高鐵還(hai)原(yuan)酶（ferric-chelate reductase, FCR）催化高價鐵(tie)螯合(he)物中的(de)Fe3+還(hai)原(yuan)為(wei)Fe2+，在(zai)部(bu)分物種(zhong)鐵元素的(de)吸(xi)收中有(you)重要(yao)作(zuo)用(yong)。
高鐵還(hai)原(yuan)酶試劑盒(he) 其(qi)他系列

高鐵還(hai)原(yuan)酶（ferric-chelate reductase, FCR）試劑盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

微量(liang)法(fa) 100 管/96 樣

高鐵還(hai)原(yuan)酶試劑盒(he) 其(qi)他系列

正(zheng)式(shi)測定前務必取 2-3 個(ge)預(yu)期差異(yi)較大的樣(yang)本(ben)做(zuo)預(yu)測定測定意(yi)義(yi)：

高鐵還(hai)原(yuan)酶（ferric-chelate reductase, FCR）催化高價鐵(tie)螯合(he)物中的(de)Fe3+還原為(wei)Fe2+，在(zai)部(bu)分物種(zhong)鐵元素的(de)吸(xi)收中有(you)重要(yao)作(zuo)用(yong)。

測定原(yuan)理(li)：

FCR 催化Fe³⁺還原為(wei)Fe²⁺，Fe²⁺和ferrozine 反(fan)應(ying)顯色，在(zai) 562nm 下(xia)有(you)特征吸(xi)光(guang)值(zhi)。

試劑組(zu)成(cheng)和(he)配(pei)制：

需自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用(yong)品(pin)：

可見分光光(guang)度(du)計/酶(mei)標(biao)儀(yi)、臺(tai)式(shi)離心(xin)機(ji)、可調式(shi)移(yi)液器(qi)、微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)/96 孔(kong)板(ban)、研(yan)缽、冰和(he)蒸餾(liu)水。

粗酶(mei)液提取：

按(an)照(zhao)組(zu)織(zhi)質量(liang)（g）：水（ml)為(wei) 1：5~10 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi)稱(cheng)取約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加入 1ml 蒸餾(liu)水），進行冰浴(yu)勻(yun)漿(jiang)。10000g 4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待測。

測定步驟(zhou)：

1、分光光度(du)計或(huo)酶(mei)標(biao)儀(yi)預(yu)熱(re) 30min 以(yi)上(shang)，調節波長(chang)至(zhi) 562nm，蒸餾(liu)水調零。

2、工作(zuo)液配(pei)制：將(jiang)試劑壹、二(er)、三以(yi) 1:1:1 的(de)比(bi)例(li)混合。臨用(yong)前配(pei)制，用(yong)多少(shao)配(pei)多(duo)少(shao)。

在(zai)微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)/96 孔(kong)板(ban)中，加入 50μl 樣(yang)本(ben)上(shang)清(qing)和 150μl 工作(zuo)液，混勻(yun)，記(ji)錄初(chu)始(shi)吸(xi)光(guang)值(zhi) A1 和(he) 30min後(hou)的吸(xi)光(guang)值(zhi)A2。ΔA=A2-A1。

FCR 活性計算(suan)：

用(yong)微量(liang)石(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)測定的(de)計算(suan)公(gong)式(shi)如下(xia)

標(biao)準曲線：y = 8.0014x + 0.0011，R2 = 0.9997；

按(an)樣(yang)本(ben)質量(liang)計算(suan)

單(dan)位定義(yi)：每(mei) g 樣本每(mei)分鐘產生(sheng) 1nmolFe2+-ferrozine 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位。

FCR（nmol/min/g 鮮(xian)重）=（△A-0.0011）÷ 8.0014×1000×V 標(biao)÷(V 樣(yang)÷V 樣總(zong)×W)÷T = 4.166×（△A-0.0011）÷W

按(an)樣(yang)本(ben)蛋白濃(nong)度(du)計算(suan)

單(dan)位定義(yi)：每(mei) mg 蛋白每(mei)分鐘產生(sheng) 1nmolFe2+-ferrozine 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位。

FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V 標(biao)÷(V 樣(yang)÷V 樣總(zong)×Cpr)÷T=4.166×（△A-0.0011）÷Cpr

V 樣總(zong)：加入提取液體(ti)積(ji)，1 ml；V 樣：反(fan)應(ying)中樣(yang)品(pin)體積(ji)，50μl；V 標(biao)：加入標(biao)準品(pin)體積(ji) ，50μl；T：反(fan)應(ying)時間(jian)，30min；W：樣品(pin)質量(liang)，g；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白濃(nong)度(du)，mg/ml；1000，μmol 到nmol 的轉(zhuan)換(huan)系(xi)數(shu)。

用(yong) 96 孔板(ban)測定的(de)計算(suan)公(gong)式(shi)如下(xia)

標(biao)準曲線：y = 4.0007x + 0.0011，R2 = 0.9997；y，吸(xi)光(guang)度按(an)樣(yang)本(ben)質量(liang)計算(suan)

單(dan)位定義(yi)：每(mei) g 樣本每(mei)分鐘產生(sheng) 1nmolFe2+-ferrozine 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位。

FCR（nmol/min/g 鮮(xian)重）=（△A-0.0011）÷4.0007×1000×V 標(biao)÷(V 樣(yang)÷V 樣總(zong)×W)÷T=8.331×（△A-0.0011）÷W

按(an)樣(yang)本(ben)蛋白濃(nong)度(du)計算(suan)

單(dan)位定義(yi)：每(mei) mg 蛋白每(mei)分鐘產生(sheng) 1nmolFe2+-ferrozine 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位。

FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷4.0007×1000×V 標(biao)÷(V 樣(yang)÷V 樣總(zong)×W)÷T =8.331×（△A-0.0011）÷Cpr

V 樣總(zong)：加入提取液體(ti)積(ji)，1 ml；V 樣：反(fan)應(ying)中樣(yang)品(pin)體積(ji)，50μl；V 標(biao)：加入標(biao)準品(pin)體積(ji) ，50μl；T：反(fan)應(ying)時間(jian)，30min；W：樣品(pin)質量(liang)，g；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白濃(nong)度(du)，mg/ml；1000，μmol 到nmol 的轉(zhuan)換(huan)系(xi)數(shu)。

高鐵還(hai)原(yuan)酶試劑盒(he) 其(qi)他系列