利(li)用(yong)專(zhuan)門試(shi)劑(ji)溫和(he)勻漿組織(zhi)和(he)細胞，再采用差(cha)速離(li)心(xin)法(fa)從勻漿中分(fen)離完(wan)整(zheng)線(xian)粒(li)體(ti)；利用(yong)專(zhuan)門試(shi)劑(ji)，配合(he)超(chao)聲(sheng)波破(po)碎(sui)線(xian)粒(li)體(ti)，可以(yi)得(de)到保持(chi)活(huo)性的線(xian)粒(li)體(ti)酶。
線(xian)粒(li)體(ti)分離(li)/酶提(ti)取試(shi)劑(ji)盒 氧化磷(lin)酸化(hua)

線(xian)粒(li)體(ti)分離(li)和線(xian)粒(li)體(ti)酶提(ti)取試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度法 50 管(guan)/48 樣(yang)

線(xian)粒(li)體(ti)分離(li)/酶提(ti)取試(shi)劑(ji)盒 氧化磷(lin)酸化(hua)

正(zheng)式測(ce)定(ding)前務必取 2-3 個預期差(cha)異較(jiao)大(da)的(de)樣(yang)本做(zuo)預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

線(xian)粒(li)體(ti)是(shi)半自(zi)主(zhu)性細胞(bao)器，不僅(jin)是(shi)細胞(bao)內(nei)氧化磷(lin)酸化(hua)和(he)合成(cheng)三(san)磷(lin)酸腺(xian)苷（ATP）的(de)主要(yao)場(chang)所，為細胞的活(huo)動提(ti)供(gong)能(neng)量，而且在許(xu)多生命活(huo)動中具(ju)有重(zhong)要(yao)調(tiao)控(kong)作(zuo)用(yong)。因(yin)此(ci)，準確(que)和全(quan)面分(fen)離保持(chi)正(zheng)常(chang)活性的線(xian)粒(li)體(ti)已經(jing)成(cheng)為許(xu)多研(yan)究(jiu)的前提(ti)。

測(ce)定(ding)原(yuan)理(li)：

利(li)用專(zhuan)門試(shi)劑(ji)溫和(he)勻漿組織(zhi)和(he)細胞，再采用差(cha)速離(li)心(xin)法(fa)從勻漿中分(fen)離完(wan)整(zheng)線(xian)粒(li)體(ti)；利用(yong)專(zhuan)門試(shi)劑(ji)，配合(he)超(chao)聲(sheng)波破(po)碎(sui)線(xian)粒(li)體(ti)，可以(yi)得(de)到保持(chi)活(huo)性的線(xian)粒(li)體(ti)酶。

試(shi)劑(ji)的組成(cheng)和配(pei)制：

需(xu)自(zi)備(bei)的儀(yi)器(qi)和(he)用品(pin)：

超(chao)聲(sheng)波破(po)碎(sui)儀(yi)、臺(tai)式(shi)離心(xin)機(ji)、可(ke)調(tiao)式移(yi)液器、研(yan)缽、冰(bing)和蒸餾水。

提(ti)取步驟(zhou)：

1、準確(que)稱取約(yue) 0.1g 組織(zhi)或(huo)收(shou)集約(yue) 500 萬(wan)細(xi)胞(bao)，加入(ru) 1mL 試劑(ji)壹和(he) 10uL 試劑(ji)四(si)，用冰(bing)浴勻漿器或(huo)研(yan)缽研(yan)磨。

2、4 ℃ 600 g 離(li)心 5min。

3、棄(qi)沈(chen)澱(dian)，將(jiang)上(shang)清(qing)液移(yi)至(zhi)另(ling)壹離心管(guan)中(zhong)，4 ℃ 11000 g 離(li)心 10min。

4、上(shang)清液即(ji)胞(bao)漿提(ti)取物(wu)，可(ke)用(yong)於研(yan)究(jiu)線(xian)粒(li)體(ti)蛋(dan)白向胞漿的釋放(fang)。

5、沈(chen)澱(dian)為完(wan)整(zheng)線(xian)粒(li)體(ti)。含(han)有完(wan)整(zheng)的內(nei)膜和外膜，並具(ju)有線(xian)粒(li)體(ti)的生理(li)功(gong)能。可(ke)用(yong)於線(xian)粒(li)體(ti)的生理(li)功(gong)能等方(fang)面(mian)的研(yan)究(jiu)。

6、在沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru) 200uL 試劑(ji)二和(he) 2uL 試劑(ji)四(si)，超(chao)聲(sheng)波破(po)碎(sui)（冰浴，功(gong)率(lv) 20％或(huo) 200W，超(chao)聲(sheng) 3 秒，間隔(ge) 10 秒，重(zhong)復(fu) 30 次），可(ke)用於(yu)線(xian)粒(li)體(ti)酶活(huo)性測(ce)定(ding)。

7、在沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru) 200uL 試劑(ji)三和(he) 2uL 試劑(ji)四(si)，超(chao)聲(sheng)波破(po)碎(sui)（冰浴，功(gong)率(lv) 20％或(huo) 200W，超(chao)聲(sheng) 3 秒，間隔(ge) 10 秒，重(zhong)復(fu) 30 次），可(ke)用於(yu)線(xian)粒(li)體(ti)蛋(dan)白濃度測(ce)定(ding)。

註(zhu)意事(shi)項

1、 分(fen)離線(xian)粒(li)體(ti)和提(ti)取線(xian)粒(li)體(ti)蛋(dan)白質(zhi)的所有步驟(zhou)均(jun)需(xu)在冰上或(huo) 4℃進行(xing)，所用溶(rong)液需(xu)冰(bing)浴或(huo) 4℃預冷(leng)。

2、 通常(chang)在分離線(xian)粒(li)體(ti)時前後兩次(ci)離心(xin)速度選(xuan)取(qu) 600g 和(he) 11,000g，如(ru)果(guo)希望純度更高，但對線(xian)粒(li)體(ti)的得(de)率(lv)要(yao)求(qiu)不高(gao)，前後兩次(ci)離心(xin)速度可以(yi)采用 1000g 和 3500g。

3、 為了(le)您的安全(quan)和(he)健(jian)康(kang)，請穿實驗服並戴壹(yi)次(ci)性手套操(cao)作。

線(xian)粒(li)體(ti)分離(li)/酶提(ti)取試(shi)劑(ji)盒 氧化磷(lin)酸化(hua)