SSS 催化(hua)ADPG 與(yu)澱粉(fen)引(yin)物(wu)(葡(pu)聚(ju)糖)反(fan)應(ying)，將(jiang)葡(pu)萄(tao)糖分(fen)子(zi)轉移(yi)到(dao)澱粉(fen)引(yin)物(wu)上，同時生(sheng)成ADP，在反(fan)應(ying)體系中(zhong)添(tian)加的丙(bing)酮酸激(ji)酶、己(ji)糖激(ji)酶和(he) 6-磷(lin)酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖脫(tuo)氫(qing)酶依(yi)次(ci)催(cui)化(hua) NADP+還原(yuan)為(wei)NADPH，NADPH 生(sheng)成量(liang)與(yu)前壹步(bu)反(fan)應(ying)中(zhong) ADP 生(sheng)成量(liang)呈(cheng)正(zheng)比(bi)，340nm 下(xia)測(ce)定(ding)NADPH 增(zeng)加(jia)量(liang)即可(ke)計(ji)算(suan)SSS 活(huo)性。
可溶(rong)性澱粉(fen)合成酶試劑(ji)盒

可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)合成酶（Soluble starch synthase，SSS）試劑(ji)盒說明書

分(fen)光光(guang)度法(fa)

可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)合成酶試劑(ji)盒

正(zheng)式(shi)測(ce)定(ding)前務(wu)必(bi)取 2-3 個(ge)預(yu)期差(cha)異較(jiao)大的樣本(ben)做預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)：

SSS（EC 2.4.1.21）通(tong)常(chang)以遊(you)離(li)態(tai)存在(zai)於質(zhi)體基(ji)質(zhi)中(zhong)，催(cui)化(hua)澱(dian)粉(fen)鏈延(yan)長，主(zhu)要負責(ze)支(zhi)鏈澱粉(fen)的合成。

測(ce)定(ding)原(yuan)理(li)：

SSS 催(cui)化ADPG 與(yu)澱粉(fen)引(yin)物(wu)(葡(pu)聚(ju)糖)反(fan)應(ying)，將(jiang)葡(pu)萄(tao)糖分(fen)子(zi)轉移(yi)到(dao)澱粉(fen)引(yin)物(wu)上，同時生(sheng)成ADP，在反(fan)應(ying)體系中(zhong)添(tian)加的丙(bing)酮酸激(ji)酶、己(ji)糖激(ji)酶和(he) 6-磷(lin)酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖脫(tuo)氫(qing)酶依(yi)次(ci)催(cui)化(hua) NADP+還原(yuan)為(wei)NADPH，NADPH 生(sheng)成量(liang)與(yu)前壹步(bu)反(fan)應(ying)中(zhong) ADP 生(sheng)成量(liang)呈(cheng)正(zheng)比(bi)，340nm 下(xia)測(ce)定(ding)NADPH 增(zeng)加(jia)量(liang)即可(ke)計(ji)算(suan)SSS 活(huo)性。

組(zu)成：

BM6005-25T/24S 試劑(ji)二臨(lin)用(yong)前加入 7ml 試劑(ji)壹充分(fen)混勻備用；用不(bu)完的試劑(ji)分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍融(rong)；

BM6005-25T/24S 試劑(ji)三(san)臨(lin)用(yong)前加入 4ml 試劑(ji)壹充分(fen)混勻備用；用不(bu)完的試劑(ji)分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍融(rong)；

BM6005-25T/24S 試劑(ji)四臨(lin)用(yong)前加入 9ml 試劑(ji)壹充分(fen)混勻備用；用不(bu)完的試劑(ji)分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍融(rong)；

BM6005-25T/24S 試劑(ji)五(wu)臨(lin)用(yong)前加入 0.5ml 蒸餾水，充分(fen)溶(rong)解(jie)備(bei)用；用(yong)不(bu)完的試劑(ji)分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍融(rong)；

BM6005-25T/24S 試劑(ji)六(liu)臨(lin)用(yong)前加入 0.5ml 蒸餾水，充分(fen)溶(rong)解(jie)備(bei)用；用(yong)不(bu)完的試劑(ji)分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍融(rong)；

BM6005-50T/48S 試劑(ji)二臨(lin)用(yong)前加入 14ml 試劑(ji)壹充分(fen)混勻備用；用不(bu)完的試劑(ji)分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍融(rong)；

