ACK 主要存(cun)在(zai)於(yu)微(wei)生(sheng)物(wu)中，催(cui)化(hua)乙酸和ATP 生(sheng)成(cheng)乙酰磷酸和 ADP，是(shi)細菌碳(tan)代(dai)謝(xie)和能(neng)量代(dai)謝(xie)的(de)關(guan)鍵(jian)酶(mei)，尤其(qi)是(shi)在古細菌甲(jia)烷(wan)合(he)成(cheng)代(dai)謝(xie)中起(qi)著(zhe)中樞(shu)作(zuo)用。
乙酸激(ji)酶(mei)試劑盒(he) 其(qi)他(ta)系列(lie)

乙(yi)酸(suan)激(ji)酶(mei)（acetate kinase，ACK）試劑盒(he)說明(ming)書(shu)

微(wei)量法 100 管(guan)/96 樣

乙(yi)酸(suan)激(ji)酶(mei)試劑盒(he) 其(qi)他(ta)系列(lie)

正(zheng)式測(ce)定前(qian)務必取 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差(cha)異較大的(de)樣本做預測(ce)定測(ce)定意義(yi)：

ACK 主要存(cun)在(zai)於(yu)微(wei)生(sheng)物(wu)中，催(cui)化(hua)乙酸和ATP 生(sheng)成(cheng)乙酰磷酸和 ADP，是(shi)細菌碳(tan)代(dai)謝(xie)和能(neng)量代(dai)謝(xie)的(de)關(guan)鍵(jian)酶(mei)，尤其(qi)是(shi)在古細菌甲(jia)烷(wan)合(he)成(cheng)代(dai)謝(xie)中起(qi)著(zhe)中樞(shu)作(zuo)用。

測(ce)定原理：

（1）ACK 催(cui)化(hua)乙酸鈉(na)和ATP 生(sheng)成(cheng)乙酰磷酸和ADP，（2）丙(bing)tong酸(suan)激(ji)酶(mei)催(cui)化(hua) ADP 和PEP 生(sheng)成(cheng)ATP 和丙(bing)酮(tong)酸，（3）乳酸tuo氫酶(mei)催(cui)化(hua)丙(bing)酮(tong)酸和 NADH 生(sheng)成(cheng)乳酸和NAD⁺，（4）在(zai) 340nm 下測(ce)定NADH 氧化(hua)生成(cheng)NAD⁺速率(lv)，即可反映(ying)ACK 活性。

試劑組成和配(pei)制：

需自備的(de)儀器(qi)和用品：

紫(zi)外(wai)分光光(guang)度計(ji)/酶(mei)標(biao)儀、臺(tai)式離心(xin)機、水(shui)浴(yu)鍋、可調式移(yi)液(ye)器、微(wei)量石英比(bi)色(se)皿(min)/96 孔(kong)板、研缽、冰(bing)和蒸(zheng)餾水

樣本的(de)前(qian)處(chu)理：

1、細菌或(huo)培養(yang)細胞(bao)：

先(xian)收(shou)集(ji)細菌或(huo)細胞(bao)到(dao)離心(xin)管(guan)內，離心(xin)後(hou)棄上(shang)清；按照(zhao)細菌或(huo)細胞(bao)數(shu)量（104 個）：提(ti)取液(ye)體積（ml）為 500~1000：1 的(de)比(bi)例（建議 500 萬(wan)細菌或(huo)細胞(bao)加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取液(ye)），超聲波破碎(sui)細菌或(huo)細胞(bao)（冰(bing)浴(yu)，功率(lv) 20％或(huo) 200W，超聲 3s，間(jian)隔 10s，重(zhong)復 30 次）；15000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。

2、組織：按照(zhao)組織質(zhi)量（g）：提(ti)取液(ye)體積(ml)為 1：5~10 的(de)比(bi)例（建議稱(cheng)取約 0.1g 組織，加(jia)入(ru) 1ml提(ti)取液(ye)），進行(xing)冰(bing)浴(yu)勻漿。15000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。

測(ce)定步驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光度計(ji)或(huo)酶(mei)標(biao)儀預(yu)熱 30min 以(yi)上(shang)，調節(jie)波長至 340nm，蒸餾水調零(ling)。

