SDH（EC 1.3.5.1）廣(guang)泛(fan)存在於動(dong)物(wu)、植(zhi)物(wu)、微生物(wu)和(he)培養(yang)細胞(bao)中(zhong)。SDH 是線(xian)粒(li)體的(de)壹種標(biao)誌(zhi)酶，位於線粒(li)體內膜上的(de)壹種膜(mo)結(jie)合酶，是連(lian)接呼吸電子(zi)傳遞(di)和氧(yang)化(hua)磷(lin)酸化的(de)樞紐之壹。此(ci)外(wai)，為多種(zhong)原核(he)細胞(bao)產(chan)能的(de)呼吸鏈提(ti)供(gong)電子(zi)。
琥(hu)珀酸脫氫(qing)酶試(shi)劑(ji)盒(he) 三羧酸

琥(hu)珀酸脫氫(qing)酶（Succinate Dehydrogenase，SDH）試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa) 50 管/48 樣(yang)

琥(hu)珀酸脫氫(qing)酶試(shi)劑(ji)盒(he) 三羧酸

正(zheng)式(shi)測定前務必(bi)取(qu) 2-3 個預(yu)期(qi)差(cha)異較(jiao)大(da)的(de)樣(yang)本做預測定測定意義：

SDH（EC 1.3.5.1）廣(guang)泛(fan)存在於動(dong)物(wu)、植(zhi)物(wu)、微生物(wu)和(he)培養(yang)細胞(bao)中(zhong)。SDH 是線(xian)粒(li)體的(de)壹種標誌(zhi)酶，位於(yu)線粒(li)體內膜上的(de)壹種膜(mo)結(jie)合酶，是連(lian)接呼吸電子(zi)傳遞(di)和氧(yang)化(hua)磷(lin)酸化的(de)樞紐之壹。此(ci)外(wai)，為多種(zhong)原核(he)細胞(bao)產(chan)能的(de)呼吸鏈提(ti)供(gong)電子(zi)。

測定原理(li)：

SDH 催化琥(hu)珀酸脫氫(qing)生(sheng)成延(yan)胡(hu)索(suo)酸，脫下(xia)的(de)氫通過吩(fen)嗪二(er)甲酯(zhi)硫酸（PMS）傳遞(di)還(hai)原(yuan) 2,6-二(er)氯(lv)酚靛酚（DCPIP），並且在 600nm 處(chu)具有特(te)征吸收峰(feng)，通過 600nm 吸光(guang)度的(de)變化，測定 2．6-DPIP 的(de)還原速(su)度，代表(biao)SDH 酶活(huo)性。

組成：

試(shi)劑(ji)五：粉劑(ji)×1 支，4℃保存，臨用前加(jia)入 2ml 蒸(zheng)餾水(shui)，用(yong)不完的(de)試(shi)劑(ji)仍 4℃保存；試(shi)劑(ji)六：粉劑(ji)×1 支，-20℃保存；臨用前加(jia)入 2ml 蒸(zheng)餾水(shui)，用(yong)不完的(de)試(shi)劑(ji) 4℃保存。

自備(bei)儀(yi)器(qi)和用(yong)品：

可(ke)見分(fen)光(guang)光(guang)度計、水(shui)浴鍋、臺(tai)式(shi)離(li)心(xin)機(ji)、可(ke)調(tiao)式(shi)移(yi)液器(qi)、1 ml 玻璃(li)比(bi)色(se)皿(min)、研缽、冰和蒸餾(liu)水(shui)。

樣(yang)本的(de)前處(chu)理(li)：

組織、細菌(jun)或(huo)細胞(bao)中(zhong)胞漿(jiang)蛋(dan)白(bai)與(yu)線(xian)粒(li)體蛋(dan)白(bai)的(de)分(fen)離(li)：

