PDH（EC 1.2.4.1）廣泛存在(zai)於(yu)動(dong)物(wu)、植(zhi)物(wu)、微(wei)生(sheng)物和(he)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)中，是丙(bing)tong酸脫(tuo)氫(qing)酶復合(he)體(PDHC)催化(hua)丙(bing)tong酸氧化脫(tuo)羧(suo)的限(xian)速(su)酶，催化(hua)丙(bing)tong酸脫(tuo)梭(suo)生(sheng)成(cheng)羥(qiang)yi基(ji)-TPP，把(ba)糖酵(jiao)解(jie)和(he)三(san)羧酸(suan)循(xun)環連接(jie)起(qi)來。
丙(bing)tong酸脫(tuo)氫(qing)酶試劑(ji)盒(he) 三(san)羧(suo)酸

丙(bing)tong酸脫(tuo)氫(qing)酶（Pyruvate dehydrogenase，PDH）試劑(ji)盒(he)說(shuo)明書(shu)

微(wei)量(liang)法(fa) 100 管(guan)/96 樣(yang)

丙(bing)tong酸脫(tuo)氫(qing)酶試劑(ji)盒(he) 三(san)羧(suo)酸

正(zheng)式(shi)測定(ding)前務必取 2-3 個預期(qi)差(cha)異(yi)較大(da)的樣(yang)本做預測定(ding)測定(ding)意(yi)義：

PDH（EC 1.2.4.1）廣泛存在(zai)於(yu)動(dong)物(wu)、植(zhi)物(wu)、微(wei)生(sheng)物和(he)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)中，是丙(bing)tong酸脫(tuo)氫(qing)酶復合(he)體(PDHC)催化(hua)丙(bing)tong酸氧化脫(tuo)羧(suo)的限(xian)速(su)酶，催化(hua)丙(bing)tong酸脫(tuo)梭(suo)生(sheng)成(cheng)羥(qiang)yi基(ji)-TPP，把糖酵(jiao)解(jie)和(he)三(san)羧酸(suan)循(xun)環連接(jie)起(qi)來。

測定(ding)原理(li)：

PDH 催化(hua)丙(bing)tong酸脫(tuo)氫(qing)，同時(shi)還(hai)原(yuan) 2,6-二氯(lv)酚(fen)靛酚(fen)（2,6-DCPIP），從而導致 600nm 光(guang)吸收(shou)的減(jian)少(shao)。

組成(cheng)：

自備(bei)儀器和(he)用(yong)品：

可(ke)見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)/酶標儀、水浴鍋、臺式(shi)離(li)心機(ji)、可(ke)調(tiao)式(shi)移(yi)液(ye)器、微(wei)量(liang)石英(ying)比(bi)色(se)皿(min)/96 孔(kong)板、研缽(bo)、冰(bing)和(he)蒸餾水(shui)。

樣本的前處理(li):

組織(zhi)、細菌(jun)或細(xi)胞中(zhong)胞漿蛋(dan)白(bai)與線粒體蛋(dan)白(bai)的分(fen)離：

1、 稱(cheng)取約(yue) 0.1g 組(zu)織(zhi)或收(shou)集(ji) 500 萬(wan)細(xi)胞(bao)，加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)壹(yi)和(he) 10μl 試(shi)劑(ji)三(san)，用(yong)冰(bing)浴勻漿(jiang)器(qi)或研缽(bo)勻(yun)漿(jiang)。

2、 將(jiang)勻漿(jiang) 600g，4℃離心 5min。

3、 棄沈澱，將(jiang)上(shang)清(qing)液(ye)移(yi)至(zhi)另(ling)壹離心管(guan)中(zhong)，11000g，4℃離(li)心(xin) 10min。

4、 上(shang)清(qing)液(ye)即(ji)胞漿提取(qu)物(wu)，可(ke)用(yong)於(yu)測定(ding)從線粒體泄(xie)漏(lou)的 PDH（此(ci)步可(ke)選(xuan)做）。

5、 在(zai)步驟(zhou)④的沈澱中(zhong)加(jia)入(ru) 200μl 試劑(ji)二和(he) 2μl 試(shi)劑(ji)三(san)，超(chao)聲(sheng)波破碎（冰(bing)浴，功率 20％或 200W，超(chao)聲(sheng) 3 秒，間(jian)隔 10 秒(miao)，重復 30 次(ci)），用(yong)於(yu)線粒體 PDH 活(huo)性測定(ding)。

測定(ding)步驟(zhou):

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)或酶標儀預熱 30min 以(yi)上(shang)，調(tiao)節(jie)波(bo)長至 605nm，蒸餾水(shui)調(tiao)零。

