GBSS（EC 2.4.1.21）以(yi)束(shu)縛態存在(zai)於澱粉(fen)體中(zhong)，催化(hua)澱粉(fen)鏈的(de)加長(chang)反(fan)應，主(zhu)要(yao)負(fu)責(ze)直(zhi)鏈(lian)澱粉(fen)的合(he)成(cheng)。
結合(he)態澱粉(fen)合成(cheng)酶(mei)試劑盒(he)

結合(he)態澱粉(fen)合成(cheng)酶(mei)（Granule-bound starch synthase，GBSS）試劑盒(he)說明書(shu)

分光(guang)光(guang)度法

結合(he)態澱粉(fen)合成(cheng)酶(mei)試劑盒(he)

正式測定前(qian)務(wu)必(bi)取 2-3 個預(yu)期(qi)差(cha)異較大的樣本(ben)做(zuo)預(yu)測定測定意義：

GBSS（EC 2.4.1.21）以束(shu)縛(fu)態存在(zai)於澱粉(fen)體中(zhong)，催化(hua)澱粉(fen)鏈的(de)加長(chang)反(fan)應，主(zhu)要(yao)負(fu)責(ze)直(zhi)鏈(lian)澱粉(fen)的合(he)成(cheng)。

測定原理：

GBSS 催化(hua)ADPG 與澱(dian)粉(fen)引物(葡(pu)聚(ju)糖)反應,將葡萄(tao)糖分子(zi)轉移到(dao)澱(dian)粉(fen)引物上(shang)，同時生成(cheng) ADP；進(jin)壹(yi)步通(tong)過反應體系(xi)中(zhong)添加的(de)丙tong酸(suan)激(ji)酶、己糖激(ji)酶和 6-磷酸(suan)葡萄(tao)糖脫(tuo)氫(qing)酶(mei)依(yi)次(ci)催(cui)化(hua) NADP+還原為NADPH，其(qi)中(zhong)NADPH 生成(cheng)量(liang)與(yu)前(qian)壹(yi)步反應生成(cheng)的(de)ADP 數量(liang)呈正比，通(tong)過 340nm 下測定NADPH 的增(zeng)加量(liang)，可以(yi)計算GBSS 活性(xing)。

組(zu)成(cheng)：

BM6003-25T/24S 試劑二臨用(yong)前(qian)加入(ru) 7ml 試劑壹(yi)充(chong)分混勻(yun)備用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反復凍(dong)融(rong)；

BM6003-25T/24S 試劑三臨用(yong)前(qian)加入(ru) 4ml 試劑壹(yi)充(chong)分混勻(yun)備用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反復凍(dong)融(rong)；

BM6003-25T/24S 試劑四臨用(yong)前(qian)加入(ru) 9ml 試劑壹(yi)充(chong)分混勻(yun)備用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反復凍(dong)融(rong)；

BM6003-25T/24S 試劑五(wu)臨用(yong)前(qian)加入(ru) 0.5ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)，充分(fen)溶解備用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反復凍(dong)融(rong)；

BM6003-25T/24S 試劑六(liu)臨用(yong)前(qian)加入(ru) 0.5ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)，充分(fen)溶解備用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反復凍(dong)融(rong)；

BM6003-50T/48S 試劑二臨用(yong)前(qian)加入(ru) 14ml 試劑壹(yi)充(chong)分混勻(yun)備用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反復凍(dong)融(rong)；

BM6003-50T/48S 試劑三臨用(yong)前(qian)加入(ru) 8ml 試劑壹(yi)充(chong)分混勻(yun)備用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反復凍(dong)融(rong)；

BM6003-50T/48S 試劑四臨用(yong)前(qian)加入(ru) 17ml 試劑壹(yi)充(chong)分混勻(yun)備用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反復凍(dong)融(rong)；

BM6003-50T/48S 試劑五(wu)臨用(yong)前(qian)加入(ru) 1ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)，充分(fen)溶解備用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反復凍(dong)融(rong)；

BM6003-50T/48S 試劑六(liu)臨用(yong)前(qian)加入(ru) 1ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)，充分(fen)溶解備用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反復凍(dong)融(rong)；

