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| 品牌 | NobleRyder/諾博(bo)萊德 | 貨(huo)號(hao) | BP6016 |
|---|---|---|---|
| 規(gui)格(ge) | 100T/48S | 供(gong)貨(huo)周(zhou)期(qi) | 現貨(huo) |
| 主(zhu)要用途 | 具有(you)亞鐵(tie)氧(yang)化(hua)酶(mei)的活(huo)性(xing),參(can)與(yu)體內鐵(tie)代(dai)謝 | 應用領(ling)域 | 環保,化(hua)工(gong),生(sheng)物產(chan)業(ye),農林(lin)牧(mu)漁,制(zhi)藥(yao)/生(sheng)物制(zhi)藥(yao) |
亞(ya)鐵(tie)氧(yang)化(hua)酶(mei)（Hephaestin,HP）試劑盒說明(ming)書
微(wei)量法(fa) 100 管(guan)/48 樣
亞(ya)鐵(tie)氧(yang)化(hua)酶(mei)試劑盒 其他(ta)系列(lie)
正式(shi)測(ce)定前(qian)務(wu)必(bi)取 2-3 個(ge)預(yu)期差(cha)異(yi)較大(da)的樣本做預(yu)測(ce)定測(ce)定意(yi)義：
Hephaestin (HP)作(zuo)為銅(tong)藍(lan)蛋(dan)白(bai)的(de)同系(xi)物,是近(jin)年來(lai)發現的鐵(tie)轉運蛋(dan)白(bai)亞(ya)鐵(tie)氧(yang)化(hua)酶(mei)，HP 屬亞鐵(tie)氧(yang)化(hua)酶(mei)家族(zu)成員(yuan),具有(you)亞鐵(tie)氧(yang)化(hua)酶(mei)的活(huo)性(xing),參(can)與(yu)體內鐵(tie)代(dai)謝。HP 的(de)表(biao)達可受鐵(tie)、銅(tong)及(ji)鋅等金(jin)屬離子的(de)調節。HP 催化(hua)Fe2+氧(yang)化(hua)生(sheng)成(cheng)Fe3+，在(zai)介(jie)導(dao)鐵(tie)的(de)跨(kua)膜(mo)轉運中(zhong)有(you)重要(yao)作(zuo)用。
測(ce)定原(yuan)理：
HP 催化(hua)Fe2+氧(yang)化(hua)為Fe3+，Fe2+和(he)ferrozine 反(fan)應顯(xian)色，在(zai) 560 nm 下有(you)特征吸光值。通(tong)過(guo)測(ce)定 Fe2+的(de)減少(shao)速(su)率可測(ce)得亞(ya)鐵(tie)氧(yang)化(hua)酶(mei)的活(huo)性(xing)。
試(shi)劑組成(cheng)和(he)配(pei)制(zhi)：
產(chan)品名稱 | BP6016-100T/48S | Storage |
試(shi)劑壹：液體 | 60ml | 4℃ |
試(shi)劑二(er)：液體 | 1.5ml | 4℃ |
試(shi)劑三：液體 | 11ml | 4℃避(bi)光 |
說(shuo)明(ming)書 | 壹(yi)份(fen) | |
需(xu)自(zi)備(bei)儀器(qi)和(he)用(yong)品：
酶(mei)標(biao)儀(yi)、臺(tai)式(shi)離心機(ji)、可調式(shi)移(yi)液器(qi)、96 孔板、研缽(bo)、冰(bing)和(he)蒸(zheng)餾水。
粗(cu)酶(mei)液提取(qu)：
按(an)照(zhao)組織(zhi)質量（g）：水（ml)為 1：5~10 的(de)比(bi)例（建(jian)議稱取約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加入 1ml 蒸(zheng)餾(liu)水），進(jin)行(xing)冰(bing)浴勻漿(jiang)。10000g 4℃離心 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰(bing)上待(dai)測(ce)。
測(ce)定步(bu)驟：
1、分(fen)光光度(du)計(ji)預(yu)熱 30min 以上，調節波(bo)長至(zhi) 560nm，蒸餾(liu)水調零。
2、在(zai) 96 孔板中(zhong)加(jia)入下(xia)列(lie)試劑
試(shi)劑名稱(cheng)（μl） | 測(ce)定管(guan) | 對照(zhao)管 | ||||||
試(shi)劑壹 | 50 | 50 | ||||||
試(shi)劑二(er) | 10 | 10 | ||||||
樣本 | 10 | 10 | ||||||
蒸(zheng)餾(liu)水 | 30 | 30 | ||||||
試(shi)劑三 | 混(hun)勻(yun)，40℃靜(jing)置(zhi) 30 min | 100 | ||||||
試(shi)劑三 | 100 | |||||||
混(hun)勻(yun)，立(li)即(ji)測(ce)定 A 對照(zhao)和(he)A 測(ce)定，ΔA=A 對照(zhao)-A 測(ce)定。(每個測(ce)定管(guan)需設壹(yi)個(ge)對照(zhao)管)
HP 活(huo)性(xing)計(ji)算(suan):
標(biao)準(zhun)曲線(xian)：y = 8.2135x - 0.0006，R2 = 0.9998；(x 為標(biao)準(zhun)品濃度(du)，μmol/ml；y 為吸光值ΔA)
按(an)樣本質(zhi)量計(ji)算(suan)
單(dan)位(wei)定(ding)義：每 g 樣本每分(fen)鐘氧(yang)化(hua) 1nmol Fe2+定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。
HP（nmol/min/g 鮮(xian)重）=（△A+0.0006）÷ 8.2135×V 總(zong)÷T ÷(W× V 樣÷V 樣總)× 1000= 40.58×
（△A+0.0006）÷W
按(an)樣本蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)
單(dan)位(wei)定(ding)義：每 mg 蛋白(bai)每分(fen)鐘氧(yang)化(hua) 1nmol Fe2+定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。
HP（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0006）÷ 8.2135×V 總(zong)÷T ÷（Cpr×V 樣） = 40.58×（△A+0.0006）
÷Cpr
V 總(zong)：反(fan)應體系(xi)體積(ji)，0.1 ml；V 樣：加入樣本體積(ji) 0.01 ml；V 樣總：加(jia)入提取(qu)液體積(ji)，1 ml；T：反(fan)應時間(jian)，30min；W：樣品質量，g；Cpr：樣本蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)，mg/ml；1000，μmol 到(dao)nmol 的(de)轉換系(xi)數。
亞(ya)鐵(tie)氧(yang)化(hua)酶(mei)試劑盒 其他(ta)系列(lie)