采(cai)用(yong) 3，5-二(er)硝(xiao)基水楊(yang)酸法測定(ding) DBE 催化(hua)支(zhi)鏈(lian)澱粉(fen)產(chan)生的(de)還(hai)原糖(tang)，通(tong)過測(ce)定(ding)還(hai)原糖(tang)含量的(de)變(bian)化來計(ji)算DBE 活(huo)性(xing)。
澱(dian)粉脫(tuo)分(fen)支(zhi)酶(mei)試劑(ji)盒(he) 澱粉(fen)系列(lie)

澱(dian)粉(fen)脫(tuo)分(fen)支(zhi)酶(mei)（Starch debranching enzyme，DBE）試(shi)劑(ji)盒(he)說明(ming)書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度法 50 管(guan)/24 樣

澱(dian)粉(fen)脫(tuo)分(fen)支(zhi)酶(mei)試劑(ji)盒(he) 澱粉(fen)系列(lie)

正(zheng)式(shi)測定(ding)前(qian)務必(bi)取 2-3 個(ge)預(yu)期差異較(jiao)大(da)的(de)樣本做(zuo)預(yu)測(ce)定測定(ding)意(yi)義：

DBE 能夠(gou)專(zhuan)壹(yi)性(xing)地(di)裂(lie)解(jie)支(zhi)鏈(lian)澱粉(fen)的(de)α-1，6 糖(tang)苷(gan)鍵，產(chan)生線(xian)性(xing)的(de)葡(pu)萄糖(tang)鏈(lian)，在調整(zheng)支(zhi)鏈(lian)澱粉(fen)分(fen)子的(de)鏈(lian)長方面(mian)有(you)重(zhong)要(yao)的(de)作(zuo)用(yong)。

測(ce)定(ding)原理(li)：

采(cai)用(yong) 3，5-二(er)硝(xiao)基水楊(yang)酸法測定(ding) DBE 催(cui)化(hua)支(zhi)鏈(lian)澱粉(fen)產(chan)生的(de)還(hai)原糖(tang)，通(tong)過測(ce)定(ding)還(hai)原糖(tang)含量的(de)變(bian)化來計(ji)算DBE 活(huo)性(xing)。

組(zu)成(cheng)：

試(shi)劑(ji)二(er)臨用(yong)前(qian)每支(zhi)加入(ru) 6mL 試(shi)劑(ji)壹(yi)，充(chong)分(fen)混勻(yun)後(hou)備用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試(shi)劑(ji) 4℃保(bao)存；

自(zi)備儀器和(he)用(yong)品(pin)：

可(ke)見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)、水浴(yu)鍋、臺式(shi)離心(xin)機、可(ke)調式(shi)移液器、1mL 玻璃比色(se)皿、研缽(bo)、冰(bing)、蒸(zheng)餾(liu)水

粗(cu)酶(mei)液制備：

按照(zhao)組(zu)織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議(yi)稱(cheng)取約(yue) 0.1g 組(zu)織，加入(ru) 1mL 提取液），進行冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿(jiang)。15000g 4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)或酶(mei)標(biao)儀預熱(re) 30min 以上(shang)，調節(jie)波長到 540 nm，蒸(zheng)餾(liu)水調零(ling)。

2、加樣表

混(hun)勻(yun)，37℃準確保溫 2h

混(hun)勻(yun)，95℃水浴(yu) 5min，於(yu) 1mL 玻璃比色(se)皿 540nm 處讀(du)取各管吸(xi)光(guang)值(zhi)。ΔA=A 測(ce)定-A 對照(zhao)。每(mei)個(ge)測定管(guan)需設(she)個壹(yi)個對照(zhao)管(guan)。

註(zhu)意(yi)：可(ke)以在不同對照(zhao)管(guan)中加入(ru)不同樣品的(de)粗(cu)酶(mei)液，然後(hou)集(ji)中進行(xing) 5min 95℃沸(fei)水浴(yu)處理。

DBE 活(huo)力(li)單(dan)位(wei)的(de)計(ji)算：

標(biao)準條件(jian)測定(ding)回(hui)歸(gui)方程(cheng)為y = 3.8458x - 0.165；x 為(wei)標(biao)準品濃(nong)度（mg/mL），y 為(wei)吸光(guang)值(zhi)。

按照(zhao)蛋(dan)白濃(nong)度計(ji)算

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義：每mg 組織蛋白每h 催化產(chan)生 1mg 葡(pu)萄(tao)糖(tang)定義為壹(yi)個酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。

DBE 活(huo)力(li)(mg /min /mg prot)=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反(fan)總(zong)]÷(V 樣×Cpr)÷T

=0.26× (ΔA+0.165) ÷Cpr

按樣本鮮重(zhong)計(ji)算

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義：每g 組織每分(fen)鐘催化(hua)產(chan)生 1mg 葡(pu)萄(tao)糖(tang)定義為壹(yi)個酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。

DBE 活(huo)力(li)(mg /min /g 鮮重(zhong))=[ (ΔA+0.165)÷3.8458×V 反總(zong)]÷(W× V 樣÷V 樣總(zong))÷T

=0.26× (ΔA+0.165) ÷W

V 反(fan)總(zong)：反應體系總(zong)體積，0.4mL； V 樣：加入(ru)樣本體(ti)積(ji)，0.2mL；V 樣總(zong)：加入(ru)提取液體積，1 mL； T：反應時間(jian)，2 h；Cpr：樣本蛋(dan)白質濃(nong)度，mg/mL；W：樣本質(zhi)量，g。

標(biao)準曲線線性(xing)範(fan)圍為 0.1mg/mL-1mg/mL。 ΔA 線性(xing)範(fan)圍為 0.01-2。

澱(dian)粉(fen)脫(tuo)分(fen)支(zhi)酶(mei)試劑(ji)盒(he) 澱粉(fen)系列(lie)