自(zi)備儀(yi)器(qi)和用(yong)品(pin)：

紫外分(fen)光(guang)光度計、水(shui)浴(yu)鍋(guo)、臺式離(li)心機(ji)、移液器、1 ml 石(shi)英比色(se)皿(min)、研(yan)缽、冰(bing)和蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

粗(cu)酶液制(zhi)備：

稱取(qu) 0.1~0.2g 組(zu)織（建(jian)議(yi)稱取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織），加入(ru) 1ml 提取液，冰(bing)浴(yu)中(zhong)勻(yun)漿(jiang)。10000g ，4℃離(li)心 10min，棄(qi)上(shang)清(qing)，在(zai)沈澱中(zhong)加入(ru) 1ml 提取液充分(fen)混勻(yun)，置冰(bing)上(shang)待測。

測定步驟：

1、分光(guang)光(guang)度計預(yu)熱 30min 以上(shang)，調(tiao)節波長(chang)至 340nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

2、在(zai)EP 管(guan)中(zhong)按(an)順序(xu)加入(ru)下列試劑

混勻(yun)，30℃保溫(wen) 20 min，置沸(fei)水(shui)浴(yu)中(zhong) 1 min（蓋緊，防(fang)止(zhi)水(shui)分散(san)失），冰(bing)浴(yu)冷卻(que)

混勻(yun)，30℃保溫(wen) 30 min，置沸(fei)水(shui)浴(yu)中(zhong) 1 min（蓋緊，防(fang)止(zhi)水(shui)分散(san)失），冰(bing)浴(yu)冷卻(que)，10000g 4℃離(li)心 10min，取上(shang)清(qing)液（如果壹(yi)次(ci)性(xing)測定樣本(ben)較多，可將試劑四、五(wu)和六按(an)比例(li)配(pei)成(cheng)混(hun)合(he)液）

混勻(yun)後(hou)立即(ji) 340 nm 波長(chang)下記錄(lu)初(chu)始吸光(guang)度A1 和 2min 後(hou)的吸光(guang)度A2，計算ΔA=A2-A1。

註(zhu)意(yi)：試劑二如有(you)沈(chen)澱，加入(ru)之(zhi)前(qian)要(yao)使(shi)之(zhi)充(chong)分(fen)溶解混勻(yun)。

GBSS 活性(xing)計算：

1、按(an)樣本(ben)蛋白(bai)濃度計算：

單(dan)位(wei)的定義：每 mg 組(zu)織蛋白(bai)每分(fen)鐘(zhong)催化(hua)產生 1nmol NADPH 定義為壹(yi)個酶(mei)活力單(dan)位(wei)。

GBSS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T×稀(xi)釋(shi)倍(bei)數

=529×ΔA÷Cpr

此法需要(yao)自(zi)行(xing)測定樣本(ben)蛋白(bai)質(zhi)濃(nong)度。

2、按(an)照(zhao)樣本(ben)鮮(xian)重計算

單(dan)位(wei)的定義：每 g 組(zu)織每分(fen)鐘(zhong)催化(hua)產生 1nmol NADPH 定義為壹(yi)個酶(mei)活力單(dan)位(wei)。

GBSS 活性(xing)（nmol/min /g 鮮(xian)重）=[ΔA×V 反(fan)總÷（ε×d）×109]÷（V 樣÷V 樣總(zong)×W）÷T×稀釋(shi)倍(bei)數

=529×ΔA÷W

V 反總(zong)：反(fan)應體系(xi)總(zong)體積，7.8×10-4 L；ε：NADPH 摩(mo)爾(er)消(xiao)光系(xi)數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色(se)皿(min)光徑，1cm；V 樣：加入(ru)樣本(ben)體積，0.15 ml；V 樣總(zong)：加入(ru)提取液體積，1 ml；T：反(fan)應時(shi)間，2 min；稀(xi)釋(shi)倍(bei)數：1.9；Cpr：樣本(ben)蛋白(bai)質(zhi)濃(nong)度，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量(liang)。

結合(he)態澱粉(fen)合成(cheng)酶(mei)試劑盒(he)