MAO(EC1.4.3.4) 主(zhu)要存在於(yu)脊(ji)椎(zhui)動物(wu)的各種(zhong)器(qi)官，特別是(shi)分(fen)泌(mi)腺、腦(nao)、肝(gan)臟(zang)，在無(wu)脊(ji)椎(zhui)動物(wu)、豆類的芽等植物(wu)中也存在催(cui)化單胺類物(wu)質(zhi)代(dai)謝(xie)，含(han)量較低(di)，具有(you)重要(yao)的生(sheng)理(li)功(gong)能，其活性能反映肝(gan)纖維(wei)化的程(cheng)度。此(ci)外(wai)，MAO 活性異(yi)常導(dao)致細胞(bao)內(nei)單胺類神(shen)經(jing)遞(di)質(zhi)運(yun)轉出現(xian)紊(wen)亂(luan)，從(cong)而引發(fa)多(duo)種(zhong)病癥。
單胺氧化酶試劑盒 其他(ta)系(xi)列(lie)

單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）試(shi)劑盒說(shuo)明書(shu)

微量法 100T/96S

單胺氧化酶試劑盒 其他(ta)系(xi)列(lie)

正(zheng)式(shi)測(ce)定前務必取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差(cha)異(yi)較大的樣本做(zuo)預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義：

MAO(EC1.4.3.4) 主(zhu)要(yao)存在於(yu)脊(ji)椎(zhui)動物(wu)的各種(zhong)器(qi)官，特別是(shi)分(fen)泌(mi)腺、腦(nao)、肝(gan)臟(zang)，在無(wu)脊(ji)椎(zhui)動物(wu)、豆類的芽等植物(wu)中也存在催(cui)化單胺類物(wu)質(zhi)代(dai)謝(xie)，含(han)量較低(di)，具有(you)重要(yao)的生(sheng)理(li)功(gong)能，其活性能反映肝(gan)纖維(wei)化的程(cheng)度。此(ci)外(wai)，MAO 活性異(yi)常導(dao)致細胞(bao)內(nei)單胺類神(shen)經(jing)遞(di)質(zhi)運(yun)轉出現(xian)紊(wen)亂(luan)，從(cong)而引發(fa)多(duo)種(zhong)病癥。

測(ce)定(ding)原(yuan)理：

MAO 催(cui)化單胺類底(di)物(wu)脫氨(an)生(sheng)成(cheng)相(xiang)應(ying)的醛，進(jin)壹(yi)步(bu)氧化成酸；底物(wu)在 360nm 處(chu)有(you)特征吸(xi)收峰(feng)，測(ce)定(ding)360nm 光(guang)吸(xi)收下(xia)降(jiang)的速(su)率，計算(suan)MAO 活性。

試(shi)劑組成和(he)配(pei)制：

需(xu)自(zi)備儀器(qi)和用(yong)品：

天(tian)平(ping)、低(di)溫離心(xin)機(ji)、可(ke)見(jian)分光光度計/酶(mei)標(biao)儀、微量石(shi)英比色皿/96 孔板、蒸(zheng)餾(liu)水。

粗(cu)酶(mei)液提取(qu)：

1、稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 樣品，加(jia) 1 ml 預(yu)冷的提取(qu)液壹(yi)充(chong)分冰浴勻漿，1000g，4℃，離(li)心(xin) 10min，棄(qi)沈(chen)澱(dian)；把(ba)上(shang)清(qing)轉移(yi)到另(ling)壹(yi)預(yu)冷的離心(xin)管，10000g，4℃，離(li)心(xin) 30min，棄(qi)上(shang)清(qing)；加(jia)入 1ml 預冷的提取(qu)液二，震(zhen)蕩混勻(yun)，16000g，4℃，離(li)心(xin) 40min，棄(qi)上(shang)清(qing)；沈(chen)澱(dian)加(jia)入預冷的 1ml 試劑壹(yi)，震(zhen)蕩混勻(yun)，即(ji)粗(cu)酶液（可用(yong)於(yu)可溶(rong)性蛋(dan)白(bai)濃(nong)度測定(ding)）。

