羥甲基(ji)戊(wu)二(er)酰(xian)輔meiA 合(he)成酶是(shi)甲羥戊酸(suan)代(dai)謝(xie)途徑中(zhong)的(de)關鍵酶，催化乙酰(xian) CoA 與乙酰(xian)乙酰(xian)CoA 生成羥甲基(ji)戊(wu)二(er)酰(xian)CoA。
羥甲基(ji)戊(wu)二(er)酰(xian)輔meiA合(he)成酶試劑盒(he) 三(san)羧(suo)酸(suan)

羥甲基(ji)戊(wu)二(er)酰(xian)輔meiA 合(he)成酶（HMGCS）試劑盒(he)說明(ming)書

微(wei)量(liang)法(fa) 100 管(guan)/96 樣(yang)

羥甲基(ji)戊(wu)二(er)酰(xian)輔meiA合(he)成酶試劑盒(he) 三(san)羧(suo)酸(suan)

正(zheng)式(shi)測定(ding)前(qian)務必取 2-3 個(ge)預期(qi)差異較(jiao)大(da)的樣(yang)本做(zuo)預測定(ding)測定(ding)意義(yi)：

羥甲基(ji)戊(wu)二(er)酰(xian)輔meiA 合(he)成酶是(shi)甲羥戊酸(suan)代(dai)謝(xie)途徑中(zhong)的(de)關鍵酶，催化乙酰(xian) CoA 與乙酰(xian)乙酰(xian)CoA 生(sheng)成羥甲基(ji)戊(wu)二(er)酰(xian)CoA。

測(ce)定(ding)原理：

HMGCS 催化乙酰(xian)CoA 與乙酰(xian)乙酰(xian)CoA 生(sheng)成羥甲基(ji)戊(wu)二(er)酰(xian)CoA，同時產生 CoASH，使(shi) DTNB 轉(zhuan)化(hua)為黃色的TNB，在 412nm 下(xia)有(you)特征(zheng)吸(xi)光(guang)值(zhi)。

組(zu)成：

試劑壹(yi)：粉(fen)劑×1 瓶，-20℃避光保存(cun)；臨用(yong)前(qian)加(jia)入(ru) 3ml 蒸(zheng)餾水充(chong)分溶解(jie)待(dai)用(yong)；用(yong)不(bu)完的試劑分裝後(hou)-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復凍(dong)融；

試劑二(er)：粉(fen)劑×1 瓶，-20℃避光保存(cun)；臨用(yong)前(qian)加(jia)入(ru) 3ml 蒸(zheng)餾水充(chong)分溶解(jie)待(dai)用(yong)；用(yong)不(bu)完的試劑分裝後(hou)-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復凍(dong)融；

自(zi)備(bei)儀器和(he)用(yong)品(pin)：

可(ke)見(jian)分光光(guang)度(du)計(ji)/酶標儀、臺式(shi)離心(xin)機(ji)、可(ke)調式(shi)移(yi)液器、微量(liang)石(shi)英比(bi)色皿(min)/96 孔(kong)板(ban)、研缽、冰(bing)和(he)蒸(zheng)餾水。

樣(yang)本測定(ding)的準(zhun)備(bei)：

1、細(xi)菌(jun)、細(xi)胞(bao)或組(zu)織(zhi)樣(yang)品(pin)的制(zhi)備：

細(xi)菌(jun)或培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)：先(xian)收集(ji)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)到(dao)離心(xin)管(guan)內(nei)，離心(xin)後(hou)棄上清(qing)；按照細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)（104 個(ge)）：提(ti)取液體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例（建(jian)議 500 萬(wan)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取液），超聲(sheng)波(bo)破(po)碎(sui)細(xi)菌(jun)或

細(xi)胞(bao)（冰(bing)浴(yu)，功率 20％或 200W，超聲(sheng) 3s，間(jian)隔(ge) 10s，重復 30 次(ci)）；8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰上待(dai)測。

組(zu)織(zhi)：按照組(zu)織(zhi)質量(liang)（g）：提(ti)取液體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比例（建(jian)議稱(cheng)取約(yue) 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取液），進(jin)行(xing)冰(bing)浴(yu)勻漿(jiang)。8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰上待(dai)測。

2、血(xue)清(qing)（漿）樣(yang)品(pin)：直(zhi)接(jie)檢測。

測(ce)定(ding)步驟(zhou)：

1、分光光(guang)度(du)計(ji)或酶標儀預熱 30min 以(yi)上，調節波(bo)長(chang)至(zhi) 412nm，蒸(zheng)餾水調零(ling)。

