ICL（EC4.1.3.1）主要(yao)存(cun)在(zai)於植(zhi)物和微生(sheng)物中(zhong)，油(you)料(liao)作(zuo)物種子(zi)在萌發(fa)過程中，通過乙醛酸(suan)循(xun)環及其(qi)他過(guo)程(cheng)將脂肪轉(zhuan)變(bian)成碳(tan)水(shui)化合(he)物。ICL 是(shi)乙(yi)醛酸(suan)循(xun)環的(de)關(guan)鍵酶(mei)之壹(yi)。
異檸檬(meng)酸裂(lie)解酶(mei)試(shi)劑(ji)盒(he) 其(qi)他系(xi)列(lie)

異檸檬(meng)酸裂(lie)解酶(mei)（isocitrate lyase，ICL）試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明書(shu)

微量法 100 管/96 樣(yang)

異檸檬(meng)酸裂(lie)解酶(mei)試(shi)劑(ji)盒(he) 其(qi)他系(xi)列(lie)

正式(shi)測定(ding)前(qian)務必(bi)取 2-3 個預(yu)期(qi)差異較大(da)的(de)樣(yang)本(ben)做預測定(ding)測(ce)定意(yi)義：

ICL（EC4.1.3.1）主要(yao)存(cun)在(zai)於植(zhi)物和微生(sheng)物中(zhong)，油(you)料(liao)作(zuo)物種子(zi)在萌發(fa)過程中，通過乙醛酸(suan)循(xun)環及其(qi)他過(guo)程(cheng)將脂肪轉(zhuan)變(bian)成碳(tan)水(shui)化合(he)物。ICL 是乙(yi)醛酸(suan)循(xun)環的(de)關(guan)鍵酶(mei)之壹(yi)。

測定(ding)原理(li)：

ICL 催(cui)化異檸檬(meng)酸降(jiang)解為乙(yi)醛酸(suan)和琥珀(po)酸，乙(yi)醛酸(suan)和 NADH 在LDH 的(de)作用(yong)下(xia)生(sheng)成(cheng)乙醇和NAD，NADH在 340nm 下(xia)有特(te)征(zheng)吸(xi)收(shou)峰(feng)，監(jian)測 340nm 吸光(guang)度的(de)減小(xiao)速率(lv)可間(jian)接反(fan)應(ying)ICL 活性(xing)。

試(shi)劑(ji)組成(cheng)和配(pei)制(zhi)：

需自(zi)備(bei)的(de)儀(yi)器(qi)和用品：

紫外(wai)分光(guang)光(guang)度計(ji)/酶(mei)標(biao)儀(yi)、臺式(shi)離(li)心機(ji)、水(shui)浴鍋(guo)、移液器(qi)、微量石(shi)英比(bi)色(se)皿(min)/96 孔板、研(yan)缽(bo)、冰(bing)和蒸餾水(shui)

樣(yang)本(ben)的(de)前(qian)處(chu)理(li)：

1、細(xi)菌或培(pei)養(yang)細(xi)胞：

先(xian)收集(ji)細(xi)菌或細(xi)胞到(dao)離(li)心管內(nei)，離(li)心後(hou)棄上清；按照(zhao)細(xi)菌或細(xi)胞數(shu)量（104 個）：提取(qu)液體(ti)積(ji)（ml）為 500~1000：1 的(de)比例（建議 500 萬細(xi)菌或細(xi)胞加(jia)入 1ml 提取(qu)液），超聲波(bo)破碎(sui)細(xi)菌或細(xi)胞（冰(bing)浴，功率(lv) 20％或 200W，超聲 3s，間(jian)隔(ge) 10s，重復 30 次）；15000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清，置(zhi)冰(bing)上待(dai)測。

2、組織(zhi)：

按照(zhao)組織(zhi)質量（g）：提取(qu)液體(ti)積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比例（建議稱取約 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入 1ml 提取(qu)液），進(jin)行冰(bing)浴勻漿。15000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清，置(zhi)冰(bing)上待(dai)測。

