β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶(EC3.2.1.37)存在(zai)於(yu)植(zhi)物(wu)、細菌(jun)和(he)真(zhen)菌等(deng)生物體，是催化(hua)木(mu)聚糖(tang)類(lei)半(ban)纖(xian)維素降解的(de)關鍵(jian)酶，產物(wu)木(mu)糖(tang)可(ke)作(zuo)為碳(tan)源應(ying)用(yong)於(yu)微(wei)生物(wu)發(fa)酵。另(ling)外(wai)，β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶還可(ke)以(yi)作(zuo)為生物(wu)漂白劑應用於(yu)造(zao)紙(zhi)工業(ye)，比(bi)傳統(tong)的(de)漂白法環(huan)保(bao)，具(ju)有廣泛的(de)應用(yong)價值。
β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶測(ce)定試(shi)劑盒(he) 糖(tang)代(dai)謝

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶（β- xylosidase）測(ce)定試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書(shu)

微(wei)量法(fa) 100 管/48 樣

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶測(ce)定試(shi)劑盒(he) 糖(tang)代(dai)謝

正式測(ce)定前務(wu)必取 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差異較大的(de)樣本(ben)做(zuo)預(yu)測(ce)定測(ce)定意(yi)義：

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶(EC3.2.1.37)存在(zai)於(yu)植(zhi)物(wu)、細菌(jun)和(he)真(zhen)菌等(deng)生物體，是催化(hua)木(mu)聚糖(tang)類(lei)半(ban)纖(xian)維素降解的(de)關鍵(jian)酶，產物(wu)木(mu)糖(tang)可(ke)作(zuo)為碳(tan)源應(ying)用(yong)於(yu)微(wei)生物(wu)發(fa)酵。另(ling)外(wai)，β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶還可(ke)以(yi)作(zuo)為生物(wu)漂白劑應用於(yu)造(zao)紙(zhi)工業(ye)，比(bi)傳統(tong)的(de)漂白法環(huan)保(bao)，具(ju)有廣泛的(de)應用(yong)價值。

測(ce)定原(yuan)理：

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶催化(hua)對硝(xiao)基(ji)苯fen-β-D-木(mu)糖(tang)苷(gan)產(chan)生(sheng)對硝(xiao)基(ji)苯fen，對硝(xiao)基(ji)苯fen在(zai) 405nm 處有特(te)征(zheng)吸(xi)收(shou)峰，測(ce)定405nm 光吸(xi)收(shou)增加速(su)率(lv)，可(ke)計算(suan)β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶活性(xing)。

組成：

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和用品(pin)：

天(tian)平(ping)、低溫(wen)離(li)心機(ji)、可(ke)見分光光度(du)計/酶標儀(yi)、微(wei)量石(shi)英比(bi)色皿/96 孔(kong)板和蒸餾(liu)水(shui)。

粗(cu)酶液提(ti)取：

組織：按(an)照組(zu)織質量(liang)（g）：提(ti)取液體積(ml)為 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議稱取約(yue) 0.1g 組(zu)織，加入(ru) 1ml 提(ti)取液）進行(xing)冰浴(yu)勻(yun)漿，然後 10000g，4℃，離(li)心 20min，取上(shang)清待測(ce)。

細菌(jun)、真(zhen)菌：按(an)照細胞(bao)數(shu)量(liang)（104 個(ge)）：提(ti)取液體積（ml）為 500~1000：1 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議 500 萬細胞(bao)加入(ru) 1ml 提(ti)取液），冰浴(yu)超(chao)聲(sheng)波(bo)破(po)碎細胞(bao)（功率(lv) 300w，超(chao)聲(sheng) 3 秒(miao)，間(jian)隔 7 秒(miao)，總(zong)時(shi)間(jian) 3min）；然後 10000g， 4℃，離(li)心 10min，取上(shang)清置(zhi)於(yu)冰上(shang)待測(ce)。

液體：直(zhi)接(jie)檢測(ce)。

測(ce)定操(cao)作(zuo)表：

1、分光光度(du)計/酶標儀(yi)預(yu)熱 30min，調節波(bo)長(chang)至 405nm。

2、操作(zuo)表

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶活性(xing)計算(suan)公式(shi)：

用微(wei)量石(shi)英比(bi)色皿測(ce)定的(de)計算(suan)公式(shi)如下(xia)

標準曲線(xian)：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x 為標準品(pin)濃度(du)（μmol/ml），y 為吸(xi)光值ΔA。

1、按(an)蛋(dan)白濃度(du)計算(suan)

酶活定(ding)義(yi)：45℃，pH7.4 時(shi)每毫(hao)克(ke)蛋(dan)白 1min 內催化(hua)產生(sheng) 1 nmol 對硝(xiao)基(ji)苯fen為壹個(ge)酶活單位。

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶活性(xing)（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總(zong)÷（V 樣×Cpr）÷T×1000

= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr

2、按(an)樣本(ben)質量(liang)計(ji)算(suan)：

酶活定(ding)義(yi)：45℃，pH7.4 時(shi)每克(ke)樣品(pin) 1min 內催化(hua)產生(sheng) 1 nmol 對硝(xiao)基(ji)苯fen為壹個(ge)酶活單位。

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶活性(xing)（nmol/min/g 鮮重(zhong)）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總(zong)÷（V 樣÷V 樣總(zong)×W）÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W

3. 按(an)細胞(bao)數(shu)量(liang)計算(suan)：

酶活定(ding)義(yi)：45℃，pH7.4 時(shi)每 104 個(ge)細胞(bao) 1min 內(nei)催化(hua)產生(sheng) 1 nmol 對硝(xiao)基(ji)苯fen為壹個(ge)酶活單位。

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶活性(xing)（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總(zong)÷V 樣×V 樣總(zong)÷細胞(bao)數(shu)量(liang)（萬個(ge)）

÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞(bao)數(shu)量(liang)（萬個(ge)）

（4）按(an)液體體積計算(suan)

酶活定(ding)義(yi)：45℃，pH7.4 時(shi)每毫(hao)升液體 1min 內催化(hua)產生(sheng) 1 nmol 對硝(xiao)基(ji)苯fen為壹個(ge)酶活單位。

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶活性(xing)（nmol/min/ ml）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總(zong)÷V 樣÷T×1000

=11.34×(ΔA-0.0011)

V 樣總(zong)：加入(ru)提(ti)取液體積，1ml； V 反總(zong)：反(fan)應(ying)總(zong)體積，0.12ml；V 樣：反(fan)應中樣品(pin)體積，0.04ml；Cpr：樣本(ben)蛋(dan)白濃度(du)，mg/ml；W：樣品(pin)質量(liang)，g；T：反(fan)應時(shi)間(jian)，20min；1000:1μmol/L=1000nmol/L

用 96 孔(kong)板測(ce)定的(de)計算(suan)公式(shi)如下(xia)

標準曲線(xian)：y=6.613x+0.0011，R2=0.9998；x 為標準品(pin)濃度(du)（μmol/ml），y 為吸(xi)光值ΔA

1、按(an)蛋(dan)白濃度(du)計算(suan)

酶活定(ding)義(yi)：45℃，pH7.4 時(shi)每毫(hao)克(ke)蛋(dan)白 1min 內催化(hua)產生(sheng) 1 nmol 對硝(xiao)基(ji)苯fen為壹個(ge)酶活單位。

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶活性(xing)（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總(zong)÷（V 樣×Cpr）÷T×1000

= 22.68×(ΔA -0.0011)÷ Cpr

2、按(an)樣本(ben)質量(liang)計(ji)算(suan)：

酶活定(ding)義(yi)：45℃，pH7.4 時(shi)每克(ke)樣品(pin) 1min 內催化(hua)產生(sheng) 1 nmol 對硝(xiao)基(ji)苯fen為壹個(ge)酶活單位。

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶活性(xing)（nmol/min/g 鮮重(zhong)）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總(zong)÷（V 樣÷V 樣總(zong)×W）÷T×1000= 22.68×(ΔA-0.0011)÷W

3. 按(an)細胞(bao)數(shu)量(liang)計算(suan)：

酶活定(ding)義(yi)：45℃，pH7.4 時(shi)每 104 個(ge)細胞(bao) 1min 內(nei)催化(hua)產生(sheng) 1 nmol 對硝(xiao)基(ji)苯fen為壹個(ge)酶活單位。

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶活性(xing)（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總(zong)÷V 樣×V 樣總(zong)÷細胞(bao)數(shu)量(liang)（萬個(ge)）

÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞(bao)數(shu)量(liang)（萬個(ge)）

（4）按(an)液體體積計算(suan)

酶活定(ding)義(yi)：45℃，pH7.4 時(shi)每毫(hao)升液體 1min 內催化(hua)產生(sheng) 1 nmol 對硝(xiao)基(ji)苯fen為壹個(ge)酶活單位。

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶活性(xing)（nmol/min/ ml）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總(zong)÷V 樣÷T×1000

=22.68×(ΔA-0.0011)

V 樣總(zong)：加入(ru)提(ti)取液體積，1ml； V 反總(zong)：反(fan)應(ying)總(zong)體積，0.12ml；V 樣：反(fan)應中樣品(pin)體積，0.04ml；Cpr：樣本(ben)蛋(dan)白濃度(du)，mg/ml；W：樣品(pin)質量(liang)，g；T：反(fan)應時(shi)間(jian)，20min；1000:1μmol/ml=1000nmol/ml

ΔA 控制在(zai) 0.01-1 範(fan)圍內，若(ruo)ΔA 大於(yu) 1，可(ke)適當減(jian)小(xiao)樣本(ben)量。標準曲線(xian)線(xian)性(xing)範(fan)圍為：0.01μmol/ml-0.5μmol/ml。

β-木(mu)糖(tang)苷(gan)酶測(ce)定試(shi)劑盒(he) 糖(tang)代(dai)謝