2、在微量(liang)石(shi)英比(bi)色皿(min)或 96 孔(kong)板(ban)中(zhong)加(jia)入(ru) 25μl 試劑壹(yi)、25μl 試劑二(er)和(he) 50μl 試劑三(san)，混(hun)勻(yun)，加(jia)入(ru) 100μl 樣(yang)本上清(qing)，迅(xun)速混勻(yun)後(hou)記(ji)錄 412nm 下(xia)初始吸(xi)光(guang)值(zhi)A1 和(he) 4min 後(hou)的吸(xi)光(guang)值(zhi)A2。計(ji)算ΔA＝A2-A1。

HMGCS 活性(xing)計(ji)算：

用(yong)微量(liang)石(shi)英比(bi)色皿(min)測定(ding)的計(ji)算公式(shi)如(ru)下(xia)

1、血(xue)清(qing)（漿）活性(xing)

單(dan)位(wei)定(ding)義：每ml 血清(qing)（漿）每分鐘催化產(chan)生 1nmolTNB 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力(li)單(dan)位(wei)。

HMGCS（nmol/min /ml）=[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣(yang) ÷T=36.76×ΔA 2、組(zu)織(zhi)、細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)HMGCS 活性(xing)

(1) 按樣(yang)本蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算

單(dan)位(wei)定(ding)義：每mg 組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)每分鐘催化產(chan)生 1nmolTNB 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力(li)單(dan)位(wei)。

HMGCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=36.76×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本鮮重(zhong)計(ji)算

單(dan)位(wei)定(ding)義：每g 組(zu)織(zhi)每分鐘催化產(chan)生 1nmolTNB 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力(li)單(dan)位(wei)。

HMGCS（nmol/min /g 鮮(xian)重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷（W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)）÷T=36.76×ΔA÷W

按細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)密(mi)度計(ji)算

單(dan)位(wei)定(ding)義：每 1 萬個(ge)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)每分鐘催化產(chan)生 1nmolTNB 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力(li)單(dan)位(wei)。

HMGCS（nmol/min /104 cel）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷（500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)）÷T=0.074×ΔA

V 反總(zong)：反應(ying)體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積(ji)，2×10-4 L；ε：TNB 摩(mo)爾消(xiao)光系(xi)數(shu)，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿(min)光徑(jing)，1cm； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.1 ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提(ti)取液體(ti)積(ji)，1ml；T：反應(ying)時(shi)間(jian)，4 min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質 濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本質量(liang)，g；500：細(xi)胞(bao)或細(xi)菌(jun)總(zong)數，500 萬(wan)。

用(yong) 96 孔(kong)板(ban)測(ce)定(ding)的計(ji)算公式(shi)如(ru)下(xia)：

1、血(xue)清(qing)（漿）活性(xing)

單(dan)位(wei)定(ding)義：每ml 血清(qing)（漿）每分鐘催化產(chan)生 1nmolTNB 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力(li)單(dan)位(wei)。

HMGCS（nmol/min /ml）=[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣(yang) ÷T=73.53×ΔA 2、組(zu)織(zhi)、細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)HMGCS 活性(xing)

(1) 按樣(yang)本蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算

單(dan)位(wei)定(ding)義：每mg 組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)每分鐘催化產(chan)生 1nmolTNB 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力(li)單(dan)位(wei)。

HMGCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=73.53×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本鮮重(zhong)計(ji)算

單(dan)位(wei)定(ding)義：每g 組(zu)織(zhi)每分鐘催化產(chan)生 1nmolTNB 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力(li)單(dan)位(wei)。

HMGCS（nmol/min /g 鮮(xian)重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷（W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)）÷T=73.53×ΔA÷W

按細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)密(mi)度計(ji)算

單(dan)位(wei)定(ding)義：每 1 萬個(ge)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)每分鐘催化產(chan)生 1nmolTNB 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力(li)單(dan)位(wei)。

HMGCS（nmol/min /104 cel）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷（500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)）÷T=0.147×ΔA

V 反總(zong)：反應(ying)體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積(ji)，2×10-4 L；ε：TNB 摩(mo)爾消(xiao)光系(xi)數(shu)，1.36×104 L / mol /cm；d：96 孔(kong)板(ban)光(guang)徑，0.5cm； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.1 ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提(ti)取液體(ti)積(ji)，1 ml；T：反應(ying)時(shi)間(jian)，4 min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本質量(liang)，g；500：細(xi)胞(bao)或細(xi)菌(jun)總(zong)數，500 萬(wan)。

羥甲基(ji)戊(wu)二(er)酰(xian)輔meiA合(he)成酶試劑盒(he) 三(san)羧(suo)酸(suan)