C1（EC3.2.1.91）存在於(yu)細(xi)菌、真(zhen)菌(jun)和(he)動物(wu)體內(nei)，是(shi)纖維(wei)素酶(mei)系(xi)的(de)組份(fen)之(zhi)壹(yi)，C1 催化多(duo)聚(ju)糖(tang)鏈(lian)的(de)末(mo)端(duan)非(fei)還原(yuan)端(duan)釋(shi)放(fang)出(chu)纖(xian)維(wei)二糖(tang)和(he)葡萄(tao)糖。
土壤(rang)外(wai)切(qie)葡聚糖(tang)酶(mei)/纖(xian)維(wei)二糖(tang)苷(gan)酶(mei)活(huo)性(xing)試(shi)劑盒

土壤(rang)外(wai)切(qie)-β-1，4-葡聚糖(tang)酶(mei)/纖(xian)維(wei)二糖(tang)苷(gan)酶(mei)（S-C1）活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒說(shuo)明(ming)書

微(wei)量(liang)法(fa) 100 管(guan)/48 樣

土壤(rang)外(wai)切(qie)葡聚糖(tang)酶(mei)/纖(xian)維(wei)二糖(tang)苷(gan)酶(mei)活(huo)性(xing)試(shi)劑盒

正(zheng)式測定(ding)前(qian)務必取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期差異(yi)較大(da)的(de)樣本做(zuo)預(yu)測定(ding)測定(ding)意義(yi)：

C1（EC3.2.1.91）存在於(yu)細(xi)菌、真(zhen)菌(jun)和(he)動物(wu)體內(nei)，是(shi)纖維(wei)素酶(mei)系(xi)的(de)組份(fen)之(zhi)壹(yi)，C1 催化多(duo)聚(ju)糖(tang)鏈(lian)的(de)末(mo)端(duan)非(fei)還原(yuan)端(duan)釋(shi)放(fang)出(chu)纖(xian)維(wei)二糖(tang)和(he)葡萄(tao)糖。

測定(ding)原(yuan)理：

采(cai)用(yong) 3,5－二硝(xiao)基水(shui)楊(yang)酸法測(ce)定(ding)S-C1 催化微(wei)晶(jing)纖(xian)維(wei)素降(jiang)解產(chan)生(sheng)的(de)還原(yuan)糖的(de)含量(liang)。

試劑的(de)組成(cheng)和(he)配(pei)制：

自備儀(yi)器(qi)和用(yong)品(pin)：

酶(mei)標儀(yi)/可見分光光度(du)計(ji)、水(shui)浴鍋、離心機(ji)、可調式移液(ye)器(qi)、96 孔(kong)板/微(wei)量(liang)石英(ying)比(bi)色(se)皿(min)、研(yan)缽、冰和(he)蒸餾水(shui)。

樣品(pin)測定(ding)的(de)準備：

稱取(qu)約 0.1g 新(xin)鮮土樣或(huo)風幹(gan)土樣，加入 1ml 提取(qu)液(ye)，進(jin)行(xing)冰浴勻(yun)漿(jiang)，室(shi)溫(wen)振蕩(dang)提取(qu) 30min，然(ran)後(hou) 10000g 4℃離心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待(dai)測(ce)。

測定(ding)步(bu)驟(zhou)：

1、分光光度(du)計(ji)或(huo)酶(mei)標儀(yi)預熱(re) 30min 以(yi)上，調節波長(chang)至(zhi) 540nm，蒸餾水(shui)調零。

2、加樣表（在EP 管(guan)中依(yi)次加(jia)入下(xia)列(lie)試劑(ji)）

混勻(yun)，37℃準確水(shui)浴 2h

混勻(yun)， 90℃水浴 10min（蓋緊(jin)，防(fang)止水分散(san)失），冷卻後(hou)，取(qu) 200μl 至(zhi)微(wei)量(liang)石英(ying)比(bi)色(se)皿(min)或(huo) 96 孔(kong)板中，測 540nm 下(xia)吸(xi)光值(zhi)A，計(ji)算(suan)ΔA=A 測定(ding)管(guan)-A 對(dui)照(zhao)管(guan)。每個(ge)測(ce)定(ding)管(guan)需(xu)設壹(yi)個(ge)對(dui)照(zhao)管(guan)。

S-C1 活性(xing)計(ji)算(suan)：

用微(wei)量(liang)石英(ying)比(bi)色(se)皿(min)測(ce)定(ding)的(de)計算(suan)公式如(ru)下(xia)

標準條件(jian)下(xia)測定(ding)回歸方程為(wei) y = 6.4078x - 0.0673；x 為(wei)標準品(pin)濃(nong)度（mg/ml），y 為(wei)吸(xi)光值(zhi)。單(dan)位的(de)定(ding)義(yi)：每g 土樣每分鐘催化產(chan)生(sheng) 1μg 葡(pu)萄(tao)糖定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位。

S-C1 活力(μg /min /g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反(fan)總(zong)]÷(W× V 樣÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系(xi)總(zong)體積(ji)，0.11ml； V 樣(yang)：加(jia)入樣本體積(ji)，0.01 ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提取(qu)液(ye)體積(ji)，1 ml；T：反(fan)應(ying)時間，120 min； W：樣本質(zhi)量(liang)，g；

用 96 孔(kong)板測(ce)定(ding)的(de)計算(suan)公式如(ru)下(xia)

標準條件(jian)下(xia)測定(ding)回歸方程為(wei) y = 3.2039x - 0.0673；x 為(wei)標準品(pin)濃(nong)度（mg/ml），y 為(wei)吸(xi)光值(zhi)。單(dan)位的(de)定(ding)義(yi)：每g 組(zu)織(zhi)每(mei)分鐘催化產(chan)生(sheng) 1μg 葡(pu)萄(tao)糖定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位。

S-C1 活力(μg /min /g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反(fan)總(zong)]÷(W× V 樣÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系(xi)總(zong)體積(ji)，0.11ml； V 樣(yang)：加(jia)入樣本體積(ji)，0.01 ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提取(qu)液(ye)體積(ji)，1 ml；T：反(fan)應(ying)時間，120 min； W：樣本質(zhi)量(liang)，g。

土壤(rang)外(wai)切(qie)葡聚糖(tang)酶(mei)/纖(xian)維(wei)二糖(tang)苷(gan)酶(mei)活(huo)性(xing)試(shi)劑盒