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| 品(pin)牌(pai) | NobleRyder/諾(nuo)博萊德 | 貨(huo)號 | BN6011 |
|---|---|---|---|
| 規(gui)格 | 50T/24S | 供(gong)貨(huo)周(zhou)期 | 現貨(huo) |
| 主(zhu)要(yao)用(yong)途(tu) | 通(tong)過(guo)降(jiang)解(jie)液(ye)泡中蔗糖(tang),調(tiao)節液泡(pao)中蔗(zhe)糖(tang)的利用和(he)果(guo)實內糖(tang)類的積累(lei) | 應用(yong)領(ling)域 | 環(huan)保,化工(gong),生物(wu)產業(ye),農(nong)林牧漁(yu),制(zhi)藥(yao)/生物(wu)制(zhi)藥(yao) |
可(ke)溶(rong)性(xing)酸(suan)性(xing)轉(zhuan)化酶(Soluble acid invertase, S-AI)試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)
分(fen)光光度法(fa) 50 管(guan)/24 樣(yang)
可(ke)溶(rong)性(xing)酸(suan)性(xing)轉(zhuan)化酶 蔗糖(tang)
正(zheng)式測定前務(wu)必取 2-3 個(ge)預期差(cha)異(yi)較大的樣本(ben)做預(yu)測定測定意義(yi):
蔗糖(tang)轉(zhuan)化酶(Invertase,Ivr)催化蔗(zhe)糖(tang)不(bu)可(ke)逆(ni)地分解(jie)為(wei)果(guo)糖(tang)和(he)葡萄糖(tang),是(shi)高(gao)等(deng)植(zhi)物(wu)蔗糖(tang)代(dai)謝關(guan)鍵(jian)酶之(zhi)壹(yi)。根據(ju)最適(shi) pH,Ivr 分為酸(suan)性(xing)轉(zhuan)化酶(AI)和(he)中(zhong)性(xing)轉(zhuan)化酶(NI)兩(liang)種類型。
AI 的最適(shi)pH 為(wei) 3~5。AI 分為可(ke)溶(rong)性(xing)AI(S-AI)和(he)細(xi)胞(bao)壁(bi)不(bu)溶(rong)性(xing)AI(B-AI)兩(liang)種類型。S-AI 主(zhu)要(yao)存在於(yu)細(xi)胞(bao)液(ye)泡(pao)或自(zi)由空(kong)間中(zhong),最(zui)適(shi) pH 為 4.5~5.0(酸(suan)性(xing)),通(tong)過(guo)降(jiang)解(jie)液(ye)泡中蔗糖(tang),調(tiao)節液泡(pao)中蔗(zhe)糖(tang)的利用和(he)果(guo)實內糖(tang)類的積累(lei)。
測定原理:
S-AI 催化蔗(zhe)糖(tang)降(jiang)解(jie)產生還(hai)原糖(tang),進(jin)壹(yi)步(bu)與(yu) 3,5-二(er)硝(xiao)基水楊(yang)酸(suan)反(fan)應(ying),生成(cheng)棕紅(hong)色(se)氨(an)基(ji)化合物(wu),在 510nm有(you)特(te)征(zheng)光吸(xi)收,在壹(yi)定(ding)範圍(wei)內 510nm 光吸(xi)收增加速(su)率與(yu)S-AI 活(huo)性(xing)成(cheng)正(zheng)比(bi)。
組成:
產品(pin)名(ming)稱 | BN6011-50T/24S | Storage |
提(ti)取液(ye):液(ye)體 | 50ml | 4℃ |
試劑壹(yi):液(ye)體 | 50ml | 4℃ |
試劑二(er):粉(fen)劑 | 1 瓶(ping) | 4℃ |
試(shi)劑三(san):液(ye)體 | 30ml | 4℃ |
說(shuo)明書(shu) | 壹(yi)份(fen) | |
試劑二:粉(fen)劑(ji)×1 瓶(ping),4℃保(bao)存;臨用前加入(ru) 25ml 試劑(ji)壹(yi)充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)備(bei)用;用不完的試劑(ji) 4℃保存;
自(zi)備儀(yi)器和(he)用(yong)品:
可(ke)見(jian)分光光度計、臺式離心(xin)機、水浴(yu)鍋、移(yi)液(ye)器(qi)、1ml 玻(bo)璃比色皿、研缽、冰(bing)和(he)蒸(zheng)餾水。
粗(cu)酶液提(ti)取提(ti)取:
按(an)照組織質量(liang)(g):提(ti)取液(ye)體積(ml)為 1:5~10 的比例(li)(建議(yi)稱(cheng)取約 0.1g 組織,加入(ru) 1ml 提(ti)取液(ye)),進(jin)行冰(bing)浴(yu)勻漿(jiang)。12000g 4℃離心(xin) 10min,取上清(qing),置(zhi)冰(bing)上待(dai)測。
測定步(bu)驟(zhou)和(he)加(jia)樣表(biao):
試(shi)劑名稱(cheng)(μl) | 測定(ding)管(guan) | 對(dui)照管(guan) |
樣(yang)本(ben) | 200 | 200 |
試(shi)劑(ji)壹(yi) | 800 | |||
試(shi)劑(ji)二(er) | 800 |
混勻(yun), 37℃準(zhun)確水浴(yu) 30min 後,95℃水浴(yu) 10min(蓋(gai)緊,以(yi)防水分散(san)失),流(liu)水冷卻(que)後充(chong)分(fen)混勻(以(yi)保證濃(nong)度(du)不變)
試劑三 | 500 | 500 |
混勻(yun),95℃水浴(yu) 10min(蓋(gai)緊,以(yi)防止水分散(san)失),流(liu)水冷卻(que)後充(chong)分(fen)混勻, 510nm 處(chu),蒸(zheng)餾(liu)水調零(ling),記(ji)錄各管(guan)吸(xi)光值 A,如(ru)果(guo)吸(xi)光值大於(yu) 2,可(ke)以(yi)用蒸(zheng)餾水稀釋後測定(計算公(gong)式中(zhong)乘以(yi)相應(ying)稀釋倍數),ΔA=A 測(ce)定(ding)-A 對照
S-AI 活(huo)性(xing)計算:
標(biao)準(zhun)條件(jian)下測定(ding)的回歸(gui)方(fang)程(cheng)為(wei)y = 0.0016x -0.001;x 為(wei)標(biao)準(zhun)品濃(nong)度(du)(μg/ml),y 為吸(xi)光值。
按(an)蛋白(bai)濃(nong)度(du)計算:
單(dan)位(wei)的定義(yi):37℃每mg 蛋白每分(fen)鐘(zhong)產生 1μg 還(hai)原糖(tang)定(ding)義(yi)為壹(yi)個(ge)酶活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)。
S-AI 活(huo)性(xing)(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
按(an)鮮(xian)重計算:
單(dan)位(wei)的定義(yi):37℃每g 組織每分鐘(zhong)產生 1μg 還(hai)原糖(tang)定(ding)義(yi)為壹(yi)個(ge)酶活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)。
S-AI 活(huo)性(xing)(μg/min/g 鮮(xian)重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1:加(jia)入(ru)反(fan)應(ying)體系(xi)中(zhong)樣(yang)本(ben)體積,0.2ml;V2:加入(ru)提(ti)取液(ye)體積,1ml;T:反(fan)應(ying)時間,30min; Cpr:樣本(ben)蛋白質濃(nong)度(du),mg/ml;W:樣本(ben)鮮(xian)重,g。
可(ke)溶(rong)性(xing)酸(suan)性(xing)轉(zhuan)化酶 蔗糖(tang)