2、細(xi)菌、真(zhen)菌：按(an)照(zhao)細(xi)胞(bao)數(shu)量（104 個）：提(ti)取(qu)液體積（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例（建(jian)議 500 萬(wan)細胞(bao)加(jia)入 1ml 提取(qu)液），冰浴超(chao)聲(sheng)波破碎(sui)細胞(bao)（功(gong)率 300w，超(chao)聲(sheng) 3 秒(miao)，間(jian)隔(ge) 7 秒(miao)，總時間(jian) 3min）；然(ran)後(hou) 10000g， 4℃，離(li)心(xin) 10min，棄(qi)沈(chen)澱(dian)；把(ba)上(shang)清(qing)轉移(yi)到另(ling)壹(yi)預(yu)冷的離心(xin)管，10000g，4℃，離(li)心(xin) 30min，棄(qi)上(shang)清(qing)；加(jia)入1.0 ml 預冷的提取(qu)液二，震(zhen)蕩混勻(yun)，16000g，4℃，離(li)心(xin) 40min，棄(qi)上(shang)清(qing)；沈(chen)澱(dian)加(jia)入預冷的 1.0 ml 試劑壹(yi)，震(zhen)蕩混勻(yun)，即(ji)粗(cu)酶液（可用(yong)於(yu)可溶(rong)性蛋(dan)白(bai)濃(nong)度測定(ding)），取(qu)上(shang)清(qing)置(zhi)於(yu)冰上(shang)待(dai)測(ce)。

3、血(xue)清(qing)：直(zhi)接測(ce)定(ding)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計預(yu)熱(re) 30min 以(yi)上(shang)，調節(jie)波(bo)長至(zhi) 360nm，蒸(zheng)餾(liu)水調零。

2、操(cao)作(zuo)表：

混(hun)勻(yun)，於(yu)微量石(shi)英比色皿/96 孔板，對(dui)照(zhao)管(guan)調零，測定 360nm 處吸(xi)光(guang)值(zhi)A1，然後 37℃水浴 60min，對(dui)照(zhao)管(guan)調零，測定 360nm 處吸(xi)光(guang)值(zhi)A2。ΔA=A1-A2 註(zhu)意：空(kong)白(bai)管(guan)只需測(ce)定壹(yi)次。

MAO 活性計(ji)算(suan)公式：

a．用(yong)微量石(shi)英比色皿測(ce)定的計算(suan)公式如下(xia)

1、按(an)蛋(dan)白(bai)含量計算(suan)

酶(mei)活定義：37℃，pH7.6 時，每毫(hao)克蛋(dan)白(bai)質(zhi) 1min 內(nei)轉化 1 nmol 底(di)物(wu)的酶量為壹(yi)個(ge)酶活單位(wei)。

A

DAO 活性（nmol/min / mg prot）= 2、按(an)樣本質(zhi)量計算(suan)：

 d ×V 反總÷（V 樣× Cpr）÷T= 114×ΔA÷Cpr

酶(mei)活定義：37℃，pH7.6 時，每克樣品 1min 內(nei)轉化 1 nmol 底(di)物(wu)的酶量為壹(yi)個(ge)酶活單位(wei)。

A

DAO 活性（nmol/min / g 鮮(xian)重）= d ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T = 114×ΔA÷ W 3、按(an)照(zhao)細(xi)胞(bao)數(shu)量計算(suan)

酶(mei)活定義：37℃，pH7.6 時，每 104 個(ge)細(xi)胞(bao) 1min 內(nei)轉化 1 nmol 底(di)物(wu)的酶量為壹(yi)個(ge)酶活單位(wei)。

