C4H 催(cui)化肉(rou)桂酸和(he)NADP 生成 4-香豆酸(suan)鹽(yan)和(he)NADPH，在(zai) 340nm 下(xia)測定(ding)NADPH 生(sheng)成速率(lv)，即(ji)可反映(ying)C4H 活(huo)性(xing)。
肉桂酸-4-羥(qiang)化酶試(shi)劑盒(he) 其他(ta)系(xi)列(lie)

肉(rou)桂酸-4-羥(qiang)化酶（ Cinnamic acid-4-hydroxylase，C4H)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書(shu)

微(wei)量法 100 管(guan)/96 樣(yang)

肉(rou)桂酸-4-羥(qiang)化酶試(shi)劑盒(he) 其他(ta)系(xi)列(lie)

正式測(ce)定前(qian)務必(bi)取 2-3 個(ge)預期差(cha)異(yi)較大(da)的樣(yang)本(ben)做(zuo)預測定(ding)測定(ding)意(yi)義(yi)：

C4H 又稱(cheng)反式(shi)肉(rou)桂酸-4-單(dan)氧化酶，多存在(zai)於(yu)高(gao)等(deng)植(zhi)物、酵母、菌(jun)類(lei)中，該(gai)酶催(cui)化肉(rou)桂酸羥(qiang)化作用(yong)產(chan)生(sheng)4-香豆酸(suan)鹽(yan)，是(shi)苯bing烷途(tu)徑中繼L-苯bing氨(an)酸(suan)解(jie)氨(an)酶之(zhi)後(hou)的第(di)二個(ge)關(guan)鍵酶。

測(ce)定(ding)原(yuan)理(li)：

C4H 催(cui)化肉(rou)桂酸和(he)NADP 生(sheng)成 4-香豆酸(suan)鹽(yan)和(he)NADPH，在(zai) 340nm 下(xia)測定(ding)NADPH 生(sheng)成速率(lv)，即(ji)可反映(ying)C4H 活(huo)性(xing)。

試(shi)劑的組(zu)成和配制(zhi)：

需(xu)自(zi)備(bei)的儀器(qi)和(he)用品：

紫外分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標儀(yi)、臺式離(li)心機、可(ke)調式(shi)移液器(qi)、微(wei)量石(shi)英比色皿/96 孔(kong)板、研缽、冰和(he)蒸(zheng)餾水。

粗(cu)酶液(ye)提(ti)取：

細(xi)菌(jun)或(huo)培養(yang)細(xi)胞(bao)：

先(xian)收集細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)到離(li)心管(guan)內(nei)，離(li)心後(hou)棄上清；按照(zhao)細(xi)菌或(huo)細胞數量（104 個(ge)）：提取液(ye)體(ti)積（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例(li)（建議(yi) 500 萬(wan)細(xi)菌或細(xi)胞(bao)加(jia)入(ru) 1ml 提取(qu)液），超聲(sheng)波(bo)破(po)碎細菌(jun)或(huo)細胞(bao)（冰(bing)浴，功率(lv) 20％或 200W，超聲(sheng) 3s，間(jian)隔(ge) 10s，重(zhong)復 30 次）；8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清，置(zhi)冰上待(dai)測。

組(zu)織(zhi)：

按照(zhao)組(zu)織(zhi)質(zhi)量（g）：提取液體積(ml)為(wei) 1：5~10 的比例(li)（建議(yi)稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml 提取(qu)液），進行(xing)冰(bing)浴勻(yun)漿(jiang)。8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清，置(zhi)冰上待(dai)測。

測(ce)定(ding)步(bu)驟：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)或(huo)酶標儀(yi)預熱 30min 以上，調節(jie)波長(chang)至 340nm，蒸(zheng)餾水調(tiao)零。

2、樣(yang)本(ben)測(ce)定(ding)

取(qu)試(shi)劑二壹瓶，加(jia)入(ru) 10ml 試(shi)劑壹充分(fen)溶解(jie)混(hun)勻，置(zhi)於(yu) 37℃（哺(bu)乳動(dong)物）或 25℃（其它物種(zhong)）水浴(yu) 5min；現配現用（配好(hao)後(hou) 24h 內(nei)用(yong)完(wan)）；

在(zai)微(wei)量石(shi)英比色皿或(huo) 96 孔(kong)板中(zhong)加(jia)入(ru) 10μl 樣(yang)本(ben)和(he) 190μl 試(shi)劑二，混(hun)勻，立(li)即(ji)記(ji)錄(lu) 340nm 處初始(shi)吸光(guang)值(zhi)A1 和 5min 後(hou)的吸光(guang)值(zhi)A2，計(ji)算(suan)ΔA=A2-A1。

C4H 活(huo)性(xing)計(ji)算(suan)：

用(yong)微(wei)量石(shi)英比色皿測(ce)定的計(ji)算(suan)公式(shi)如(ru)下(xia)

按樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)濃度計(ji)算(suan)：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每mg 組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)每分(fen)鐘產(chan)生(sheng) 1 nmol 的NADPH 定義(yi)為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位(wei)。

C4H（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮(xian)重(zhong)計(ji)算(suan)：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每g 組(zu)織(zhi)每分(fen)鐘產(chan)生(sheng) 1 nmol NADPH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位(wei)。

C4H（nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=643×ΔA÷W

按細(xi)菌(jun)或細(xi)胞密(mi)度計(ji)算(suan)：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每 1 萬個(ge)細菌或(huo)細(xi)胞每分(fen)鐘產(chan)生(sheng) 1 nmol NADPH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位(wei)。

C4H（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=1.286×ΔA

V 反總(zong)：反應(ying)體(ti)系總(zong)體積，2×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系(xi)數，6.22×103 L / mol /cm；d：比(bi)色皿光(guang)徑，1cm；V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本(ben)體(ti)積(ji)，0.01 ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提取(qu)液體積(ji)，1 ml；T：反應(ying)時(shi)間，5 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量，g；500：細菌或細胞總(zong)數(shu)，500 萬(wan)。

用(yong) 96 孔(kong)板測(ce)定(ding)的計(ji)算(suan)公式(shi)如(ru)下(xia)

按樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)濃度計(ji)算(suan)：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每mg 組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)每分(fen)鐘產(chan)生(sheng) 1 nmol 的NADPH 定義(yi)為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位(wei)。

C4H（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮(xian)重(zhong)計(ji)算(suan)：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每g 組(zu)織(zhi)每分(fen)鐘產(chan)生(sheng) 1 nmol NADPH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位(wei)。

C4H（nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=1286×ΔA÷W

按細(xi)菌(jun)或細(xi)胞密(mi)度計(ji)算(suan)：

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每 1 萬個(ge)細菌或(huo)細(xi)胞每分(fen)鐘產(chan)生(sheng) 1 nmol NADPH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位(wei)。

C4H（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T=2.572×ΔA

V 反總(zong)：反應(ying)體(ti)系總(zong)體積，2×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系(xi)數，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔(kong)板光(guang)徑(jing)，0.5cm；V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本(ben)體(ti)積(ji)，0.01 ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提取(qu)液體積(ji)，1 ml；T：反應(ying)時(shi)間，5 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量，g；500：細菌或細胞總(zong)數(shu)，500 萬(wan)。

肉(rou)桂酸-4-羥(qiang)化酶試(shi)劑盒(he) 其他(ta)系(xi)列(lie)