糖(tang)所(suo)需的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個中(zhong)性木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)的(de)活力(li)單位。

NEX 活力(li)（nmol/min/mg prot）= （ΔA -0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數×106÷Cpr

= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr

按(an)鮮(xian)重(zhong)計算(suan)：

酶活(huo)定(ding)義(yi)：50℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)克(ke)樣本(ben)每(mei)分(fen)鐘分(fen)解木(mu)聚(ju)糖(tang)產(chan)生(sheng) 1nmol 還原(yuan)糖(tang)所(suo)需的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個中(zhong)性木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)的(de)活力(li)單位。

NEX 活力(li)（nmol/min/g 鮮重(zhong)）= （ΔA -0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數×106÷W

= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷W

150：木(mu)糖(tang)的(de)分(fen)子量(liang)；T：反應時(shi)間(jian)，30min；稀(xi)釋倍數=V 反總(zong)÷V 樣=300µL÷60µL=5；

106：轉化因子，即 1mg/ml=106ng/ml；Cpr：樣本(ben)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量(liang)，g。

用 96 孔板(ban)測(ce)定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公式如(ru)下(xia)

標(biao)準(zhun)曲(qu)線：y = 0.8452x + 0.0058，R2 = 0.9989

按(an)液體體積活(huo)力計算(suan)：

酶(mei)活定(ding)義(yi)：50℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)毫升(sheng)液體樣本(ben)每(mei)分(fen)鐘分(fen)解木(mu)聚(ju)糖(tang)產(chan)生(sheng) 1nmol 還原(yuan)糖(tang)所(suo)需的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個中(zhong)性木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)的(de)活力(li)單位。

NEX 活力(li)（nmol/min/ml）= （ΔA-0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數×106

= 1315× (ΔA-0.0058)

按(an)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算：

酶活定(ding)義(yi)：50℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)毫克(ke)蛋(dan)白(bai)每(mei)分(fen)鐘分(fen)解木(mu)聚(ju)糖(tang)產(chan)生(sheng) 1nmol 還原(yuan)糖(tang)所(suo)需的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個中(zhong)性木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)的(de)活力(li)單位。

NEX 活力(li)（nmol/min/mg prot）= （ΔA -0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數×106÷Cpr

= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr

按(an)鮮(xian)重(zhong)計算(suan)：

酶活(huo)定(ding)義(yi)：50℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)克(ke)樣本(ben)每(mei)分(fen)鐘分(fen)解木(mu)聚(ju)糖(tang)產(chan)生(sheng) 1nmol 還原(yuan)糖(tang)所(suo)需的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個中(zhong)性木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)的(de)活力(li)單位。

NEX 活力(li)（nmol/min/g 鮮重(zhong)）= （ΔA -0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數×106÷W

= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷W

150：木(mu)糖(tang)的(de)分(fen)子量(liang)；T：反應時(shi)間(jian)，30min；稀(xi)釋倍數=V 反總(zong)÷V 樣=300µL÷60µL=5；

106：轉化因子，即 1mg/ml=106ng/ml；Cpr：樣本(ben)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量(liang)，g。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：

吸(xi)光(guang)度變化應(ying)該(gai)控(kong)制在(zai) 0.01~0.8 之(zhi)間(jian)，否(fou)則加大樣品(pin)量或(huo)稀釋樣品(pin)，註(zhu)意(yi)計(ji)算(suan)公(gong)式中(zhong)參與(yu)計算(suan)的(de)稀(xi)釋倍數要相應(ying)改變(bian)；也可(ke)以延(yan)長或(huo)者縮短(duan)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)。

試劑(ji)盒(he) 2-8℃保(bao)存(cun)，保(bao)質(zhi)期 3 個月(yue)，建(jian)議盡(jin)快(kuai)使(shi)用。

中(zhong)性木(mu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖(tang)代謝(xie)