澱(dian)fen酶負(fu)責水(shui)解(jie)澱(dian)粉，主(zhu)要包(bao)括α-澱(dian)fen酶和β-澱(dian)fen酶。β-澱fen酶(EC 3.2.1.2)可隨(sui)機地(di)作(zuo)用(yong)於(yu)澱粉中的(de)α-1,4-糖(tang)苷(gan)鍵(jian)，生成葡(pu)萄糖、麥(mai)芽(ya)糖(tang)、麥(mai)芽(ya)三(san)糖、糊精等(deng)還原糖。
β-澱fen酶試(shi)劑(ji)盒 澱粉系(xi)列

β-澱fen酶（β-amylase，β-AL）試劑(ji)盒說明(ming)書(shu)

分光光度法 50 管(guan)/24 樣(yang)

β-澱fen酶試(shi)劑(ji)盒 澱粉系(xi)列

正(zheng)式測定(ding)前務(wu)必取(qu) 2-3 個預(yu)期(qi)差(cha)異較大(da)的(de)樣(yang)本(ben)做預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

澱fen酶負(fu)責水(shui)解(jie)澱(dian)粉，主(zhu)要包(bao)括α-澱(dian)fen酶和β-澱(dian)fen酶。β-澱fen酶(EC 3.2.1.2)可隨(sui)機地(di)作(zuo)用(yong)於(yu)澱粉中的(de)α-1,4-糖苷鍵(jian)，生成葡(pu)萄糖、麥(mai)芽(ya)糖(tang)、麥(mai)芽(ya)三(san)糖、糊精等(deng)還原糖。

測定(ding)原(yuan)理(li)：

還原糖還原 3,5-二硝基水(shui)楊(yang)酸生成棕(zong)紅色物質(zhi)。α-澱fen酶不耐酸，β-澱fen酶(mei)不(bu)耐熱(re)。根(gen)據(ju)上述(shu)特性(xing)，鈍化(hua)其中之(zhi)壹(yi)，就可測(ce)出(chu)另(ling)壹(yi)種澱fen酶的(de)活(huo)力(li)。

組成：

試劑(ji)壹：50ml×1 瓶，常溫(wen)保(bao)存，若(ruo)有黃色晶體析出(chu)，需 90℃加熱(re)溶(rong)解(jie)後(hou)再用(yong)；試劑(ji)二：40ml×1 瓶，4℃保(bao)存，若(ruo)有沈澱析(xi)出，需 70℃加熱(re)後(hou)再(zai)用(yong)。

自備儀器和用(yong)品(pin)：

可見分光光度計(ji)、恒(heng)溫(wen)水浴(yu)鍋(guo)、離(li)心機(ji)、可調(tiao)式移液(ye)器、玻璃(li)比(bi)色(se)皿(min)、研缽和蒸餾水。

粗酶液(ye)制備：

組織：稱取(qu) 0.1~0.2g 樣(yang)本(ben)（建(jian)議稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 樣(yang)本(ben)），加入(ru) 1ml 蒸餾水，研磨勻漿；將(jiang)勻漿倒(dao)入(ru)離(li)心管(guan)中，提(ti)取(qu)液(ye)在(zai)室(shi)溫(wen)下放(fang)置提(ti)取(qu) 15min，每(mei) 5min 振(zhen)蕩(dang) 1 次，使其充分提取(qu)；3000g，25℃離(li)心 10min，取(qu)上清(qing)液(ye)加(jia)蒸餾水定(ding)容至(zhi) 10 ml，搖(yao)勻，即澱(dian)fen酶(mei)原液(ye)。

吸取(qu)上述(shu)澱fen酶(mei)原液(ye) 1ml，加入(ru) 4ml 蒸餾水，搖(yao)勻，即為(wei)澱(dian)fen酶稀釋(shi)液(ye)，用(yong)於(yu)（α＋β）澱fen酶(mei)總(zong)活力的(de)測(ce)定(ding)。

血清(qing)（漿）等(deng)液(ye)體樣(yang)本(ben)：（1）直(zhi)接檢(jian)測α-澱(dian)fen酶。（2）吸取(qu)澱(dian)fen酶(mei)原(yuan)液(ye) 1ml，加入(ru) 4ml 蒸餾水，搖(yao)勻，即為(wei)澱(dian)fen酶稀釋(shi)液(ye)，用(yong)於(yu)（α＋β）澱fen酶(mei)總(zong)活力的(de)測(ce)定(ding)。

測定(ding)步(bu)驟：

1、分光光度計(ji)預(yu)熱(re) 30min 以上，調(tiao)節(jie)波長(chang)到(dao) 540 nm，蒸餾水調零(ling)。

2、試劑(ji)壹和試(shi)劑(ji)二 40℃預(yu)熱(re) 10min。

3、測定(ding)操作(zuo)表：

70℃水浴(yu) 15min 左右(you)，冷卻

在 40℃恒(heng)溫(wen)水浴(yu)中準(zhun)確(que)保(bao)溫(wen) 5min

混勻，95℃水(shui)浴(yu) 5min，冷卻，在(zai) 540nm 下測(ce)定(ding)吸光度，從(cong)左(zuo)到(dao)右(you)分別記(ji)為(wei)A1、A2、A3 和A4。

酶活性(xing)計算(suan)：

1、標準(zhun)條(tiao)件下(xia)測(ce)定(ding)回(hui)歸曲(qu)線為y=3.7215x -0.1778； x 為(wei)標準(zhun)品(pin)濃度（mg/ml），y 為(wei)吸光值(zhi)。