BM6005-50T/48S 試劑(ji)三(san)臨(lin)用(yong)前加入 8ml 試劑(ji)壹充分(fen)混勻備用；用不(bu)完的試劑(ji)分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍融(rong)；

BM6005-50T/48S 試劑(ji)四臨(lin)用(yong)前加入 17ml 試劑(ji)壹充分(fen)混勻備用；用不(bu)完的試劑(ji)分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍融(rong)；

BM6005-50T/48S 試劑(ji)五(wu)臨(lin)用(yong)前加入 1ml 蒸餾水，充分(fen)溶(rong)解(jie)備(bei)用；用(yong)不(bu)完的試劑(ji)分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍融(rong)；

BM6005-50T/48S 試劑(ji)六(liu)臨(lin)用(yong)前加入 1ml 蒸餾水，充分(fen)溶(rong)解(jie)備(bei)用；用(yong)不(bu)完的試劑(ji)分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍融(rong)；

自(zi)備儀器和用(yong)品：

紫(zi)外(wai)分(fen)光光(guang)度計(ji)、水浴(yu)鍋(guo)、臺(tai)式(shi)離(li)心(xin)機(ji)、移液器、1 ml 石英(ying)比(bi)色(se)皿、研缽(bo)、冰(bing)和(he)蒸餾水。

粗(cu)酶液制(zhi)備：

按(an)照組(zu)織質量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入 1ml 提取液），進(jin)行(xing)冰(bing)浴(yu)勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰(bing)上待測(ce)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟(zhou)：

1、分(fen)光光(guang)度計(ji)預熱 30min 以上，調(tiao)節(jie)波(bo)長至 340nm，蒸餾水調(tiao)零。

2、在(zai)EP 管中(zhong)按(an)順(shun)序加入下(xia)列試劑(ji)

混(hun)勻，30℃保(bao)溫(wen) 20 min，置沸水浴(yu)中(zhong) 1 min（蓋(gai)緊，防(fang)止(zhi)水分(fen)散(san)失），冰(bing)浴(yu)冷卻

混(hun)勻，30℃保(bao)溫(wen) 30 min，置沸水浴(yu)中(zhong) 1 min（蓋(gai)緊，防(fang)止(zhi)水分(fen)散(san)失），冰(bing)浴(yu)冷卻，10000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清液（如(ru)果(guo)壹次(ci)性測(ce)定(ding)樣(yang)本(ben)較(jiao)多，可(ke)將(jiang)試劑(ji)四、五(wu)和六(liu)按(an)比(bi)例(li)配成混合(he)液）

混(hun)勻後立即 340 nm 波(bo)長下(xia)記(ji)錄初(chu)始吸光度(du)A1 和(he) 2min 後(hou)的吸光度(du)A2，計(ji)算(suan)ΔA=A2-A1。

註(zhu)意(yi)：試劑(ji)二如(ru)有(you)沈(chen)澱，加(jia)入之(zhi)前要使之(zhi)充分(fen)溶(rong)解(jie)混(hun)勻。

SSS 活(huo)性計算(suan)：

1、按(an)樣本(ben)蛋白濃(nong)度計算(suan)：

單(dan)位的定義(yi)：每mg 組織蛋白每分(fen)鐘(zhong)催(cui)化(hua)產(chan)生(sheng) 1nmol NADPH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單位(wei)。

GBSS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T×稀釋(shi)倍數

=529×ΔA÷Cpr

此法(fa)需(xu)要(yao)自(zi)行測(ce)定(ding)樣(yang)本(ben)蛋白質(zhi)濃度。

2、按(an)照樣(yang)本鮮重(zhong)計算(suan)

單(dan)位的定義(yi)：每 g 組織每分(fen)鐘(zhong)催(cui)化(hua)產(chan)生(sheng) 1nmol NADPH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單位(wei)。

GBSS 活(huo)性（nmol/min /g 鮮重(zhong)）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T×稀(xi)釋(shi)倍數

=529×ΔA÷W

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系總體(ti)積(ji)，7.8×10-4 L；ε：NADPH 摩(mo)爾消光(guang)系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比(bi)色(se)皿光徑(jing)，1cm；V 樣：加(jia)入樣本體(ti)積(ji)，0.15 ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入提取液體積(ji)，1 ml；T：反(fan)應(ying)時間(jian)，2 min；稀(xi)釋(shi)倍數：1.9；Cpr：樣本蛋白質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量(liang)。

可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)合成酶試劑(ji)盒