澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶（Starch Phosphorylase，SP）是澱(dian)粉代謝(xie)過程(cheng)唯yi的(de)可(ke)逆(ni)反(fan)應酶，既可催化(hua)澱(dian)粉的(de)合(he)成，也可催(cui)化(hua)澱(dian)粉的(de)分(fen)解(jie)。
澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶試劑(ji)盒(he) 澱(dian)粉系(xi)列(lie)

澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶（Starch phosphorylase，SP）試劑(ji)盒(he)說(shuo)明書(shu)

分光光度(du)法 50 管/48 樣(yang)

澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶試劑(ji)盒(he) 澱(dian)粉系(xi)列(lie)

正式(shi)測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差(cha)異(yi)較大(da)的(de)樣(yang)本(ben)做預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)：

澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶（Starch Phosphorylase，SP）是澱(dian)粉代謝(xie)過程(cheng)唯yi的(de)可(ke)逆(ni)反(fan)應酶，既可催化(hua)澱(dian)粉的(de)合(he)成，也可催(cui)化(hua)澱(dian)粉的(de)分(fen)解(jie)。

在高等(deng)植物(wu)中(zhong)，澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶（合(he)成方(fang)向(xiang)）主要存(cun)在於質(zhi)體中(zhong)，負責(ze)延長(chang)澱(dian)粉的(de) α-1,4-葡(pu)萄糖(tang)鏈(lian)的(de)非(fei)還原(yuan)末端(duan)；澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶（分解(jie)方向(xiang)）主(zhu)要存(cun)在於細(xi)胞(bao)質(zhi)基(ji)質中(zhong)，催(cui)化澱(dian)粉中(zhong)的(de)α-1,4-糖(tang)苷(gan)鍵(jian)磷(lin)酸(suan)解(jie)產生(sheng)葡(pu)萄糖(tang)-1-磷(lin)酸(suan)，負責(ze)葡(pu)萄糖(tang)鏈(lian)的(de)磷(lin)酸(suan)解(jie)，是澱(dian)粉代謝(xie)過程(cheng)中(zhong)的(de)關鍵(jian)酶。

在植物(wu)體(ti)中(zhong)，澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶分解(jie)方向(xiang)的(de)底(di)物(wu)無(wu)機(ji)磷(lin)濃(nong)度比合(he)成方(fang)向(xiang)的(de)底(di)物(wu)葡(pu)萄糖(tang)-1-磷(lin)酸(suan)濃度幾乎高(gao)了兩(liang)個(ge)數(shu)量(liang)級，壹(yi)般(ban)認為澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶只催化(hua)澱(dian)粉的(de)分(fen)解(jie)，因此，分解(jie)方向(xiang)的(de)澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶具有(you)重(zhong)要測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)。

測定(ding)原(yuan)理：

澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶催化澱(dian)粉中(zhong)的(de)α-1,4-糖(tang)苷(gan)鍵(jian)與無(wu)機(ji)磷(lin)反(fan)應產(chan)生(sheng)葡(pu)萄糖(tang)-1-磷(lin)酸(suan)，葡(pu)萄糖(tang)-1-磷(lin)酸(suan)在磷(lin)酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)變位(wei)酶的(de)作(zuo)用下(xia)產生(sheng)葡(pu)萄糖(tang)-6-磷(lin)酸(suan)，並在 6-磷(lin)酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)脫氫酶催化下還(hai)原(yuan) NADP+產(chan)生(sheng)NADPH，使 340nm 下吸(xi)光值增加(jia)。

組(zu)成：

試劑(ji)二：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃保存(cun)；臨用(yong)前(qian)加(jia)入(ru) 3ml 水(shui)溶解(jie)，用不完的(de)試劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存(cun)；試劑(ji)三(san)：粉劑(ji)×1 支，-20℃保存(cun)；臨用(yong)前(qian)加(jia)入(ru) 3ml 水溶解(jie)，用不完的(de)試劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存(cun)。