2、α- 澱fen酶活(huo)性(xing)

按照(zhao)樣(yang)本(ben)質量(liang)計算

單(dan)位定(ding)義：每(mei) g 組織(zhi)每(mei)分鐘(zhong)催化(hua)產(chan)生 1mg 還原糖定(ding)義為 1 個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

α- 澱fen酶活(huo)性(xing)(mg/min/g 鮮重(zhong))=[(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反(fan)總(zong)]÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T

=1.075×(A2-A1＋0.1778)÷W

按照(zhao)蛋白(bai)質含(han)量(liang)計算

單(dan)位定(ding)義：每(mei) mg 組織(zhi)蛋白(bai)每(mei)分鐘(zhong)催化(hua)產(chan)生 1mg 還原糖定(ding)義為 1 個(ge)酶(mei)活性(xing)單(dan)位。

α- 澱fen酶活(huo)性(xing)(mg/min/mg prot)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反(fan)總(zong)]÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T

=0.1075×(A2-A1＋0.1778) ÷Cpr

血清(qing)（漿）等(deng)液(ye)體樣(yang)本(ben)中α- 澱(dian)fen酶活性(xing)計算(suan)

單(dan)位定(ding)義：每(mei) ml 血清(qing)（漿）每(mei)分鐘(zhong)催化(hua)產(chan)生 1mg 還原糖定(ding)義為 1 個(ge)酶(mei)活性(xing)單(dan)位。

α- 澱fen酶活(huo)性(xing)(mg/min/ml)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反(fan)總(zong)]÷V 樣(yang)÷T=0.1075×(A2-A1＋0.1778)

3、總澱fen酶(mei)活(huo)性(xing)計算(suan)

按照(zhao)樣(yang)品(pin)質(zhi)量(liang)計(ji)算(suan)

單(dan)位定(ding)義：每(mei) g 組織(zhi)每(mei)分鐘(zhong)催化(hua)產(chan)生 1mg 還原糖定(ding)義為 1 個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

總澱fen酶(mei)活(huo)性(xing)(mg/min//g 鮮重(zhong))=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反(fan)總(zong)]÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T=5.375×(A4-A3＋0.1778)÷W

按照(zhao)蛋白(bai)質含(han)量(liang)計算

單(dan)位定(ding)義：每(mei) mg 組織(zhi)蛋白(bai)每(mei)分鐘(zhong)催化(hua)產(chan)生 1mg 還原糖定(ding)義為 1 個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

總澱fen酶(mei)活(huo)性(xing)(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反(fan)總(zong)]÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T

=0.5375×(A4-A3＋0.1778) ÷Cpr

血清(qing)（漿）等(deng)液(ye)體樣(yang)本(ben)中總(zong)澱fen酶活性(xing)計算(suan)

單(dan)位定(ding)義：每(mei) ml 血清(qing)（漿）每(mei)分鐘(zhong)催化(hua)產(chan)生 1mg 還原糖定(ding)義為 1 個(ge)酶(mei)活性(xing)單(dan)位。總(zong)澱fen酶活(huo)性(xing)(mg/min/ml) =5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反(fan)總(zong)]÷V 樣(yang)÷T=0.5375×(A4-A3＋0.1778)

4、β-澱fen酶活(huo)性(xing)計算(suan)

按照(zhao)樣(yang)本(ben)質量(liang)計算

單(dan)位定(ding)義：每(mei)g 組織(zhi)在(zai)反(fan)應體系(xi)中每(mei)分鐘(zhong)催化(hua)產(chan)生 1mg 還原糖定(ding)義為 1 個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

β-澱fen酶活(huo)性(xing)(mg/min/g  鮮重(zhong))=澱(dian)fen酶總活性(xing)-α-澱fen酶(mei)活性(xing)=[5.375×(A4-A3＋0.1778)-1.075×(A2-A1＋0.1778)]÷W

按照(zhao)蛋白(bai)質含(han)量(liang)計算

單(dan)位定(ding)義：每(mei)mg 組織(zhi)蛋白(bai)每(mei)分鐘(zhong)催化(hua)產(chan)生 1mg 還原糖定(ding)義為 1 個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

β-澱fen酶活(huo)性(xing)（mg/min/mg prot）=澱fen酶(mei)總活性(xing)-α-澱fen酶(mei)活性(xing)=[0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075× (A2-A1＋0.1778)]÷Cpr

血清(qing)（漿）等(deng)液(ye)體樣(yang)本(ben)中β-澱(dian)fen酶活性(xing)計算(suan)

單(dan)位定(ding)義：每(mei)ml 血清(qing)（漿）每(mei)分鐘(zhong)催化(hua)產(chan)生 1mg 還原糖定(ding)義為 1 個(ge)酶(mei)活性(xing)單(dan)位。

β-澱fen酶活(huo)性(xing)（mg/min/ml）=澱fen酶(mei)總活性(xing)-α-澱fen酶(mei)活性(xing)=0.5375×(A4-A3＋0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)

5：總澱fen酶(mei)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應體系(xi)總體積(ji)，0.5ml；V 樣(yang)：加入(ru)反(fan)應體系(xi)中樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.25 ml； V 樣(yang)總：提取(qu)液(ye)總(zong)體積(ji)，10 ml； Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白(bai)質濃度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量(liang)，g；T：反(fan)應時間，5min。

β-澱fen酶試(shi)劑(ji)盒 澱粉系(xi)列