A

DAO 活性（nmol/min / 104 cell）=

= 114×ΔA÷細(xi)胞(bao)數(shu)量 4、按照(zhao)液體體積(ji)計(ji)算(suan) 

 d ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xi)胞(bao)數(shu)量）÷T

酶(mei)活定義：37℃，pH7.6 時，每升(sheng)血清(qing) 1min 內(nei)轉化 1 nmol 底(di)物(wu)的酶量為壹(yi)個(ge)酶活單位(wei)

ε：底(di)物(wu)摩(mo)爾(er)消(xiao)光(guang)系(xi)數，1460L /mol /cm；d：比(bi)色皿光(guang)徑，1cm；V 反總：反應(ying)總(zong)體積，0.2ml；V 樣：反應(ying)中樣本體(ti)積，0.02ml；V 樣總：加(jia)入提取(qu)液體積，1ml；Cpr：樣本蛋(dan)白濃(nong)度，mg/ml；T：反應(ying)時間(jian)， 60min，W：樣本質(zhi)量，g

a．用(yong) 96 孔板測(ce)定(ding)的計算(suan)公式如下(xia)

1、按(an)蛋(dan)白(bai)含量計算(suan)

酶(mei)活定義：37℃，pH7.6 時，每毫(hao)克蛋(dan)白(bai)質(zhi) 1min 內(nei)轉化 1 nmol 底(di)物(wu)的酶量為壹(yi)個(ge)酶活單位(wei)。

A

DAO 活性（nmol/min / mg prot）= 2、按(an)樣本質(zhi)量計算(suan)：

 d ×V 反總÷（V 樣× Cpr）÷T= 228×ΔA÷Cpr

酶(mei)活定義：37℃，pH7.6 時，每克樣品 1min 內(nei)轉化 1nmol 底(di)物(wu)的酶量為壹(yi)個(ge)酶活單位(wei)。

A

DAO 活性（nmol/min / g 鮮(xian)重）=  d ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T = 228×ΔA÷ W 3、按(an)照(zhao)細(xi)胞(bao)數(shu)量計算(suan)

酶(mei)活定義：37℃，pH7.6 時，每 104 個(ge)細(xi)胞(bao) 1min 內(nei)轉化 1nmol 底(di)物(wu)的酶量為壹(yi)個(ge)酶活單位(wei)。

A

DAO 活性（nmol/min / 104 cell）=

= 228×ΔA÷細(xi)胞(bao)數(shu)量

4、 按(an)照(zhao)液體體積(ji)計(ji)算(suan)

 d ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xi)胞(bao)數(shu)量）÷T

酶(mei)活定義：37℃，pH7.6 時，每升(sheng)血清(qing) 1min 內(nei)轉化 1nmol 底(di)物(wu)的酶量為壹(yi)個(ge)酶活單位(wei)。

A

DAO 活性（nmol/min /L）= d ×V 反總÷V 樣=228000×ΔA

ε：底(di)物(wu)摩(mo)爾(er)消(xiao)光(guang)系(xi)數，1460L /mol /cm； d：96 孔板光(guang)徑(jing)，0.5cm；V 反總：反應(ying)總(zong)體積，0.2ml；V樣：反應(ying)中樣本體(ti)積，0.02ml；V 樣總：加(jia)入提取(qu)液體積，1ml；Cpr：樣本蛋(dan)白濃(nong)度，mg/ml；T：反應(ying)時間(jian)，60min，W：樣本質(zhi)量，g

註(zhu)意事(shi)項：

吸(xi)光(guang)度變化應(ying)該控(kong)制(zhi)在 0.01～0.8 之(zhi)間(jian)。否則加大樣品量或稀釋(shi)樣品，註(zhu)意計(ji)算(suan)公式中參(can)與計算(suan)的稀釋(shi)倍數(shu)要(yao)相應(ying)改(gai)變。

單胺氧化酶試劑盒 其他(ta)系(xi)列(lie)