蔗(zhe)糖(tang)是源(yuan)（葉(ye)片等）光合產(chan)物(wu)向(xiang)“庫"器官(guan)運(yun)輸(shu)的(de)主(zhu)要(yao)形(xing)態。蔗糖(tang)合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙向(xiang)反應(ying)酶，既(ji)可催化(hua)蔗糖(tang)合成又(you)可(ke)催化(hua)蔗糖(tang)分解(jie)，是蔗糖(tang)代(dai)謝的(de)關(guan)鍵酶(mei)之壹。研(yan)究其分(fen)解(jie)方(fang)向(xiang)SS-Ⅰ的(de)活性(xing)對於(yu)植(zhi)物蔗(zhe)糖(tang)降解(jie)以及澱粉合成具有(you)重(zhong)要(yao)意(yi)義。
蔗糖(tang)合成酶 分解方(fang)向(xiang)SS-Ⅰ試(shi)劑(ji)盒

蔗糖(tang)合成酶（分解方(fang)向(xiang)；SS-Ⅰ）試(shi)劑(ji)盒說明書

分光(guang)光(guang)度法(fa) 50 管/24 樣(yang)

蔗糖(tang)合成酶 分解方(fang)向(xiang)SS-Ⅰ試(shi)劑(ji)盒

正式(shi)測定前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個預期(qi)差(cha)異(yi)較大(da)的(de)樣(yang)本做預測定測(ce)定意(yi)義：

蔗糖(tang)是源(yuan)（葉(ye)片等）光合產(chan)物(wu)向(xiang)“庫"器官(guan)運(yun)輸(shu)的(de)主(zhu)要(yao)形(xing)態。蔗糖(tang)合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙(shuang)向(xiang)反應(ying)酶，既(ji)可催化(hua)蔗糖(tang)合成又(you)可(ke)催化(hua)蔗糖(tang)分解(jie)，是蔗糖(tang)代(dai)謝的(de)關(guan)鍵酶(mei)之壹。研(yan)究其分(fen)解(jie)方(fang)向(xiang)SS-Ⅰ的(de)活性(xing)對於(yu)植(zhi)物蔗(zhe)糖(tang)降解(jie)以及澱粉合成具有(you)重(zhong)要(yao)意(yi)義。

測定原(yuan)理(li)：

SS-Ⅰ催化(hua)蔗糖(tang)和UDP 生(sheng)成遊離果糖(tang)和 UDPG，采用(yong) 3,5－二(er)硝(xiao)基水(shui)楊(yang)酸法測定還(hai)原糖(tang)的(de)含量來(lai)反(fan)映酶(mei)活性(xing)的(de)高低。

組(zu)成：

試(shi)劑(ji)三：粉(fen)劑(ji)×2 支，-20℃保(bao)存；臨(lin)用(yong)前每(mei)支加(jia)入 1.2ml 試(shi)劑(ji)二(er)充分(fen)溶(rong)解(jie)待(dai)用，現(xian)配現(xian)用(yong)；

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和用品(pin)：

可見(jian)分光光度計(ji)、水(shui)浴(yu)鍋、離心(xin)機(ji)、移(yi)液(ye)器(qi)、1ml 玻璃比(bi)色皿、研缽(bo)、冰(bing)

樣(yang)品(pin)測(ce)定的(de)準備：

按照組(zu)織(zhi)質量（g）：提取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議稱取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入 1ml 提取(qu)液(ye)），進行(xing)冰(bing)浴勻(yun)漿(jiang)。8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

測定步(bu)驟(zhou)：

1、分光(guang)光(guang)度計(ji)或(huo)酶標儀(yi)預熱(re) 30min 以上(shang)，調(tiao)節(jie)波(bo)長(chang)至 540nm，蒸餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

2、樣(yang)本測(ce)定，（在(zai)EP 管中依(yi)次加(jia)入下(xia)列(lie)試(shi)劑(ji)）：

混勻(yun)，30℃準確(que)水(shui)浴(yu) 30min 後，95℃水(shui)浴(yu) 10min，冷(leng)卻(que)至(zhi)室溫(wen) 95℃水(shui)浴(yu) 5min 左右，冷(leng)卻(que)至(zhi)室溫(wen)

混勻(yun)，540nm 下(xia)測定各管吸(xi)光(guang)值(zhi)。ΔA=A 測(ce)定-A 對(dui)照。每(mei)個測定管需(xu)要(yao)設(she)壹個對照管。

SS-Ⅰ活性(xing)計算:

1、標準(zhun)條(tiao)件(jian)下(xia)測定回歸方(fang)程(cheng)為 y = 0.0012x - 0.0492；x 為標準(zhun)品(pin)濃(nong)度（μg/ml），y 為(wei)ΔA。

2、按照蛋白(bai)濃(nong)度計(ji)算

單(dan)位定義(yi)：每(mei)mg 組(zu)織(zhi)蛋白(bai)每(mei)分(fen)鐘催化(hua)產(chan)生(sheng) 1μg 還原(yuan)糖(tang)定義(yi)為壹(yi)個酶活(huo)力(li)單(dan)位。

SS-Ⅰ活性(xing)(μg /min/mg prot)=[ (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V 反總(zong)]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照樣(yang)本鮮(xian)重(zhong)計(ji)算

單(dan)位定義(yi)：每(mei)g 組(zu)織(zhi)每(mei)分(fen)鐘催化(hua)產(chan)生(sheng) 1μg 還原(yuan)糖(tang)定義(yi)為壹(yi)個酶活(huo)力(li)單(dan)位。

SS-Ⅰ活性(xing)(μg /min/g 鮮重(zhong)) =[(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V 反總(zong)]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W

V 反總(zong)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)總體(ti)積(ji)，0.1ml； V 樣(yang)：加(jia)入樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.02 ml；V 樣(yang)總：加(jia)入提取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1 ml；T：反應(ying)時間(jian)，30 min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質濃(nong)度，mg/ml；W：樣(yang)本質(zhi)量，g。

蔗糖(tang)合成酶 分解方(fang)向(xiang)SS-Ⅰ試(shi)劑(ji)盒