AGP (EC 2.7.7.21)主要(yao)存(cun)在(zai)於植物(wu)中(zhong)，催(cui)化葡(pu)萄(tao)糖(tang)-1-磷酸與ATP 反(fan)應生(sheng)成(cheng)澱粉(fen)合成(cheng)的直接前體(ti)ADPG，是植(zhi)物(wu)澱(dian)粉(fen)生物(wu)合(he)成(cheng)的主(zhu)要(yao)限(xian)速(su)步(bu)驟(zhou)。
腺苷(gan)二磷酸葡(pu)萄(tao)糖(tang)焦(jiao)磷酸化酶(mei)活性測(ce)定(ding) 澱粉(fen)

腺苷(gan)二磷酸葡(pu)萄(tao)糖(tang)焦(jiao)磷酸化酶(mei)（ADP-glucose pyrophosphorylase，AGP）活性測(ce)定(ding)試劑盒說明(ming)書(shu)

分(fen)光(guang)光度法(fa)

腺苷(gan)二磷酸葡(pu)萄(tao)糖(tang)焦(jiao)磷酸化酶(mei)活性測(ce)定(ding) 澱粉(fen)

正式測(ce)定(ding)前務(wu)必取(qu) 2-3 個預(yu)期差(cha)異(yi)較大(da)的樣本做預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義：

AGP (EC 2.7.7.21)主(zhu)要(yao)存(cun)在(zai)於植物(wu)中(zhong)，催(cui)化葡(pu)萄(tao)糖(tang)-1-磷酸與ATP 反(fan)應生(sheng)成(cheng)澱粉(fen)合成(cheng)的直接前體(ti)ADPG，是植(zhi)物(wu)澱(dian)粉(fen)生物(wu)合(he)成(cheng)的主(zhu)要(yao)限(xian)速(su)步(bu)驟(zhou)。

測(ce)定(ding)原理(li)：

AGP 催(cui)化的逆(ni)向(xiang)反應生(sheng)成(cheng) G1P，在(zai)反(fan)應體(ti)系中(zhong)添(tian)加(jia)的磷酸己糖(tang)變(bian)位(wei)酶(mei)和(he) 6-磷酸葡(pu)萄(tao)糖(tang)脫(tuo)氫酶(mei)依(yi)次催(cui)化生(sheng)成(cheng) 6-磷酸葡(pu)萄(tao)糖(tang)酸(suan)和(he) NADPH，340nm 下測(ce)定(ding)NADPH 增(zeng)加速(su)率(lv)，即(ji)可計算AGP 活性。

組(zu)成(cheng)：

BM6001-25T/24S 試劑二臨(lin)用(yong)前(qian)加(jia)入(ru) 9mL 蒸餾水充(chong)分溶(rong)解(jie)備(bei)用(yong)；用(yong)不(bu)完的試劑分裝後(hou)-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復(fu)凍(dong)融；

BM6001-25T/24S 試劑三臨(lin)用(yong)前(qian)加(jia)入(ru) 5mL 蒸餾水充(chong)分溶(rong)解(jie)備(bei)用(yong)；用(yong)不(bu)完的試劑分裝後(hou)-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復(fu)凍(dong)融；

BM6001-50T/48S 試劑二臨(lin)用(yong)前(qian)加(jia)入(ru) 18mL 蒸餾水充(chong)分溶(rong)解(jie)備(bei)用(yong)；用(yong)不(bu)完的試劑分裝後(hou)-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復(fu)凍(dong)融；

BM6001-50T/48S 試劑三臨(lin)用(yong)前(qian)加(jia)入(ru) 10mL 蒸餾水充(chong)分溶(rong)解(jie)備(bei)用(yong)；用(yong)不(bu)完的試劑分裝後(hou)-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復(fu)凍(dong)融；

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用(yong)品(pin)：

紫(zi)外(wai)分(fen)光(guang)光(guang)度計、水浴(yu)鍋、臺式離(li)心(xin)機(ji)、可調(tiao)式移液器(qi)、1 mL 石(shi)英比色(se)皿(min)、研(yan)缽(bo)、冰(bing)和(he)蒸餾水

粗酶(mei)液制(zhi)備：

按(an)照組(zu)織(zhi)質量（g）：提(ti)取(qu)液體(ti)積(mL)為(wei) 1：5~10 的比例(li)（建(jian)議(yi)稱(cheng)取約 0.1g 組(zu)織，加入 1mL 提(ti)取(qu)液），進(jin)行(xing)冰浴(yu)勻漿(jiang)。10000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)，置冰(bing)上待(dai)測(ce)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光度計預熱(re) 30min 以(yi)上(shang)，調(tiao)節(jie)波長(chang)至 340nm，蒸餾水調(tiao)零。

2、試劑壹(yi)置 30℃保(bao)溫 10min 以(yi)上(shang)。

3、在(zai)EP 管(guan)中(zhong)按(an)順(shun)序加入下列試劑

混(hun)勻，30℃保溫(wen) 15 min，置沸(fei)水浴(yu)中(zhong) 1 min（蓋(gai)緊(jin)，防(fang)止(zhi)水分散(san)失），冰浴(yu)迅(xun)速(su)冷(leng)卻(que)後(hou)，4000g4℃離(li)心(xin) 5min，取上(shang)清(qing)液，在(zai) 1mL 石(shi)英比色(se)皿(min)中(zhong)依(yi)次(ci)加(jia)入(ru)下列試劑

混(hun)勻後，立(li)即(ji)於 340 nm 波長下記(ji)錄初始吸光度A1 和 2min 後的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。

AGP 活性計算(suan)：

1、按(an)樣本蛋(dan)白(bai)蛋(dan)白(bai)濃度計算

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每(mei)mg 組織蛋(dan)白(bai)每(mei)分鐘(zhong)催(cui)化產(chan)生 1nmol NADPH 定(ding)義為壹(yi)個酶(mei)活性單位(wei)。

AGP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T×稀釋(shi)倍(bei)數

=2813×ΔA÷Cpr

此法(fa)需要(yao)自(zi)行(xing)測(ce)定(ding)樣本蛋(dan)白(bai)質濃度。

2、按(an)照樣本鮮重(zhong)計算

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每(mei)g 組織每(mei)分鐘(zhong)催(cui)化產(chan)生 1nmol NADPH 定(ding)義為壹(yi)個酶(mei)活力單位(wei)。

AGP（nmol/min /g 鮮(xian)重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷（W×V 樣÷V 樣總(zong)）÷T×稀釋(shi)倍(bei)數

=2813×ΔA÷W

V 反(fan)總(zong)：反應體(ti)系總(zong)體積(ji)，1×10-3 L；ε：NADPH 摩爾消(xiao)光系(xi)數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色(se)皿(min)光(guang)徑(jing)，1cm；V 樣：加入樣本體積(ji)，0.04mL；V 樣總(zong)：加入(ru)提(ti)取(qu)液體(ti)積，1 mL；T：反(fan)應時(shi)間，2 min；稀釋(shi)倍(bei)數：1.4；Cpr：樣本蛋(dan)白(bai)質濃度，mg/mL；W：樣本質量。

腺苷(gan)二磷酸葡(pu)萄(tao)糖(tang)焦(jiao)磷酸化酶(mei)活性測(ce)定(ding) 澱粉(fen)