測定(ding)步驟(zhou)：

1、分光(guang)光(guang)度計(ji)或酶(mei)標(biao)儀(yi)預(yu)熱 30min 以(yi)上，調(tiao)節(jie)波長(chang)至(zhi) 340nm，蒸餾水(shui)調(tiao)零。

2、樣(yang)本(ben)測定

工作液的(de)配(pei)置(zhi)，將試(shi)劑(ji)二和試(shi)劑(ji)三(san)轉(zhuan)移至(zhi)試(shi)劑(ji)壹(yi)中(zhong)，充(chong)分混(hun)合(he)溶解，置(zhi)於 37℃（哺乳(ru)動(dong)物）或(huo) 25℃（其(qi)它(ta)物種）水(shui)浴 5min；用不(bu)完(wan)的(de)試(shi)劑(ji)分裝(zhuang)後-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反(fan)復凍(dong)融；

在試(shi)劑(ji)四中加(jia)入 4ml 蒸餾水(shui)，充(chong)分溶解待用；用不(bu)完(wan)的(de)試(shi)劑(ji)分裝(zhuang)後-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反(fan)復凍(dong)融；

在微量石(shi)英比(bi)色(se)皿(min)或 96 孔板中(zhong)加(jia)入 10μl 樣(yang)本(ben)、150μl 工作液和 40μl 試(shi)劑(ji)四，混勻(yun)，立即記(ji)錄(lu)340nm 處(chu) 20s 時(shi)的(de)吸光(guang)值A1 和 2min20s 後的(de)吸光(guang)值A2，計(ji)算ΔA=A1-A2。

ICL 活性(xing)計(ji)算：

用微量石(shi)英比(bi)色(se)皿(min)測定的(de)計(ji)算公式(shi)如下(xia)

按樣(yang)本(ben)蛋白濃度計(ji)算：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每mg 組織(zhi)蛋(dan)白中(zhong)每分鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

ICL（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮(xian)重計(ji)算：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每g 組織(zhi)每(mei)分鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

ICL（nmol/min/g 鮮(xian)重）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=1608×ΔA÷W

按細(xi)菌或細(xi)胞密(mi)度(du)計(ji)算：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每 1 萬(wan)個細(xi)菌或細(xi)胞每(mei)分鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

ICL（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=3.215×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)總(zong)體積(ji)，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾(er)消(xiao)光系(xi)數，6.22×103 L / mol /cm；d：比(bi)色(se)皿(min)光徑(jing)，1cm；V 樣(yang)：加(jia)入樣(yang)本(ben)體積，0.01 ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入提取(qu)液體(ti)積(ji)，1 ml；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，2 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白質濃度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量，g；500：細(xi)菌或細(xi)胞總(zong)數，500 萬(wan)。

用 96 孔(kong)板測(ce)定(ding)的(de)計(ji)算公式(shi)如下(xia)

按樣(yang)本(ben)蛋白濃度計(ji)算：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每mg 組織(zhi)蛋(dan)白中(zhong)每分鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

ICL（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮(xian)重計(ji)算：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每g 組織(zhi)每(mei)分鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

ICL（nmol/min/g 鮮(xian)重）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=3216×ΔA÷W

按細(xi)菌或細(xi)胞密(mi)度(du)計(ji)算：

單位(wei)的(de)定義(yi)：每 1 萬(wan)個細(xi)菌或細(xi)胞每(mei)分鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定義(yi)為壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

ICL（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=6.25×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)總(zong)體積(ji)，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾(er)消(xiao)光系(xi)數，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔(kong)板光(guang)徑(jing)，0.5cm；V 樣(yang)：加(jia)入樣(yang)本(ben)體積，0.01 ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入提取(qu)液體(ti)積(ji)，1 ml；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，2 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白質濃度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量，g；500：細(xi)菌或細(xi)胞總(zong)數，500 萬(wan)。

異檸檬(meng)酸裂(lie)解酶(mei)試(shi)劑(ji)盒(he) 其(qi)他系(xi)列(lie)