2、樣本測(ce)定

工(gong)作(zuo)液(ye)的(de)配(pei)置(zhi)：臨用前(qian)取(qu)試劑二(er)壹瓶(ping)，加(jia)入(ru) 10ml 試劑壹和 200μl 試劑三(san)，充分(fen)混合(he)溶(rong)解(jie)，置(zhi)於37℃（哺乳動物(wu)）或(huo) 25℃（其它物(wu)種(zhong)）水(shui)浴(yu) 5min；現(xian)配現用；

在(zai)微(wei)量石英比(bi)色(se)皿(min)或(huo) 96 孔板(ban)中加(jia)入(ru) 20μl 樣本和 180μl 工(gong)作(zuo)液(ye)，混勻，立(li)即記錄(lu) 340nm 處 20s

時(shi)的(de)吸(xi)光(guang)值(zhi)A1 和 3min20s。

ACK 活性計(ji)算(suan)：

用微(wei)量石英比(bi)色(se)皿(min)測(ce)定的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式如下：

按樣本蛋(dan)白濃(nong)度計(ji)算(suan)：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每(mei)mg 組織蛋(dan)白每分(fen)鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為(wei)壹個酶(mei)活力(li)單位(wei)。

ACK（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=536×ΔA÷Cpr

按樣本鮮(xian)重(zhong)計(ji)算(suan)：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每(mei)g 組織每分鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為(wei)壹個酶(mei)活力(li)單位(wei)。

ACK（nmol/min /g 鮮(xian)重(zhong)）= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=536×ΔA÷W

按細菌或(huo)細胞(bao)密(mi)度計(ji)算(suan)：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每(mei) 1 萬(wan)個(ge)細菌或(huo)細胞(bao)每(mei)分(fen)鐘消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為(wei)壹個酶(mei)活力(li)單位(wei)。

ACK（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=1.072×ΔA

V 反總：反應體(ti)系總體積，2×10-4 L；ε：NADH 摩(mo)爾(er)消(xiao)光系數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比(bi)色(se)皿(min)光(guang)徑(jing)，1cm；V 樣：加(jia)入(ru)樣本體積，0.02 ml；V 樣總：加(jia)入(ru)提(ti)取液(ye)體積，1 ml；T：反應時(shi)間(jian)，3 min；Cpr：樣本蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度，mg/ml；W：樣本質(zhi)量，g；500：細菌或(huo)細胞(bao)總數(shu)，500 萬(wan)。

用 96 孔板測(ce)定的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式如下

按樣本蛋(dan)白濃(nong)度計(ji)算(suan)：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每(mei)mg 組織蛋(dan)白每分(fen)鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為(wei)壹個酶(mei)活力(li)單位(wei)。

ACK（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr

按樣本鮮(xian)重(zhong)計(ji)算(suan)：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每(mei)g 組織每分鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為(wei)壹個酶(mei)活力(li)單位(wei)。

ACK（nmol/min /g 鮮(xian)重(zhong)）= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W

按細菌或(huo)細胞(bao)密(mi)度計(ji)算(suan)：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每(mei) 1 萬(wan)個(ge)細菌或(huo)細胞(bao)每(mei)分(fen)鐘消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為(wei)壹個酶(mei)活力(li)單位(wei)。

ACK（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)      ÷T=2.144×ΔA

V 反總：反應體(ti)系總體積，2×10-4 L；ε：NADH 摩(mo)爾(er)消(xiao)光系數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔(kong)板(ban)光(guang)徑(jing)，0.5cm；V 樣：加(jia)入(ru)樣本體積，0.02 ml；V 樣總：加(jia)入(ru)提(ti)取液(ye)體積，1 ml；T：反應時(shi)間(jian)，3 min；Cpr：樣本蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度，mg/ml；W：樣本質(zhi)量，g；500：細菌或(huo)細胞(bao)總數(shu)，500 萬(wan)。

乙(yi)酸(suan)激(ji)酶(mei)試劑盒(he) 其(qi)他(ta)系列(lie)