自(zi)備儀(yi)器和(he)用(yong)品(pin)：

紫外(wai)分(fen)光光度(du)計(ji)、臺(tai)式離(li)心(xin)機(ji)、可(ke)調(tiao)式移(yi)液(ye)器、1ml 石(shi)英比色皿(min)、研(yan)缽、冰和(he)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

樣本(ben)的(de)前(qian)處(chu)理：

1、組(zu)織：按照(zhao)組(zu)織質量(liang)（g）：提取(qu)液(ye)體積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織，加入(ru) 1ml 提取(qu)液(ye)）進行冰(bing)浴(yu)勻漿，然後 10000g，4℃，離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清待測(ce)。

2、細菌(jun)、真(zhen)菌：按(an)照(zhao)細胞(bao)數(shu)量(liang)（10⁴ 個(ge)）：提取(qu)液(ye)體積(ji)（ml）為 500~1000：1 的(de)比(bi)例(li)（建議 500 萬(wan)細胞(bao)加(jia)入 1ml 提取(qu)液(ye)），冰浴(yu)超(chao)聲波破(po)碎細胞(bao)（功(gong)率(lv) 300w，超聲 3 秒，間(jian)隔(ge) 7 秒，總(zong)時間(jian) 3min）；然後(hou) 10000g， 4℃，離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清置於冰上待測(ce)。

測定(ding)步(bu)驟：

1、分光光度(du)計(ji)預(yu)熱 30min 以上，調(tiao)節波長至 340nm，蒸餾(liu)水(shui)調(tiao)零；

2、工作(zuo)液(ye)的(de)配制：臨(lin)用(yong)前(qian)將(jiang)試劑(ji)壹(yi)、試劑(ji)二、試劑(ji)三(san)按照(zhao)每個(ge)樣(yang)本(ben) 850μL:50μL:50μL 的(de)比(bi)例(li)混(hun)合(he)，臨(lin)用(yong)前(qian)配制，半小(xiao)時內使用。

3、在 1ml 石(shi)英比色皿(min)中(zhong)加(jia)入 50μL 樣本(ben)和(he) 950μL 工作(zuo)液(ye)，立即(ji)混(hun)勻，記錄 340nm 處(chu) 1min 時的(de)吸(xi)光值A1和(he) 6min 時的(de)吸(xi)光值A2，計(ji)算(suan)ΔA=A2-A1。

SP 活力單(dan)位(wei)的(de)計(ji)算(suan)：

按樣(yang)本(ben)蛋(dan)白濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：每mg 組(zu)織蛋(dan)白每(mei)分(fen)鐘(zhong)產(chan)生(sheng) 1nmolNADPH 定(ding)義(yi)為壹(yi)個(ge)酶活力單(dan)位(wei)。

SP（nmol/min/mgprot）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr)÷T

=943×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮重(zhong)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：每g 組(zu)織每分(fen)鐘(zhong)產(chan)生(sheng) 1nmolNADPH 定(ding)義(yi)為壹(yi)個(ge)酶活力單(dan)位(wei)。

SP（nmol/min/g 鮮重(zhong)）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T

=943×ΔA÷W

按樣(yang)本(ben)細胞(bao)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：每萬(wan)個(ge)細(xi)胞(bao)每(mei)分(fen)鐘(zhong)產(chan)生(sheng) 1nmolNADPH 定(ding)義(yi)為壹(yi)個(ge)酶活力單(dan)位(wei)。

SP（nmol/min/104cell）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)×V 樣÷V 樣總(zong))÷T

=1.886×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積(ji)，1×10^-3L；ε：NADPH 摩(mo)爾消(xiao)光系(xi)數(shu)，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿(min)光徑(jing)，1cm； V 樣：加(jia)入(ru)樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.05ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提取(qu)液(ye)體積(ji)，1ml；T：反(fan)應時間(jian)，5min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白質(zhi) 濃(nong)度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量(liang)，g；細胞(bao)數(shu)量(liang)，500 萬(wan)。

澱(dian)粉磷(lin)酸(suan)化酶試劑(ji)盒(he) 澱(dian)粉系(xi)列(lie)