AI 的最(zui)適(shi)pH 為(wei) 3～5。AI 分為可溶性(xing)AI(S-AI)和細(xi)胞壁不溶性(xing) AI（B-AI）兩種(zhong)類型(xing)。B-AI 存在(zai)於(yu)細(xi)胞間(jian)隙(xi)並結(jie)合(he)在(zai)細(xi)胞壁上，主要參與(yu)韌(ren)皮部質(zhi)外(wai)體卸載時(shi)蔗(zhe)糖的分解(jie)，以(yi)維持庫源(yuan)之(zhi)間(jian)蔗(zhe)糖(tang)的(de)濃度(du)。
細(xi)胞壁不溶性(xing)酸性(xing)轉(zhuan)化(hua)酶試(shi)劑盒(he) 蔗(zhe)糖

細(xi)胞壁不溶性(xing)酸性(xing)轉(zhuan)化(hua)酶（cell-wall binding acid invertase, B-AI）試(shi)劑盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

分光光度(du)法(fa) 50 管/24 樣

細(xi)胞壁不溶性(xing)酸性(xing)轉(zhuan)化(hua)酶試(shi)劑盒(he) 蔗(zhe)糖

正式測定前(qian)務(wu)必取(qu) 2-3 個預期差異(yi)較(jiao)大(da)的樣(yang)本(ben)做預(yu)測(ce)定測(ce)定意(yi)義(yi)：

蔗糖轉化酶（Invertase，Ivr）催化蔗(zhe)糖不可逆地分解(jie)為(wei)果(guo)糖(tang)和葡(pu)萄糖(tang)，是(shi)高(gao)等植物(wu)蔗糖(tang)代謝(xie)關(guan)鍵酶之壹(yi)。根(gen)據最(zui)適(shi) pH，Ivr 分為酸性(xing)轉(zhuan)化(hua)酶（AI）和中性(xing)轉(zhuan)化(hua)酶（NI）兩種(zhong)類型(xing)。

AI 的最適(shi)pH 為 3～5。AI 分為可溶性(xing)AI(S-AI)和細(xi)胞壁不溶性(xing) AI（B-AI）兩種(zhong)類型(xing)。B-AI 存在(zai)於(yu)細(xi)胞間(jian)隙(xi)並結(jie)合(he)在(zai)細(xi)胞壁上，主要參與(yu)韌(ren)皮部質(zhi)外(wai)體卸載時(shi)蔗(zhe)糖的分解(jie)，以(yi)維持庫源(yuan)之(zhi)間(jian)蔗(zhe)糖(tang)的(de)濃度(du)。

測定原(yuan)理：

B-AI 催化蔗(zhe)糖降(jiang)解(jie)產(chan)生還(hai)原(yuan)糖(tang)，進(jin)壹(yi)步與(yu) 3,5－二硝基水(shui)楊(yang)酸反應(ying)，生(sheng)成棕紅(hong)色氨(an)基化(hua)合(he)物(wu)，在(zai) 510nm有特(te)征光(guang)吸(xi)收，在(zai)壹定(ding)範圍(wei)內 510nm 光吸收增加速(su)率與(yu)B-AI 活性(xing)成正比(bi)。

組成：

試(shi)劑二：粉(fen)劑×1 瓶，4℃保(bao)存；臨(lin)用(yong)前(qian)加(jia)入 25ml 試(shi)劑壹充(chong)分溶解(jie)備(bei)用(yong)；用(yong)不(bu)完(wan)的試(shi)劑 4℃保存;

自備(bei)儀器(qi)和用品(pin)：

可見分光光度(du)計(ji)、臺(tai)式(shi)離(li)心(xin)機、水浴鍋(guo)、移液(ye)器、1ml 玻(bo)璃(li)比(bi)色皿、研(yan)缽(bo)、冰和蒸餾(liu)水(shui)。

粗酶液(ye)提(ti)取(qu)：

按(an)照組(zu)織(zhi)質(zhi)量（g）：提(ti)取(qu)液(ye) 1 體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建議(yi)稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織，加入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye) 1），進(jin)行(xing)冰(bing)浴勻漿(jiang)。12000g 4℃離(li)心(xin) 10min，棄上清，沈(chen)澱中加(jia)入 1ml 蒸餾水，充(chong)分震(zhen)蕩混(hun)勻，12000g 4℃離 心(xin) 10min，棄上清，沈(chen)澱中加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye) 2 充(chong)分混勻，4℃浸提(ti)過夜(ye)，12000g 4℃離心(xin) 20min，取(qu)上(shang)清(qing)置冰(bing)上(shang)待測。

測定步驟和加樣(yang)表(biao)：

混勻， 37℃準確(que)水浴 30min 後(hou)，95℃水(shui)浴 10min（蓋(gai)緊(jin)，以防水(shui)分散失），流水(shui)冷卻(que)後(hou)充(chong)分混勻（以保(bao)證(zheng)濃(nong)度(du)不(bu)變(bian)）

混勻，95℃水浴 10min（蓋(gai)緊(jin)，以防止水分散失），流水(shui)冷卻(que)後(hou)充(chong)分混勻， 510nm 處(chu)，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調(tiao)零(ling)，記錄各(ge)管(guan)吸光(guang)值 A，如(ru)果(guo)吸(xi)光值(zhi)大(da)於(yu) 2，可以(yi)用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)稀釋(shi)後(hou)測(ce)定(ding)(計(ji)算公(gong)式(shi)中乘(cheng)以(yi)相應(ying)稀釋(shi)倍(bei)數)，ΔA=A 測定-A 對(dui)照。

B-AI 活性(xing)計(ji)算：

標準條(tiao)件(jian)下(xia)測(ce)定(ding)的回歸方(fang)程(cheng)為(wei)y = 0.0016x -0.001；x 為(wei)標準品(pin)濃度(du)（μg/ml），y 為(wei)吸光值。

按(an)蛋白(bai)濃度(du)計(ji)算：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：37℃每(mei)mg 蛋(dan)白(bai)每(mei)分鐘產生 1μg 還(hai)原(yuan)糖(tang)定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活性(xing)單(dan)位(wei)。

B-AI 活性(xing)（μg/min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

按(an)鮮重(zhong)計(ji)算：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：37℃每(mei)g 組(zu)織(zhi)每(mei)分鐘產生 1μg 還(hai)原(yuan)糖(tang)定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活性(xing)單(dan)位(wei)。

B-AI 活性(xing)（μg/min/g 鮮重(zhong)）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =20.8×(ΔA +0.001) ÷W

V1：加入反應(ying)體(ti)系(xi)中樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.2ml；V2：加(jia)入提(ti)取(qu)液(ye)體積(ji)，1ml；T：反應(ying)時(shi)間(jian)，30min； Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本鮮重(zhong)，g。

細(xi)胞壁不溶性(xing)酸性(xing)轉(zhuan)化(hua)酶試(shi)劑盒(he) 蔗(zhe)糖