1、 稱(cheng)取約(yue) 0.1g 組(zu)織或收(shou)集(ji) 500 萬(wan)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)，加(jia)入 1ml 試(shi)劑(ji)壹和 10μl 試(shi)劑(ji)三，用冰浴勻漿(jiang)器(qi)或研缽勻漿(jiang)。

2、 將勻漿(jiang) 600g，4℃離(li)心(xin) 5min。

3、 棄(qi)沈澱(dian)，將上清液移(yi)至另壹(yi)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，11000g，4℃離(li)心(xin) 10min。

4、 上清液即(ji)胞(bao)漿(jiang)提(ti)取(qu)物(wu)，可(ke)用於(yu)測定從線(xian)粒(li)體泄漏的(de) SDH（此(ci)步可(ke)選做）。

在步驟(zhou)④的(de)沈澱(dian)中(zhong)加(jia)入 200μl 試(shi)劑(ji)二(er)和 2μl 試(shi)劑(ji)三，超聲(sheng)波破(po)碎（冰浴，功(gong)率(lv) 20％或(huo) 200W，超聲(sheng) 3 秒(miao)，間(jian)隔(ge) 10 秒(miao)，重(zhong)復(fu) 30 次），用於線粒(li)體SDH 活(huo)性測定。

測定步驟(zhou)和(he)加(jia)樣(yang)表：

37℃(哺乳(ru)動(dong)物(wu))或 25℃（其它物(wu)種）保溫(wen) 10min 左右(you)

用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調(tiao)零(ling)後，依次(ci)加(jia)各試(shi)劑(ji)到 1 ml 玻璃(li)比(bi)色(se)皿(min)中，在加(jia)入試(shi)劑(ji)六的(de)同(tong)時(shi)開(kai)始(shi)計(ji)時，混勻，在 600 nm

波長(chang)下(xia)記(ji)錄 20 秒(miao)時(shi)的(de)初始吸光(guang)度 A1 和 1 分(fen) 20 秒(miao)時(shi)的(de)吸光(guang)度A2，計算(suan)ΔA=A1-A2。

SDH 活(huo)性的(de)計算(suan)：

按(an)樣(yang)本蛋(dan)白(bai)濃度計算(suan)

單(dan)位(wei)的(de)定義：每mg 組織蛋(dan)白(bai)每分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol 2,6-二(er)氯(lv)酚靛酚定義為壹個(ge)酶活(huo)性單(dan)位(wei)。 SDH 活(huo)性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V 樣(yang)) ÷T=1508×ΔA÷Cpr

按(an)樣(yang)本鮮重計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的(de)定義：每g 組織每分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol 2,6-二(er)氯(lv)酚靛酚定義為壹個(ge)酶活(huo)性單(dan)位(wei)。

SDH 活(huo)性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反(fan)總÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T=304.6×ΔA÷W

按(an)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)密(mi)度計算(suan)

單(dan)位(wei)的(de)定義：每 1 萬(wan)個(ge)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)每(mei)分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol 2,6-二(er)氯(lv)酚靛酚定義為壹個(ge)酶活(huo)性單(dan)位(wei)。 SDH 活(huo)性（nmol/min /10⁴ cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T=0.609×ΔA

V 反總：反(fan)應(ying)體系(xi)總體積，9.5×10^-4 L；ε：2,6-二(er)氯(lv)吲哚酚(fen)摩爾(er)消光(guang)系(xi)數(shu)，2.1×10⁴ L / mol /cm；d：比(bi)色(se)皿(min)光(guang)徑(jing)，1cm；V 樣(yang)：加(jia)入樣(yang)本體積，0.03 ml；V 樣(yang)總：加(jia)入提(ti)取(qu)液(ye)體積，0.202 ml；T：反應(ying)時間(jian)，1 min； Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質濃度，mg/ml；W：樣(yang)本質(zhi)量，g；500：細菌(jun)或(huo)細胞(bao)總數(shu)，500 萬(wan)。

琥(hu)珀酸脫氫(qing)酶試(shi)劑(ji)盒(he) 三羧酸