2、樣本測定(ding)

在(zai)試劑(ji)五(wu)中(zhong)加(jia)入(ru) 19ml 試劑(ji)四(si)充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)，置於(yu) 37℃（哺(bu)乳動(dong)物(wu)）或 25℃（其(qi)它物(wu)種）水浴 10min；用不完的試(shi)劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反(fan)復凍融(rong)；

在(zai)微(wei)量(liang)石英(ying)比(bi)色(se)皿(min)或 96 孔(kong)板中(zhong)加(jia)入(ru) 10μl 樣本和(he) 190μl 試(shi)劑(ji)五(wu)，混(hun)勻，立(li)即(ji)記錄 605nm 處初(chu)始吸光(guang)值A1 和(he) 1min 後(hou)的吸光(guang)值A2，計(ji)算(suan)ΔA=A1-A2。

PDH 活性計算(suan)：

用微(wei)量(liang)石英(ying)比(bi)色(se)皿(min)測定(ding)的計(ji)算(suan)公式(shi)如下(xia)

按樣本蛋(dan)白(bai)濃度計(ji)算(suan)

單位(wei)的定(ding)義：每(mei)mg 組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)每(mei)分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol 2,6-二氯(lv)酚(fen)靛酚(fen)定義為壹個酶活性(xing)單位(wei)。 PDH 活(huo)性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反(fan)總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=952×ΔA÷Cpr

按樣本鮮重計(ji)算(suan)

單位(wei)的定(ding)義：每(mei)g 組(zu)織(zhi)每分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol 2,6-二氯(lv)酚(fen)靛酚(fen)定義為壹個酶活性(xing)單位(wei)。

PDH 活性（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反(fan)總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=192×ΔA÷W

按細菌(jun)或細(xi)胞密(mi)度計(ji)算(suan)

單位(wei)的定(ding)義：每(mei) 1 萬(wan)個(ge)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞每(mei)分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol 2,6-二氯(lv)酚(fen)靛酚(fen)定義為壹個酶活性(xing)單位(wei)。 PDH 活(huo)性（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反(fan)總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣(yang)總(zong))÷T=0.385×ΔA

V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體系(xi)總體積(ji)，2×10-4 L；ε：2,6-二氯(lv)吲(yin)哚酚(fen)摩(mo)爾消光(guang)系數(shu)，2.1×104 L / mol /cm；d：比(bi)色(se)皿(min)光(guang)徑，1cm；V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣本體積(ji)，0.01 ml；V 樣總：加(jia)入(ru)提取(qu)液(ye)體積(ji)，0.202 ml；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，1 min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣(yang)本質量(liang)，g；500：細菌(jun)或細(xi)胞總(zong)數，500 萬(wan)。

用 96 孔(kong)板測定(ding)的計(ji)算(suan)公式(shi)如下(xia)

按樣本蛋(dan)白(bai)濃度計(ji)算(suan)

單位(wei)的定(ding)義：每(mei)mg 組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)每(mei)分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol 2,6-二氯(lv)酚(fen)靛酚(fen)定義為壹個酶活性(xing)單位(wei)。 PDH 活(huo)性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反(fan)總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr

按樣本鮮重計(ji)算(suan)

單位(wei)的定(ding)義：每(mei)g 組(zu)織(zhi)每分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol 2,6-二氯(lv)酚(fen)靛酚(fen)定義為壹個酶活性(xing)單位(wei)。

PDH 活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反(fan)總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣(yang)總(zong))÷T=384×ΔA÷W

按細菌(jun)或細(xi)胞密(mi)度計(ji)算(suan)

單位(wei)的定(ding)義：每(mei) 1 萬(wan)個(ge)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞每(mei)分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol 2,6-二氯(lv)酚(fen)靛酚(fen)定義為壹個酶活性(xing)單位(wei)。 PDH 活(huo)性（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反(fan)總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣(yang)總(zong))÷T=0.77×ΔA

V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體系(xi)總體積(ji)，2×10-4 L；ε：2,6-二氯(lv)吲(yin)哚酚(fen)摩(mo)爾消光(guang)系數(shu)，2.1×104 L / mol /cm；d：96 孔(kong)板光(guang)徑，0.5cm；V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣本體積(ji)，0.01 ml；V 樣總：加(jia)入(ru)提取(qu)液(ye)體積(ji)，0.202 ml；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，1 min； Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣(yang)本質量(liang)，g；500：細菌(jun)或細(xi)胞總(zong)數，500 萬(wan)。

丙(bing)tong酸脫(tuo)氫(qing)酶試劑(ji)盒(he) 三(san)羧(suo)酸